气相色谱-质谱法检测川芎定痛胶囊的挥发油成分*

佟彬良，杨泽康，刘潇琳，张卜文，颜文，周春华△

（1.河北医科大学第一医院药学部，河北 石家庄 050031；2.河北医科大学药学院，河北 石家庄 050017）

川芎定痛胶囊是由河北医科大学第一医院制剂室研制的中药复方制剂（批准文号为冀药制字Z05000005），由川芎、绞股蓝、延胡索、白芷、细辛、全蝎6 味药材组方，具有调和气血、平肝熄风、活络安神止痛等功效，用于偏头痛、紧张性头痛、丛集性头痛不伴外感症状者［1］。中医认为，疼痛主要分为“不荣则痛”“不通则痛”，不荣为气血两虚，不通为气滞血瘀。本品主治气滞血瘀型疼痛，气滞血瘀可因外感风、湿、寒或情志内伤，肝郁气滞等引起。方中，川芎为君药，活血行气，与延胡索有协同作用；细辛驱风散寒；白芷驱风燥湿散寒；全蝎息风解痉、活血化瘀，但活血易导致气虚；绞股蓝起益气健脾作用，其性寒，其余5 味药性温，药性调和，防止服药者阳重成火。现代药理学研究表明，川芎具有抗氧化、保护神经、抗炎、抗菌等作用，含阿魏酸、绿原酸、苯肽类成分如藁本内酯及其衍生物等［2-3］；延胡索的主要药效物质为生物碱类成分［4］；白芷含有挥发油和香豆素类等化学成分，其中香豆素类生物活性最强［5］；绞股蓝主要成分为人参皂苷Rb及绞股蓝皂苷［6］；细辛中主要活性成分为挥发油［7］。川芎定痛胶囊内容物为上述6味中药的提取物，成分复杂，主要含有机酸类、生物碱类、香豆素类、三萜皂苷、挥发油等活性成分。目前，川芎定痛胶囊挥发油成分研究中多局限于单一成分药材或各个指标性成分进行定性定量检测，但单一成分难以代表制剂的有效成分。为此，本研究中采用气相色谱-质谱（GC -MS）法分离并分析了胶囊中挥发油的化学成分，为其物质基础、质量控制、药理活性的研究提供试验依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890B -7000C 型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent 公司），配有Mass Hunter 质谱工作站，美国国家标准与技术研究院（NIST）标准质谱图库；10 mL挥发油提取器（天长市唐氏实验仪器有限公司）；BP121S 型电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司，精度为万分之一）。

1.2 试药

川芎定痛胶囊（河北医科大学第一医院医院制剂，批号为191013）；乙酸乙酯（色谱纯），石油醚（分析纯），购于天津科美尔化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与质谱条件

2.1.1 GC 条件

色谱柱：DB -17MS 毛细管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 µm）；程序升温：色谱柱初始温度为60 ℃、保持2 min，以3 ℃/ min 的速率升至120 ℃、保持2 min，以5 ℃/ min 的速率升至180 ℃、保持6 min，以20 ℃/ min的速率升至260 ℃、保持2 min；进样口温度：240 ℃；载气：氦（He）气；载气流速：1 mL/ min；分流比：20∶1；进样量：1µL。

2.1.2 MS 条件

电子轰击（EI）离子源；离子源温度：230 ℃；四极杆温度：150 ℃；电子能量：70 eV；接口温度：250 ℃；溶剂延迟时间：6.5 min；全扫描监测方式，质荷比（m/z）扫描范围：60～600［8-10］。

2.2 挥发油样品制备

取川芎定痛胶囊内容物30 g，精密称定，置挥发油提取器中，加入纯化水400 mL，浸泡4 h。按2020 年版《中国药典（四部）》2204 挥发油测定法（附录XD 甲法）进行测定，水蒸气蒸馏5 h，收集挥发油。以石油醚作溶剂，萃取、收集挥发油；减压蒸馏挥去石油醚，所得样品用无水硫酸钠干燥，得浅黄色油状液体；移取至样品瓶，密封，保存于4 ℃冰箱，备用。提取的挥发油样品，加乙酸乙酯稀释，用0.22µm微孔滤膜滤过。

2.3 方法学考察

精密度试验：取2.2 项下挥发油样品，连续进样测定6次，GC-MS色谱峰保留时间的RSD≤0.31%（n=6），峰面积的RSD≤0.53%（n=6），表明仪器精密度好。

稳定性试验：取2.2项下样品，分别于0，3，6，9，12 h时进样分析，各色谱峰保留时间的RSD≤0.83%（n=5），峰面积的RSD≤1.02%（n=5），表明稳定性良好。

2.4 挥发油化学成分GC-MS 分析

成分鉴定与相对含量测定：采用气相色谱-质谱联用仪对川芎定痛胶囊挥发油总离子流色谱进行分析和处理，根据相应的MS 谱图，通过工作站NIST 标准质谱图库检索，参考文献［7，11-16］，确定各色谱峰代表的化学成分，并按面积归一化法计算各挥发油化学成分的相对含量。

结果分析：样品经GC-MS 分析，得到总离子流图（图1），采用气相色谱-质谱联用仪对川芎定痛胶囊挥发油总离子流色谱进行分析，并采用峰面积归一化法确定挥发油各组分的相对百分含量。挥发油中共分离出49 个峰，其中鉴定出31 个成分，主要包括烯烃类、醇类、酮类、醚类、酚类、酯类、芳香化合物等，占总流出峰峰面积的86.78%，其中，烯类13个，峰面积之和占总流出峰面积的20.04%；醇类3个，占2.48%；酮类2个，占0.64%；芳香化合物4个，占12.95%；醚类3个，占15.79%；酚类2个，占10.63%；酯类（苯酞类）4个，占24.25%。E-藁本内酯峰面积最高（17.56%），其次是黄樟醚（10.62%）、甲基丁香酚（10.32%）、3，5 -二甲氧基甲苯（7.58%）、角鲨烯（5.77%）、肉豆蔻醚（4.33%）、3，4，5-三甲氧基甲苯（4.08%）。详见表1。

3 讨论

由表1 可知，已鉴定出的31 种化学成分中大多数化学成分来源于川芎、细辛。其中来源于川芎的成分19种，其他药材挥发油成分较少，与川芎为君药的事实相符。经鉴定，川芎定痛胶囊挥发油中E-藁本内酯占比最高（17.56%）。

表1 GC-MS法分析川芎定痛胶囊挥发油化学成分Tab.1 Chemical components in the volatile oil from Chuanxiong Dingtong Capsules by the GC -MS

藁本内酯及其衍生物为川芎挥发油的主要活性成分，同其生物碱均具有脑保护作用，如抑制脑I/ R 损伤、抗偏头痛、保护神经，其在抑制血栓形成和血小板聚集、抗心肌缺血及抑制子宫平滑肌收缩等方面的作用也使川芎常被用于活血化瘀调经药［17］。另有研究表明，藁本内酯可剂量依赖性地减轻动脉粥样硬化模型大鼠动脉血栓的质量，抑制腺苷二磷酸所致血小板聚集［18］，从而发挥抗动脉粥样硬化作用。其衍生物洋川芎内酯Ⅰ对于偏头痛模型大鼠具有显著的治疗效果，同时，李海刚等［3］提出藁本内酯可能具有抗凝血和抗血小板凝集作用，MA等［19］提出Z-蒿本内酯具有抗抑郁作用。

黄樟醚、甲基丁香酚、3，5-二甲氧基甲苯和2，4，6-三甲氧基甲苯等为细辛的主要活性成分。网络药理学分析显示，黄樟醚和甲基丁香酚被认为具有抗炎作用，是能发挥抗炎镇痛作用的主要药效物质。现代药理学研究证明，甲基丁香酚能抑制中枢神经系统，对不同物种的实验动物静脉注射后可起到不同程度的麻醉效果，能有效限制神经病理性疼痛，可作为有效的局部麻醉剂和镇痛剂。在相关动物实验中，细辛中的挥发油成分被证明对神经系统、心血管系统等均有影响，可实现镇静抗惊厥、解热镇痛、预防和治疗炎症、抗变态反应等作用［20-21］，同时也具有一定毒性，需谨慎使用［20］。

川芎、细辛的挥发油成分可能在川芎定痛胶囊的药效中起到了重要作用。另外，其他几味药材挥发油含量较少，但所含有的其他化学成分也对川芎定痛胶囊的药效起到了辅助作用。

延胡索的主要药效物质为生物碱类成分，对人体各大系统均有显著效果。现代药理学研究表明，叔胺类成分具有镇痛、镇静、催眠、抗焦虑作用［22］，针对消化系统的抗胃肠道溃疡作用［23］和心脑血管系统的抗心肌缺血、脑缺血作用等［24］，临床常用于治疗心血管疾病、炎症、失眠症等，但由于生物碱具有一定毒性，应关注其禁忌证［4，25］；香豆素类是白芷中生物活性最强的成分，对神经中枢的影响强，具有解热、镇痛、平喘作用，在扩血管、抗血小板聚集、降血压等方面有一定效果，但需注意可能带有肝毒性等毒副作用［26］。动物实验证明，绞股蓝的主要成分为人参皂苷Rb、绞股蓝皂苷，在调血脂、保肝、抗疲劳、抗氧化、保护心脑血管等有一定作用，广泛用于高血脂等治疗［6，27］。

上述挥发油中许多化学成分具有不同程度的毒性。黄樟醚可抑制呼吸中枢，中毒初期会有头痛、呕吐、气短、体温升高、心悸等，严重时会导致明显的中枢神经系统抑制，呼吸逐渐困难甚至死亡；甲基丁香酚也被证明有肝毒性、基因和细胞毒性、致癌致突变等毒性［28］；榄香素在一定条件下具有致癌毒性［29］；藁本内酯可使细胞凋亡，肉豆蔻醚能使人致幻等。多成分挥发油的毒性往往不是某个成分单独起作用，多个挥发油成分单独或协同作用极有可能使毒副作用变得复杂且更严重。因此，对于挥发油含有多种化学成分的川芎痛定胶囊，应更明确和规范其成分种类和含量。作为中药复方制剂，川芎定痛胶囊在选材和制药过程中，已通过配伍、煎煮等传统手段减毒。而利用更精确的现代分析技术，可对其含量进行精确测量和控制，最大程度地发挥其效应，在保障安全性的同时提高有效成分含量。

综上所述，采用GC-MS法分析川芎定痛胶囊的挥发油成分，扩大了挥发油化学成分的测定范围，明确了其成分种类、含量占比，可用于川芎定痛胶囊的成分和质量控制研究。