促性腺激素释放激素类似物对中枢性性早熟女性儿童维生素D 及miR-664-2 水平影响

吕 晴， 刘 凯， 刘 洋， 孟香沂

深圳大学总医院 儿科，广东 深圳518055

中枢性性早熟(Central precocious puberty，CPP)又称促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone，GnRH)依赖性早熟，由于下丘脑提前提高了GnRH 的分泌与释放，将性腺轴的功能提前激活后引起性腺发育及分泌性激素，最终导致了内外的生殖器发育与第二性征呈现[1-2]。 目前，临床针对CPP 主要采用药物治疗、饮食调整等，其中促性腺激素释放激素类似物(Gonadotropin releasing hormone analogue，GnRHa)应用较为广泛[3-4]。 有研究发现，GnRHa 在治疗CPP 过程中虽无明显不良反应发生，但远期会对患儿的生殖系统功能、骨密度等产生影响[5-6]。 维生素D 与人体的骨代谢、钙磷代谢密切相关，可影响儿童的生长发育，且还具有调控生殖功能的作用[7]。 miR-664-2 可通过增强靶向N-甲基-D-天冬氨酸受体(N methyl D aspartate，NMDA)信号参与早熟的发病机制[8]。 但两者是否存在一定关系，从而影响GnRHa 治疗女性儿童CPP 的效果少见报道。 本研究旨在探讨Gn-RHa 治疗女性儿童CPP 对维生素D 及miR-664-2水平的影响。 现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取自2019 年8 月至2020 年8 月深圳大学总医院收治的90 例CPP 女性儿童为研究对象。 纳入标准:CPP 符合《中枢性性早熟诊断与治疗共识(2015)》中相关标准[9]；未曾接受过GnRHa 治疗；女性。 排除标准:经CT 或磁共振检查存在器质性病变；严重心、肝、肾等脏器功能障碍；性腺肿瘤、激素药物等其他因素导致的性早熟；治疗依从性差。 根据miR-664-2 表达水平将患儿分为miR-664-2 高表达组(n ＝52)与miR-664-2 低表达组(n ＝38)。 根据维生素D 水平将患儿分为维生素D 缺乏组(25-羟基维生素D ＜30 ng/ml，n ＝52)与维生素D 不缺乏组(25-羟基维生素D≥30 ng/ml，n ＝38)。 本研究经医院伦理委员会批准。 研究对象家属均签署知情同意书。

1.2 治疗方法 所有患儿均接受GnRHa 治疗，给予注射用醋酸亮丙瑞林微球，3.75 mg∶1 ml，国药准字J20150109，每次3.75 mg，检查黄体生成素水平，一般治疗24 个月。

1.3 观察指标 采集患儿治疗前、治疗24 周3 ml空腹静脉血，3 000 r/min 离心10 min，取上清，酶联免疫吸附法检测25-羟基维生素D、miR-664-2、雌二醇、泌乳素、黄体生成素及卵泡刺激素水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS 23.0 统计学软件对数据进行处理。 计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t 检验；计数资料用例(百分率)表示，组间比较采用χ2检验。 采用双变量Pearson 直线相关性检验维生素D 与miR-664-2 水平的相关性。 以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患儿治疗前后血清学指标比较 治疗后患儿25-羟基维生素D 水平为(54.65 ±33.00)ng/ml，高于治疗前的(36.72 ±15.72)ng/ml，差异有统计学意义(P ＜0.05)。 患儿治疗后miR-664-2 水平为(0.97 ±0.31)、雌二醇水平为(8.18 ±1.91)ng/L、泌乳素水平为(9.23 ±3.08)μg/L、黄体生成素水平为(1.66 ±0.74)IU/L、卵泡刺激素水平为(9.45 ±2.27)，分别低于治疗前的(1.89 ±0.69)、(9.48 ±2.19)ng/L、(11.64 ±4.05)ng/L、(1.54 ±0.75)IU/L、(4.45±0.82)IU/L，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.2 miR-664-2 高表达组与miR-664-2 低表达组血清学指标比较 miR-664-2 高表达组治疗后25-羟基维生素D、雌二醇水平低于miR-664-2 低表达组，卵泡刺激素水平高于miR-664-2 低表达组，差异有统计学意义(P ＜0.05)。 见表1。

表1 miR-664-2 高表达组与miR-664-2 低表达组血清学指标比较(¯x±s)

2.3 维生素D 缺乏组与维生素D 不缺乏组血清学 指标比较 维生素D 缺乏组治疗后miR-664-2、雌二醇、卵泡刺激素水平高于维生素D 不缺乏组，差 异有统计学意义(P ＜0.05)。 见表2。

表2 维生素D 缺乏组与维生素D 不缺乏组血清学指标比较(¯x±s)

2.4 相关性分析结果 维生素D 水平与miR-664-2表达水平呈负相关(r ＝ -0.949，P ＜0.05)。 见图1。

图1 维生素D 与miR-664-2 相关性散点图

3 讨论

近年来，我国女性儿童的初潮年龄呈提前趋势发展，且CPP 发病年龄也相对提前[10]。 女性儿童CPP 的发病率远高于男性儿童，严重影响患儿的正常发育及身心健康[11]。 GnRHa 是治疗CPP 的有效药物，不仅高度耐降解，且与垂体GnRH 受体存在高度的亲和作用，作用效果强效、持久，可降低垂体靶细胞，调节机体激素水平至正常范围，帮助患儿改善临床症状[12-14]。 此外，GnRHa 可参与患儿机体中调控营养代谢的过程，通过调控生殖轴促使中枢信号启动，有效抑制CPP 的性腺发育，减缓骨龄进展。 相关研究表明，维生素D 可影响生长发育，维生素D 缺乏后机体中雌二醇与黄体生成素的水平显著提高[15-16]。 本研究结果显示，患儿治疗后的25-羟基维生素D 水平高于治疗前，miR-664-2、雌二醇、黄体生成素、卵泡刺激素低于治疗前，其中miR-664-2、泌乳素、黄体生成素、卵泡刺激素基本达到正常范围，提示采用GnRHa 治疗CPP 女性儿童可获得较好的临床疗效，有效改善内分泌代谢指标水平。 曹玲等[17]研究发现，GnRHa 可以有效调节特发性中枢性性早熟女性儿童内分泌代谢、骨代谢水平，而对脂代谢无明显影响，且不良反应轻微，与本研究结果一致，分析原因可能为GnRHa 可有效阻断受体反馈机制的通路，抑制黄体生成素的合成，从而抑制患儿机体中性腺的分泌[18-19]。

miR-664-2 与性早熟的发生密切相关，通过靶向NMDA-1 受体信号参与性早熟[20-21]。 Ju 等[22]研究报道，GnRH 是下丘脑-垂体-性腺轴激活的出发因子，NMDA 可促进搏动性GnRH 分泌，加速青春期开始。 Johnson 等[23]在一项动物研究中提出，乳腺上皮或脂肪细胞缺乏维生素D 受体(vitamin D receptor，VDR)与乳腺上皮细胞的凋亡减少、增殖增加相关，可加快乳腺导管形成，而腺泡的生长离不开乳腺上皮细胞的VDR 诱导调节，缺乏VDR 可导致乳房提前发育，推测维生素D 依赖的VDR 信号途径在青春期乳腺发育中发挥重要作用。 Villamor等[24]研究表明，维生素D 缺乏可造成女性儿童初潮时间提前。 因此，在治疗期间需密切监测维生素D 及miR-664-2 表达，以调整治疗方案及剂量，进一步提升疗效。 本研究进一步采用双变量Pearson 直线相关性检验维生素D 与miR-664-2 水平的相关性发现，两者呈负相关，分析原因可能为miR-664-2能够抑制维生素D 与VDR 的结合，同时刺激c-Jun氨基端激酶信号通路激活。

综上所述，维生素D 水平与miR-664-2 表达呈负相关，采用GnRHa 治疗女性儿童CPP 可获得较佳的疗效，有效提高维生素D 水平，降低miR-664-2水平，改善患儿内分泌代谢等相关指标。 本研究仍存在不足，纳入患儿较少，未观察长期疗效，未研究关于GnRHa 治疗的不良反应等，仍需进一步扩大样本量，延长随访时间等进行深入研究。