灯盏花素固体分散体制备工艺筛选

唐 婷 李福元 刘 艳 邱艳明

湖南中医药高等专科学校药学院，湖南株洲 412000

灯盏花素为灯盏花的主要成分[1]，是一类具有良好抗心血管疾病类的黄酮化合物，具有增加血流量、改善微循环等作用[2-7]。据文献记载灯盏花素口服制剂在体内基本不吸收；静脉注射后，在体内半衰期短且不稳定[8]，因其溶解性问题严重影响了灯盏花素在心血管慢性疾病方面的应用，故开发灯盏花素新制剂有非常广阔的前景。已有多项研究表明，将药物制备成固体分散体后能显著提高药物的溶解度并且增加药物的稳定性[9-13]，也可以将其作为中间品或原料药制备成片剂、胶囊剂等，本研究将为后期制剂的制备奠定良好的基础[14]。

1 仪器与材料

1.1 实验试药

灯盏花乙素标准品（Solarbio，批号：SS8310）；灯盏花素原料药（陕西清雅生物科技有限公司，批号：20190625）；PEG4000（国药集团化学试剂有限公司，批号：20190415）；PEG6000（国药集团化学试剂有限公司，批号：20190326）、泊洛沙姆188（Solarbio，批号：551956）、氢氧化钠（分析纯，湖南汇虹试剂有限公司，批号：20190115）；磷酸二氢钠（分析纯，湖南汇虹试剂有限公司，批号：20180923）；甲醇（分析纯，湖南汇虹试剂有限公司，批号：20190501）；胃蛋白酶（Solarbio，批号：20190211）。

1.2 实验仪器

高效液相色谱法LC-20A（日本岛津）；G1315 紫外检测仪[圣宾仪器科技（上海）有限公司]；RCZ-8A型溶出仪（天津大学精密仪器厂）；电子分析天平（舜宇恒平仪器，精密度为万分之一）；DF-101S 型集热式恒温加热磁力搅拌器（常州市金坛友联仪器研究所）；FZG-1 真空干燥箱（湖南中美科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 标准曲线

通过前期实验得到标准曲线方程为：A=0.761 9C+0.002（r2=0.999 6），提示灯盏花素在浓度为5～30 μg/ml时与A 值呈现良好的线性关系。

2.2 累积溶出率的测定

按照《中华人民共和国药典》2020 版第四部[15]溶出度测定方法（桨法）测定溶出度。转速为80 r/min，分别在0、3、8、10、20、30、45 min 时取样10 ml 后过微孔滤膜，取滤液作为供试品，在波长196 nm 处测定吸光度值。

2.3 固体分散体的制备

2.3.1 熔融法制备固体分散体 精密称定灯盏花素原料药5.0 mg 及PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆188 各3.000 g，先将各载体加热溶解，加入主药，搅拌均匀后，置于冰浴中冷却12 h，固化，置于干燥器中干燥3 d，粉碎，过80 目筛，备用[16-17]。

2.3.2 溶剂法制备固体分散体 精密称定灯盏花素原料药5.0 mg 及PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆188 各3.000 g，置于蒸发皿中，用适量的甲醇溶液溶解后，超声10 min，混合均匀，在恒温60℃的磁力搅拌30 min，然后置于70℃水浴锅中加热，搅拌，使甲醇挥发，将其置于干燥器中平衡3 d，粉碎，过80 目筛，既得灯盏花素固体分散体，置于干燥器中备用[18-19]。

2.3.3 研磨法制备固体分散体 精密称定灯盏花素原料药5.0 mg 及PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆188 各3.000 g，混合均匀，研磨40 min，过80 目筛，备用[20-22]。

2.4 固体分散体制备方法的优选

精密称定灯盏花素原料药5.0 mg，PEG4000 3.000 g，采用“2.3”项下3 种方法，制备灯盏花素固体分散体，按照“2.2”项下操作方法测定固体分散体中溶出度，并且计算累积溶出率。由图1 可知，相同的条件下，按照累积溶出率的大小进行排名：熔融法>研磨法>溶剂法，由此可知熔融法制备灯盏花素固体分散体，其莲心碱的累积溶出率最大，对灯盏花素的增溶作用最强。

图1 固体分散体制备方法筛选

2.5 固体分散体载体材料的优选

在相同条件下，精密称定灯盏花素原料药5.0 mg，PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆188 各3.000 g，按照“2.3.1”项制备固体分散体，按照“2.2”项下操作方法测定固体分散体中溶出度，并且计算累积溶出率，筛选制备载体材料。由图2 可知，相同的条件下，采用不同载体材料制备的固体分散体度累积溶出率的影响大小为：泊洛沙姆188>PEG4000>PEG6000>灯盏花素原料药，由此可知泊洛沙姆188 的累积溶出率最大，对灯盏花素具有增溶效果故选择泊洛沙姆188 为载体材料。

图2 固体分散体载体材料的优选

2.6 药物-载体材料比例考察

以泊洛沙姆188 为载体，按照“2.3.1”项制备灯盏花素固体分散体，药物与载体比例为5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶9 制备固体分散体，按照“2.2”项下操作方法测定固体分散体中溶出度，并且计算累积溶出率。由图3 可知，以泊洛沙姆188 为载体，药物与载体的比例为1∶5 时，对灯盏花素的累积溶出影响最大，增容效果也最明显。

图3 药物-载体材料比例筛选结果

2.7 固体分散体的最佳制备工艺的优选

根据以上单因素考察结果，固体分散体的最佳制备载体材料为泊洛沙姆188，制备方法为熔融法。以固体分散体中灯盏花素的累积溶出率为评价指标，采用L9（34）正交表设计实验[17,23]，筛选最佳制备工艺。由表1～3 可知，因素A 对灯盏花素的溶出率有显著影响（P <0.05）；最佳制备工艺为A2B2C3，即灯盏花素与泊洛沙姆188 的比例为1∶5，采用70℃温度将载体材料溶解，20℃温度冷却即可，可以降低生产成本。

表1 因素水平表

表2 固体分散体正交实验设计方案与结果

表3 累积溶出率方差分析结果

2.8 验证试验

按照上述最佳优化条件，制备灯盏花素固体分散体后，测量其溶出度及灯盏花素累积溶出率，平行3 次。由图4 可知，三批灯盏花素45 min 的累积溶出率分别为86.62%、86.78%、87.21%，平均值为86.84%，表明优选出的工艺稳定可靠，重现性好。

图4 三批灯盏花素固体分散体累积溶出率

2.9 载药量的测定

2.9.1 对照品溶液的制备 精密称定灯盏花乙素标准品5.0 mg，于50 ml 的容量瓶中加入甲醇溶液定容，配成浓度为0.1 mg/ml。

2.9.2 固体分散体及原料药样品的处理 精密称定适量的灯盏花素固体分散体5.000 g 和原料药（含药量保持一致）5.0 mg，加甲醇溶液定容到50 ml，用0.45 μm有机微孔滤膜过滤。

2.9.3 色谱条件 色谱柱为Athena C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇∶水（60∶40）；流速为0.5 ml/min，柱温为30℃，进样量为10 μl，检测波长为196 nm[23]。色谱图见图5。

图5 高效液相色谱图

2.9.4 标准曲线 分别从对照品储备液中精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml 置于10 ml 容量瓶中，定容得到对应浓度的对照品溶液，用0.45 μm 微孔滤膜过滤，进样测定。以灯盏花素的峰面积Y 对应质量浓度X 进行线性回归，得回归方程为Y=52.31X-14.21，r=0.999 7，表明其在5～30 g/ml 线性关系良好。

2.9.5 精密度实验 分别量取上述低、中、高浓度的对照品溶液，按照“2.9.3”色谱条件下于1 d 内进样5 次，测定灯盏花素日间精密度，再连续进样3 d，测定其日间精密度。结果显示，各对照品溶液的日内精密度的RSD 为0.32%，日间精密度的RSD 为0.29%，结果表明精密度良好。

2.9.6 重复性实验 精密称取同一批灯盏花素固体分散体样品6 份，制成供试品后，按照“2.9.3”项下方法进样20 μl，测定峰面积，计算得到RSD 为0.56%，表明该方法的重复性较好。

2.9.7 稳定性实验 取“2.9.2”项下的灯盏花素固体分散体供试品溶液，按照“2.9.3”项下的色谱条件，分别在0、2、4、6、8、12、24、36、72 h 取样进行测定，测得灯盏花素固体分散体的峰面积RSD 为0.61%，表明供试品溶液在72 h 内稳定。

2.9.8 加样回收试验 取已知浓度的灯盏花素固体分散体，加入已知浓度的对照品，按照“2.9.3”项下色谱条件，测定峰面积，带入标准曲线中计算实际质量浓度，同时计算回收率，结果见表4。计算平均回收率为97.95%，RSD 为0.98%，表明该方法测定灯盏花素的含量回收率高，准确性好。

表4 加样回收试验结果

2.9.9 固体分散体中灯盏花素含量的计算 按照“2.9.3”项下条件测定固体分散体灯盏花素的含量，平行测定三批产品，结果显示三批固体分散体的载药量为（1.95±0.10）mg/g。

3 讨论

本研究结果显示，灯盏花素固体分散体的最佳制备载体为泊洛沙姆188，最佳制备工艺为熔融法，正交实验优选出的最佳工艺为药物与载体材料的比例为1∶5，熔融温度为70℃，冷却温度为20℃。采用最佳工艺制备的三批产品其重现性较好，通过高效液相色谱法测量的载药量为（1.95±0.10）mg/g。

灯盏花素在水中的溶解度比较低，采用泊洛沙姆188 将其制备成固体分散体后能提高其在体外的溶解度及溶出度，其原因可能是灯盏花素与泊洛沙姆188 结合以后，药物在其载体中的存在形式发生了较大的改变有关，药物以晶体或者无定型的状态存在有关。本研究将为其制备成其他剂型提供参考价值。