DEFB1 基因rs11362 位点多态性与龋病易感性的Meta 分析

胡晓潘 周建业 周海静 李志强 刘耀新

1.西北民族大学口腔医学院，甘肃 兰州730000；2.甘肃省口腔疾病研究重点实验室，甘肃 兰州730000

龋病是一种多因素共同作用的慢性感染性疾病，是口腔的多发病和常见病，有高达60%～90%的学校适龄儿童患龋病［1］。据第四次全国口腔流行病学调查显示，12～15 岁青少年恒牙患龋率分别为38.5%、41.2%、43.3%、44.4%，青少年患龋率随年龄逐年递增，防龋任务严峻［2］。随着分子生物学和人类基因组学研究的深入，越来越多的证据显示，基因遗传因素在龋病的发生和发展中扮演着重要的角色，患龋风险与宿主易感基因的多态性有关［3-4］。目前证据显示，与龋病易感性相关的基因主要集中在以下四类：釉质形成基因、唾液蛋白基因、免疫应答基因以及味觉基因［5］。β 防御素1（beta defensin 1，DEFB1）是一种小分子抗微生物多肽，其广泛存在于唾液中，作为机体防御性物质参与天然免疫应答，具有明显的抗微生物作用，研究发现唾液DEFB1 的表达水平与龋病的发生密切相关［6-7］。DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病的关联研究已有多篇文献报道，但是研究结论并不完全一致［8-9］。本研究将借助Meta分析综合评估相关研究，探究DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病发病风险的确切关系。

1 资料与方法

1.1 检索策略 采用计算机系统检索PubMed、Web of Science、Springerlink、Embace、维普、CNKI、万方以及CBM等数据库，以“β 防御素1，基因多态性，龋病”为中文关键词，以“DEFB1/beta defensin 1，Caries，Gene polymorphism”为英文关键词，收集有关DEFB1 基因rs11362多态性与龋病易感性的相关文献，包括学位论文。其他可利用的文献均采取文献追溯的方法来确定，文献检索时间截止到2020 年12 月1 日。

1.2 纳入和排除标准

1.2.1 纳入标准。①研究均为病例对照研究；②DEFB1基因rs11362 多态性与龋病发病风险的相关文献；③各研究实验设计和方法相似；④文献数据完整，纳入文献的对照组需遵循HWE 定律；⑤文章以中文或英文形式全文发表。

1.2.2 排除标准。①无对照组或未提供病例基本信息的文献；②重复报道的文献以及信息少、无法利用的文献；③综述，会议论文或未全文发表的摘要等。

1.3 提取数据及文献质量评价 本研究由两名研究者进行文献筛选，交叉核对，不一致时进行讨论解决或由第三位研究者协助解决。提取信息包括：第一作者、文献发表时间、国家/地区、人种、基因检测类型、样本量及两组人群的基因组数量等。文献质量评价采用Newcastle-Ottawa Scale（NOS）［10］量表，以病例组和对照组的选择、组间可比性及危险因素的暴露情况进行评价，当质量评分≥4 分时，认为质量可靠；评分≥7 分时，认为是高质量的研究。

1.4 统计学分析 使用Stata 15.0 软件进行Meta 分析，计量资料利用均数差（MD）为效应指标，分类变量采用相对危险度（RR）为效应指标。研究的各效应量均给出点估计值和95%CI，采用χ2检验评估各研究结果间的统计学异质性（检验水准为α=0.1），并结合I2定量判断异质性的大小。当各研究间无统计学异质性（I2＜50%，P＞0.1），则采用固定效应模型进行Meta 分析；当各研究间存在统计学异质性，则进一步分析异质性来源，在排除明显临床异质性的影响后，采用随机效应模型进行Meta 分析。当各研究结果存在明显的临床异质性时，则采用亚组分析处理。Meta 分析的检验水准设为α=0.05。

2 结果

2.1 文献检索结果 初检出相关文献27 篇，经全文筛选后，发现DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病发病风险密切相关的病例对照研究9 篇。严格按照纳入标准和排除标准逐次剔除4 项研究（1 项研究人群对照组不遵循HWE 定律［11］，有2 项研究未提供详细的基因型和等位基因频率［12-13］，1 项研究为会议摘要［14］）。最终纳入病例对照研究5 篇，其中岳海泉等［15］和Oliveira D 等［8］2 项研究包含两个不同民族或地域的独立研究，可各自视为2 项病例对照研究。因此，本次Meta分析共纳入7 项病例对照研究（5 篇英文，2 篇中文）。其中有5 项研究对象为Caucasian，2 项研究为Asian，可纳入的研究对象共计1 696 例（病例组905 例，对照组791 例），纳入研究的基本情况见表1。

表1 纳入研究的基本特征

2.2 Meta 分析结果 如图1 和表2 所示，异质性检验结果显示在显性模型（CC+TC vs TT）中各研究间不存在统计学异质性（Ph=0.45，I2=0.0%），故采用固定效应模型进行Meta 分析，结果显示DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病发病风险无明显相关性（P=0.07，OR=0.77，95%CI=0.58～1.02）。如表2 所示，异质性检验结果显示，在显性模型（CC vs TT）中各研究间存在统计学异质性（Ph=0.08，I2=47.5%），故采用随机效应模型进行Meta 分析，结果显示DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病发病风险无明显相关性（P=0.23，OR=0.76，95%CI=0.49～1.19）。同样的，在（C vs T）和（CC vs TC+TT）模型中各研究间均存在显著异质性，采用随机模型进行合并分析，结果显示在等位基因C vs T 模型及隐形模型CC vs TC+TT中均未发现DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病存在显著相关性（C vs T：P=0.42，OR=0.89，95%CI=0.67～1.19；CC vs TC+TT：P=0.86，OR=0.96，95%CI=0.61～1.52）。

图1 DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病易感性的关系（CC+TC vs TT）

2.3 亚组分析结果 在各个模型下，按不同人种进行亚组分析，结果未发现DEFB1 基因rs11362 多态性与龋病易感性在Caucasian 及Asian 人种中具有显著相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 Meta 分析结果

2.4 发表偏倚 各模型Meta 分析未见明确的发表偏倚。以显性模型CC+TC vs TT 为例（图2），利用Begg's test绘制漏斗图，结果纳入的研究完整地出现在图上，且以合并效应量OR 值为中心散开分布，基本对称，呈倒置漏斗型。进一步采用Egger's test 进行检验，结果显示P=0.430，表明各模型纳入合并分析的研究无明确的发表偏倚。

图2 发表偏倚分析漏斗图（CC+TC vs TT）

2.5 敏感性分析 在CC+TC vs TT、C vs T、CC vs TT 及CC vs TC+TT 4 种模型中分别进行逐一剔除敏感性分析，剔除前后Meta 分析总效应量未发生明显变化。

3 讨论

龋病的发生、发展与宿主因素、环境因素及其交互作用有着密切的联系，基因遗传、唾液、微生物以及抗菌肽等多种影响因素都扮演着重要的角色［16-17］。来源于唾液中的β 防御素是由β 防御素基因表达的一种小分子多肽，具有良好的抗微生物性能，可在生物体和环境间形成第一道免疫屏障，有研究［6，9］发现唾液β 防御素-1 的浓度与龋病发病风险呈负相关，提示β 防御素-1 对抵抗龋病的发生有重要的作用。

DEFB1 基因定位于人8p23.1，由36 个氨基酸组成，约7.0kb，存在多个基因多态性位点，rs11362 位点（C/T）位于基因的启动子区域。2010 年，Ozturk A 等［7］首次报道了DEFB1 基因rs11362 位点基因多态性与龋病易感性的关系，研究发现基因变异使得人群患高龋的风险提高了5.4 倍（P=0.007；OR=5.4；95%CI=1.58～18.44）。2013年，在一项对唇腭裂儿童患龋易感性的关系研究中，研究者［18］发现，rs11362 等位基因C 携带者患龋风险增加了3.16 倍（P=0.031；OR=3.16；95%CI=0.97～10.62），然而该研究对象全部为唇腭裂患儿，而非健康人群。同年，岳海泉等［15］对355 例汉族和裕固族人群患龋风险与rs11362 基因多态性进行了关联研究，结果发现以CC 为参照，TC 基因型使得裕固族人群患龋风险降低了2.3倍（OR=0.438；95%CI=0.201～0.783），然而研究中的汉族人群未发现相关性，提示遗传变异可能与种族相关。随后的一项关于土耳其2～5 岁儿童乳牙患龋风险的研究中［13］未发现rs11362 位点基因多态性与其相关，而另一项关于意大利成人恒牙患龋风险的研究中［12］，研究者却发现T 等位基因携带者可增加人群的患龋风险，与前所述的研究结论不一致，然而这两项研究均未给出具体的基因型频率，仅提供了P 值或者是OR（95%CI）值，笔者曾试图联系并获得详细的数据，但最终仍无法获得，因此，这两项研究没有出现在Meta 分析模型中。同样地，2016 年，Yildiz G 等［11］对土耳其成人恒牙患龋风险的研究中，结果也发现T 等位基因携带者可使人群的患龋风险提高5.5 倍，然而令人遗憾的是，经过反复核算，该研究人群对照组不遵循HWE 定律（P=0.001），因此，该项研究也未出现在Meta 分析模型中。2017 年，Lips A 等［9］研究发现巴西地区儿童β 防御素-1 的浓度与龋病发病风险呈负相关，但该研究并没有发现rs11362 位点基因多态性与患龋风险有显著关联性。随后Oliveira D 等［8］分别对巴西地区两组青少年人群（Manaus 和Ribeirao Preto）进行了相关多态性研究，结果仅发现Ribeirao Preto 地区儿童在混合牙列组患龋风险与rs11362 基因多态性显著关联（P=0.02），研究结论在不同地区不同组别中存在差异。

本研究应用Meta 分析方法较为全面地分析了DEFB1 基因rs11362 位点基因多态性与龋病易感性及患龋风险的关系，以基因型CC 为参照，结果未发现二者存在明显关联性（P＞0.05），按人种进行亚组分析，结果同样没有发现二者存在显著相关性（P＞0.05），因此，Meta 分析结果提示DEFB1 基因rs11362 位点多态性可能与患龋风险无关。这与前述的某些单项研究结论不一致，可能与研究的样本量大小有关。本研究对符合纳入标准的多项独立研究进行合并分析，共涉及905例病例患者，791 例对照人群，在一定程度上克服了样本量小的局限性，较大的样本量使得研究结果可信度更高。本次研究，未发现明确的发表偏倚，在敏感性分析中Meta 分析总效应量在剔除前后均未发生明显改变，以上结果提示本次Meta 分析研究结果较为可靠。尽管如此，本研究也存在一定的不足：①龋病是一种多基因引起的基因遗传疾病，研究单基因单位点基因多态性可能影响结果的全面性，提示后期需要对多个基因多个位点多态性进行关联及交互研究；②年龄是影响患龋风险的重要因素，原始研究之间年龄范围跨度相对较大，可能影响结果的可靠性，建议后期研究要在控制年龄因素影响的前提下，进行大样本人群的验证研究；③病例对照组按照DMFT/DMFS 的分组标准不够统一，饮食习惯及口腔卫生状况的不一致性也可能造成结果的不准确性，需要后期研究加以考虑；④本研究纳入的文献仅限定在中英文文献，可能有其他语种的相关文献遗失，即使未发现明显的发表偏倚，但不能排除发表偏倚存在的可能。

综上所述，综合现有证据尚未发现DEFB1 基因rs11362 位点多态性与龋病患病风险存在显著关联性，其与龋病发生发展的确切关系还有待后期更全面更科学的评价，建议后期研究要把控好研究样本的一致性，开展更多高质量的大样本人群研究，建议采用定性分析和定量分析相结合，将易感基因多态性和其他影响因素相结合，并进行综合分析评价，为龋病的早期预防、早期诊断和早期治疗提供更加科学合理的防治策略。