高效液相色谱法检测绞股蓝茶中的蔗糖含量

◎ 马 倩，杜 雨

（安康市质量技术检验检测中心，陕西 安康 725000）

绞股蓝是一种被人们广泛认知的药食同源植物，分布于中国陕西南部和长江以南各省[1]。早期绞股蓝作为一种草药被用于中国民间医药中，具有清热解毒、止咳祛痰的功效，长期喝绞股蓝茶可以保护人体脏器及内分泌器官，从而达到降血糖和改善糖代谢的作用[2-3]。

现代人对食品安全的要求不再仅限于吃得好，还要吃得健康。糖是普通食物中的主要成分之一，但是对一些特殊的消费群体，例如糖尿病患者和肥胖症患者的消费者，他们对糖的摄入量有着严格的要求，因此有必要对食物中的糖含量进行检测，以免消费者误用[4]。糖类主要包括葡萄糖、果糖、蔗糖等，高效液相色谱技术具备较高的灵敏度，能对碳水化合物进行测定和分析，能对多糖类物质进行准确判定，提高检测的准确性和科学性，受到检测人员的青睐[5-6]。

目前，国内外关于绞股蓝茶中蔗糖的研究鲜有报道，我国也没有出台绞股蓝茶中蔗糖含量的测定方法标准。本文使用高效液相色谱法对样品的前处理条件进行优化试验，建立了一种高效、可靠的绞股蓝茶中蔗糖测定的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市售绞股蓝22个样品。蔗糖标准物质（99.7%，中国计量科学研究院）；色谱纯乙腈；分析纯亚铁氰化钾；分析纯乙酸锌；超纯水。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪LC-20T—示差折光检测器（岛津公司）；H1850台式离心机（湖南湘仪试验室仪器开发有限公司）；PL-820J智能超声清洗器（上海五湘仪器仪表公司）；电子分析天平BS-224S（0.1 mg，赛多利斯科学仪器有限公司）；电子天平JA5003（0.001 g， 上海良平仪器仪表有限公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 标液配制

（1）蔗糖标准物质溶液（20 mg·mL-1）。准确称取蔗糖标准物质0.5000 g于50 mL烧杯中，加少量超纯水溶解，转移至25 mL容量瓶中，烧杯经超纯水少量多次淋洗，淋洗液一并转移至容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混匀。4 ℃冰箱保存，有效期一个月。

（2）蔗糖标准物质工作液。配制浓度为0.1 mg·mL-1、 0.8 mg·mL-1、2.0 mg·mL-1、4.0 mg·mL-1、6.0 mg·mL-1、10.0 mg·mL-1标准系列使用液，临用时现配。

（3）亚铁氢化钾溶液。称取10.6 g亚铁氢化钾，用超纯水溶解定容至100 mL。

（4）乙酸锌溶液。称取21.9 g乙酸锌，用少量水溶解后，加入3 mL冰乙酸，用超纯水定容至100 mL。

1.3.2 样品制备及前处理

取100 g绞股蓝茶样品，用粉碎机粉碎至粉末状，装入样品袋中，密封，标明唯一性标记。准确称取均匀绞股蓝茶样品约5.000 g，置于50 mL刻度离心管中，加入大约20 mL超纯水，涡旋混匀，超声提取，冷却后，加入亚铁氰化钾溶液及乙酸锌溶液后，混匀，定容，离心，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜于样品瓶中，上机检测。

1.3.3 色谱条件

流动相：乙腈+超纯水=70+30，流速：1.0 mL·min-1，柱温40 ℃，进样量：20 μL。

色谱柱：氨基的色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），广州研创生物技术发展有限公司。

示差折光检测器条件：温度40 ℃。

1.3.4 样品前处理条件的优化

（1）超声时间。在亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液加入量为各3 mL，转速8000 r·min-1，离心3 min的条件下，设置超声时间分别为5 min、10 min、20 min、 30 min、40 min，进行样品制备。

（2）亚铁氰化钾、乙酸锌溶液加入量。在超声20 min，转速8000 r·min-1，离心3 min的条件下，分别设置亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液加入量为各 0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL，进行样品制备。

（3）离心转速。在超声20 min，亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液加入量为各2.0 mL，离心3 min条件下，设置转速分别为3000 r·min-1、5000 r·min-1、 8000 r·min-1、10000 r·min-1，进行样品制备。

2 结果与分析

2.1 超声时间优化结果

优化结果如图1所示，蔗糖含量随着超声时间的延长而不断增加，增加到最高值后基本保持不变。分析其原因，可能是因为超声时间较短时，蔗糖没有被完全提取，蔗糖被完全提取后，再增加超声时间，含量便几乎不再变化，因此，考虑时间成本以及蔗糖含量，选择超声时间为20 min。

图1 超声时间优化结果图

2.2 亚铁氰化钾、乙酸锌溶液加入量优化结果

优化结果如表1所示，亚铁氰化钾、乙酸锌溶液加入量不影响蔗糖含量，随着加入量的增加，杂质峰有所减少，加入量达到一定程度，杂峰数量几乎不再变化。分析其原因，可能是因为样品含有一定量蛋白质，而加入2 mL亚铁氰化钾和乙酸锌时，已将蛋白质完全沉淀，因此，考虑试剂成本，选择加入量为2 mL。

表1 亚铁氰化钾、乙酸锌加入量优化结果表

2.3 离心转速优化结果

优化结果如表2所示，离心机转速大小只与分离效果有关，同等时间，转速越大，分离效果越佳，考虑离心效果和仪器成本，选择8000 r·min-1离心3 min。

表2 离心机转速优化结果表

经上述优化，得到样品前处理最优流程如下。准确称取绞股蓝茶样品5.000 g左右，置于50 mL刻度离心管中，加入大约20 mL超纯水，涡旋混匀，超声20 min，冷却后，加入亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液各2.0 mL，混匀，定容，以8000 r·min-1的转速，离心3 min，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜于样品瓶中，上机检测。

2.4 线性回归方程

将蔗糖标准使用液依次按照色谱条件上机测定，以标准工作液的浓度为纵坐标（y），以峰面积为横坐标（x），绘制标准曲线，得到图2。线性方程为y=239800x+19980，R2=0.9998。

图2 蔗糖标准溶液校准曲线图

2.5 方法检出限与回收率试验

按照前述方法处理，以未添加蔗糖的绞股蓝茶样品为基质，在同等条件下添加标液含量为0.1 g/100 g、2.0 g/100 g、6.0 g/100 g蔗糖标品，进行3个水平的加标回收试验，每个水平各重复6次，加标结果见表3。结果表明，依据优化的最佳条件进行试验，所得的蔗糖的回收率在85.9%～92.3%，RSD在2.19%～3.07%，该方法的检出限为0.10 g/100 g。

表3 绞股蓝茶中蔗糖的加标回收率表

2.6 样品的检测与分析

在对市场上的22份绞股蓝茶样品（编号为1～22）检测后发现，不同绞股蓝茶蔗糖含量存在一定的差异，检测结果见表4。样品中蔗糖最低含量为未检出（＜0.10 g/100 g），最高含量为1.9 g/100 g。一些绞股蓝茶蔗糖含量计算得到负值，是因为绞股蓝茶本身蔗糖含量较低，测量存在一定误差，结果以未检出计。未检出蔗糖含量的样品有13个，检出样品含量范围在0.32～1.90。

表4 绞股蓝茶样品蔗糖含量检测结果表

3 结语

目前市面上有人工添加蔗糖的现象存在，可能有以下原因。①绞股蓝自重较轻，为了增重，不法商贩会通过添加蔗糖来达到增加成品重量的目的。②绞股蓝茶口感微苦，人们为了调节口感而添加蔗糖。目前，国内外关于绞股蓝茶中蔗糖含量的检测方法、判定标准没有明确的相关规定，监管部门和检测部门缺乏标准技术支撑，对将蔗糖掺入绞股蓝茶的行为只能依靠生产领域现场取证和现场查处，执法难度大，让不法商人有机可乘。本文利用高效液相色谱法检测绞股蓝茶中蔗糖的含量，样品经水超声提取，去除蛋白等杂质后，进行定性定量分析，蔗糖的回收率在85.9%～92.3%，RSD%在2.19～3.07，方法检出限 0.10 g/100 g，适合于绞股蓝茶中蔗糖的检测。