茵黄丸对高脂血症模型大鼠的降脂作用研究

禹小波 郭文厂 唐庆芝 李 盼 裴 颖 周佩佩 陈大朋 孔贞贞

1.山东省济宁市中医院药剂科，山东济宁 272000；2.大连医科大学实验动物中心，辽宁大连 116044；3.泰山护理职业学院药学检验系，山东泰安 271000

高脂血症是由于脂肪代谢或运转异常，使血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterin，LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）过高或过低而引发冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）、高血压等心脑血管疾病[1]。临床研究证明载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，ApoA1）及载脂蛋白B （apolipoprotein B，ApoB）也是预测动脉粥样硬化性心血管疾病比较有价值的指标[2]。其中ApoB是构成LDL的重要成分，而ApoA1则是构成HDL的主要成分[3-4]。

他汀类药物在降血脂方面具有显著疗效，但同时可能出现横纹肌溶解、肝肾功能损伤等严重不良反应[5-6]。山楂、何首乌、白术、栀子、郁金等单味中药[7]或大柴胡汤[8]、泽泻汤[9]、葛根芩连汤[10]等中药复方均具有显著的降血脂效果。济宁市中医院（本院）将茵陈、郁金、何首乌、山楂等七味中药经过配制成的院内制剂茵黄丸具有清热利湿、疏肝健胃、活血化瘀的作用，但其具体作用机制研究较少。本研究旨在探讨不同剂量的茵黄丸对高脂血症模型大鼠的降脂作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 2～3周龄Wistar大鼠48 只，体重180～220 g，购于大连医科大学实验动物中心。并于大连医科大学实验动物中心SPF级动物房饲养[SYXK（辽）2018-0007]。饲养温度为20℃～24℃，饲养湿度为50%～60%，12 h光照/黑暗周期。所有动物试验操作均符合大连医科大学动物科学实验伦理学的要求。

1.1.2 主要试剂与药物 TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1及ApoB检测试剂盒均购自江苏科特生物科技有限公司。阿托伐他汀钙片（齐鲁制药有限公司，批号：1A0784DL3）。茵黄丸（批号：20200712），由茵陈、郁金、何首乌、山楂等七味中药配制而成。普通饲料购自大连医科大学动物科学院实验动物中心。高脂饲料配方为猪油20 g、胆固醇10 g、蔗糖10 g、丙硫氧嘧啶1 g、吐温-801 ml、丙二醇2 ml及10%胆盐20 ml，加蒸馏水至100 ml，制备好之后存储于4℃冰箱备用。

1.2 方法

1.2.1 动物造模 空白对照组8只大鼠给予基础普通饲料喂养，剩余40只大鼠为造模组，饲喂高脂饲料建立高脂血症大鼠模型。大鼠喂养2周后，禁食不禁水12 h。眼眶静脉丛采血，测定TG、TC、LDL-C等血脂指标，检测模型制造是否成功。

1.2.2 动物分组 挑选造模组大鼠随机分为5组：茵黄丸低剂量组、茵黄丸中剂量组、茵黄丸高剂量组、阿托伐他汀钙组及高脂血症模型组，每组各8只。

1.2.3 给药方法及血样采集 根据人与实验动物用药剂量的换算方法，计算公式：B（dose）=W×A（dose），其中W为折算系数，成人与大鼠之间的折算系数为6.25。茵黄丸低剂量组按每天0.375 g/kg剂量给药，茵黄丸中剂量组按0.75 g/kg剂量给药，茵黄丸高剂量组按1.5 g/kg剂量给药（分别相当于人用剂量的3、6、12倍）。空白对照组及高脂血症模型组每天给予等体积生理盐水。阿托伐他汀钙组每天给予0.06 g/kg剂量的阿托伐他汀钙片。持续给药2周。末次给药后禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛后大鼠心脏动脉取血，分离血清进行相关生化指标测定。

1.3 相关指标的测定

1.3.1 血清生化指标测定 取制备的血液按照试剂盒方法测定TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1及ApoB含量。

1.3.2 肝脏组织切片 采用苏木精-伊红（hematoxylin eosin，HE）染色方法[11]，观察大鼠肝脏病理学形态变化。采血结束后所有大鼠均采用颈椎脱臼法处死。解剖收集肝脏组织，用生理盐水清洗后立即置于4%多聚甲醛中固定24 h，制备常规石蜡包埋组织切片。对组织切片进行HE染色并观察肝脏组织形态学变化。

1.4 统计学处理

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，各给药组数据与同期对照组数据分别进行显著性检验，两组间比较采用独立样本t检验，多组样本间的比较检验正态性和方差齐性符合后，采用单因素方差分析和Post Hoc LSD进行组间统计分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 动物模型成功性考察

造模组血清TC、TG、LDL-C含量较空白对照组显著升高，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。表明高脂血症大鼠模型建造成功。见表1。

表1 连续喂养2周高脂饲料对大鼠血脂水平的影响（mmol/L，±s）

表1 连续喂养2周高脂饲料对大鼠血脂水平的影响（mmol/L，±s）

注 TG：三酰甘油；TC：总胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇

组别 n TG TC LDL-C空白对照组 8 0.51±0.03 1.82±0.11 0.53±0.09造模组 40 1.01±0.03 3.26±0.21 2.18±0.26 t值 37.720 17.108 17.097 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 茵黄丸对大鼠体重的影响

实验持续4周后，与高血脂症模型组比较，茵黄丸低剂量组、茵黄丸中剂量组、茵黄丸高剂量组均能显著降低高脂血症大鼠体重，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。并且茵黄丸剂量越大，降体重作用越显著。见表2。

表2 茵黄丸对高脂血症模型大鼠体重增值的影响（g，±s）

表2 茵黄丸对高脂血症模型大鼠体重增值的影响（g，±s）

注 与高脂血症模型组比较，aP ＜ 0.05。体重增值为大鼠喂养4周后质量的增加值

组别 n 体重质量增值空白对照组 8 187.57±11.40高脂血症模型组 8 273.23±7.85茵黄丸低剂量组 8 217.53±10.79a茵黄丸中剂量组 8 215.40±14.96a茵黄丸高剂量组 8 182.50±5.55a阿托伐他汀钙组 8 177.07±17.81a F值 39.164 P值 0.000

2.3 茵黄丸对高脂血症模型大鼠肝脏病理学变化的影响

HE 染色显示，空白对照组肝组织结构正常，肝细胞无脂肪变性。模型组大鼠肝细胞呈现不同程度脂肪变性，肝脏组织内可见大小不一的脂滴。与高脂血症模型组比较，茵黄丸低剂量组、茵黄丸中剂量组、茵黄丸高剂量组肝脏组织脂滴数量降低显著。见图1。

图1 茵黄丸对高脂血症大鼠肝脏的影响（HE染色，100×）

2.4 茵黄丸对高脂血症大鼠血清血脂水平影响

茵黄丸低剂量组、茵黄丸中剂量组、茵黄丸高剂量组对高脂血症大鼠血清TC、TG均有降低作用，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表3。

表3 茵黄丸对高脂血症大鼠血清TC、TG的影响（mmol/L，±s）

表3 茵黄丸对高脂血症大鼠血清TC、TG的影响（mmol/L，±s）

注 与高脂血症模型组比较，aP＜0.05；TC：总胆固醇；TG：三酰甘油

组别 n TC TG高脂血症模型组 8 4.24±0.27 1.25±0.09 茵黄丸低剂量组 8 3.67±0.22a 0.95±0.08a茵黄丸中剂量组 8 3.29±0.57a 0.85±0.08a茵黄丸高剂量组 8 3.11±0.69a 0.58±0.04a阿托伐他汀钙组 8 2.77±0.56a 0.57±0.02a F值 6.323 82.727 P值 0.002 0.000

2.5 茵黄丸对高脂血症大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C水平影响

与高脂血症模型组比较，茵黄丸低剂量组高脂血症大鼠血清ApoA1、HDL-C差异无统计学意义（P＞ 0.05），而茵黄丸中剂量、茵黄丸高剂量组对于高脂血症大鼠血清ApoA1，HDL-C均具有显著升高作用，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。茵黄丸低剂量组、茵黄丸中剂量组及茵黄丸高剂量组对高脂血症大鼠血清ApoB，LDL-C均具有显著降低作用，差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。见表4。

表4 茵黄丸对高脂血症大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C的影响（±s）

表4 茵黄丸对高脂血症大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C的影响（±s）

注 与高脂血症模型组比较，aP ＜ 0.05。ApoA1：载脂蛋白A1；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；ApoB：载脂蛋白B；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇

组别 n ApoA1（g/L） HDL-C（mmol/L） ApoB（g/L） LDL-C（mmol/L）高脂血症模型组 8 0.09±0.02 0.66±0.10 0.23±0.02 4.18±0.51茵黄丸低剂量组 8 0.12±0.02 0.69±0.02 0.14±0.02a 3.47±0.36a茵黄丸中剂量组 8 0.13±0.01a 0.90±0.06a 0.13±0.04a 2.54±0.38a茵黄丸高剂量组 8 0.14±0.02a 0.98±0.07a 0.12±0.03a 1.51±0.10a阿托伐他汀钙组 8 0.17±0.02a 1.050±0.14a 0.11±0.03a 1.01±0.25a F值 13.169 20.906 15.664 71.027 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

3 讨论

高脂血症可显著增加动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管疾病的发病率，危害人类健康[12]。有效控制血脂异常，对防治动脉硬化性心血管疾病等具有重要意义。血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C等含量在一定程度上反映机体脂肪代谢情况，是监测血脂变化的重要指标[13]。本研究发现，茵黄丸可通过降低TC、TG、LDL-C、ApoB浓度，升高HDL-C、ApoA1浓度，进而改善高脂血症大鼠脂代谢异常。同时脂代谢异常可能会导致脂肪尤其是TG在内脏器官或者皮下组织沉积，导致体重增加。茵黄丸可通过促进大鼠TG代谢，减少脂肪在机体的沉积，进而降低大鼠体重和肝脏脂滴数量，保护肝脏细胞。而茵黄丸的主要成分茵陈、郁金、何首乌及山楂共同发挥调节血脂作用。

茵陈的主要成分为对羟基苯乙酮，具有调血脂、促进胆汁和胆汁酸分泌、降低胆固醇分泌的功效[14]。文献报道，茵陈提取物可有效降低小鼠血清及组织TC、TG含量，且具有抗脂质过氧化和抗肝细胞坏死的作用[15-16]。何首乌的主要成分为二苯乙烯苷及蒽醌类，可显著降低高脂血症模型小鼠血清TC、TG含量，下调主动脉斑块NF-κB蛋白表达，降低动脉粥样硬化指数等[17]。山楂中的山楂黄酮及山楂籽油均具有调血脂作用。山楂黄酮可显著降低大鼠血清TC、TG、LDL浓度；山楂籽油可通过抑制肝脂酶、脂蛋白脂酶及卵磷脂胆固醇脂酰转移酶的活性，从而降低TC、TG含量，促进HDL合成[18]。郁金提取物能显著降低高胆固醇模型兔血清脂质过氧化物酶，提高α-生育酚和辅酶Q水平而发挥调血脂作用[19]。

茵陈、何首乌、山楂及郁金等在临床常用于降血脂。本研究初步探讨配伍中成药茵黄丸降血脂作用机制。后期将继续深入研究茵黄丸是否通过抗脂质过氧化[20]、调节炎症因子和炎症相关细胞来抑制炎症反应及毒性作用等方面发挥降血脂作用，为茵黄丸的临床应用提供更全面的科学依据。