血清热休克蛋白27与冠心病的相关性研究

刘海亮，水之源，郭潋，史九波，程治军，王辉宇，赵光煊

(三门峡市中心医院 a.心内科；b.检验科，河南 三门峡 472000)

随着人口老龄化，我国心血管疾病患病率呈持续上升态势，其中冠心病(coronary heart disease，CHD)2020年患病达1 139万[1]，一级预防刻不容缓，关于潜在危险因素或血管内皮保护因子的研究炙手可热。血清热休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)作为小分子热休克蛋白家族中的一员[2]，能调节多种基因的表达[3]，调控蛋白质的理化性质及代谢，具有防御热休克、氧化应激作用，影响肿瘤坏死因子-α对细胞的损伤[4]，进而影响炎症反应[5]，调控细胞的凋亡等[6]。近年研究发现HSP27与颈动脉内中膜厚度(intima media thickness，IMT)[2]、雌激素[7]、心力衰竭[5,8]、肿瘤[9-10]等有关，但关于其与CHD关系的研究不多。本研究通过分析血清HSP27水平与CHD的相关性，旨在寻找CHD的预测因子。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2020年7月至2021年8月在三门峡市中心医院心内科住院的300例接受冠状动脉造影术(coronary arteriography，CAG)患者，其中CHD 240例，依据临床诊断分为稳定型心绞痛(stable angina pectoris，SAP)组、不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris，UAP)组和急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)组。SAP组85例，其中男44例，女41例；UAP组74例，其中男41例，女33例；AMI组81例，其中男47例，女34例；余60例CAG结果正常者为对照组，其中男36例，女24例。同时排除心肌病、瓣膜病、不明原因的心律失常、肿瘤、急性脑血管病、感染性疾病、免疫性疾病、各种原因引起心功能不全及肝、肾功能异常患者。所有患者签署知情同意书。

1.2 资料搜集收集患者入院次日空腹静脉血5 mL加入干燥真空管，室温放置2 h后，以3 000 r·min-1离心20 min，取上清液置于-80 ℃保存待测，以酶联免疫吸附法测定血清HSP27水平，并由双人进行质控。人HSP27试剂盒购自上海江莱生物科技公司。采用AU5800全自动生化分析仪测定生化指标、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯、血糖、C反应蛋白等。收集患者肌酐、尿素氮等资料。

1.3 CAG取右侧桡动脉途径，采用Judikin’s导管技术进行造影，由2名介入科高级职称医生对结果进行判读及质控。CHD诊断标准为CAG显示左主干、前降支、回旋支、右冠状动脉中任何一支血管管腔狭窄大于50%。CAG后按照Gensini积分对左主干进行权重，左主干狭窄>50%时，记录为双支病变，余任何一支血管狭窄>50%时记为单支病变。

2 结果

2.1 基线资料4组患者基线资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 CHD组与对照组基线资料比较

2.2 生化指标水平AMI组血清HSP27、低密度脂蛋白水平高于对照组，低密度脂蛋白水平高于UAP组，高密度脂蛋白水平低于对照组、SAP组，C反应蛋白高于对照组、SAP组、UAP组(P<0.05)。UAP组中高密度脂蛋白水平低于对照组，C反应蛋白高于对照组、SAP组(P<0.05)。SAP组C反应蛋白高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 CHD组与对照组相关生化指标水平比较

2.3 不同冠状动脉病变程度组与对照组HSP27、C反应蛋白水平三支病变组HSP27水平高于对照组(P<0.05)；单支、双支、三支病变组C反应蛋白水平均高于对照组(P<0.05)，单支、双支、三支病变组间HSP27、C反应蛋白水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同冠状动脉病变程度患者与对照组HSP27、C反应蛋白水平比较

2.4 多因素分析以是否发生CHD为因变量(病例=1，对照=0)，经成组logistic回归分析进入回归方程的自变量是血清HSP27、高血压(有=1，无=0)、高脂血症(有=1，无=0)、超重(有=1，无=0)、糖尿病(有=1，无=0)、睡眠呼吸暂停综合征(有=1，无=0)、C反应蛋白，得到回归方程为：

Y=1.305-2.411X1+2.311X2+1.486X3+1.356X4+

2.416X5+1.254X6+3.232X7

式中：X1为HSP27；X2为高血压；X3为高脂血症；X4为超重；X5为糖尿病；X6为睡眠呼吸暂停综合征；X7为C反应蛋白。

经logistic回归分析，结果显示，血清HSP27是CHD的保护性因子(P<0.05)，高血压、高脂血症、超重、糖尿病、睡眠呼吸暂停综合征、C反应蛋白均是CHD的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 回归方程中的变量

2.5 相关性分析经Pearson相关性分析，血清HSP27与体质量指数、C反应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、血糖呈负相关(P<0.05)，与高密度脂蛋白呈正相关(r=0.642，P<0.05)。见表5。

表5 HSP27与其他危险因素的Pearson相关性分析

3 讨论

HSP是一组生理状态下弱表达，当机体面对组织代谢异常、应激性刺激或病理性改变时被特异性上调的蛋白[11]。HSP27相对分子质量约为27 kDa，在各细胞、器官组织普遍存在，具有结合、稳定细胞骨架等功能，能通过活化NF-κB来调节包括血管壁炎症直接相关的基因的表达[3]，参与细胞的生存、凋亡，又被称作细胞内分子伴侣，为近年研究的热点。有研究通过对186例接受了超声颈动脉IMT测量的2型糖尿病患者进行研究发现，IMT阳性组的HSP27水平高于IMT阴性组，并且血清HSP27水平与颈动脉IMT呈正相关，即使调整了收缩压、舒张压、总胆固醇、C反应蛋白及发病年龄等因素后，HSP27仍与2型糖尿病的颈动脉IMT独立相关，校正后的优势比为1.085，最终得出HSP27是2型糖尿病患者亚临床动脉粥样硬化的独立预测因子的结论[2]。有研究显示颈动脉硬化患者的血清HSP27水平低于健康对照组，提出HSP27对心血管系统的细胞外作用为抗动脉粥样硬化[12-13]。动物实验显示动脉粥样硬化病变负荷与血清HSP27水平之间存在负相关，HSP27在动脉粥样硬化斑块中的表达随着病理阶段的进展而减少[14-15]。有研究显示，在急性脑缺血后，大脑中的 HSP27水平升高，并且通过抗氧化、抗炎、抗细胞凋亡等在神经细胞保护中发挥重要作用[16]。陈伟等[17]、韩百合等[8]在对心力衰竭患者的研究中发现，HSP27水平与左心收缩功能、舒张功能呈负相关，与左心室舒张末期内径、纽约心脏病协会分级、N-末端脑钠肽前体呈正相关，HSP27是预测心力衰竭患者发生主要不良心血管事件的危险因素。

本研究结果显示，AMI组的HSP27、C反应蛋白水平高于对照组，但心绞痛组与对照组HSP27水平，以及CHD组内HSP27水平相比，均无明显差异。推测在AMI时，高应激状态、C反应蛋白等炎症因子的大量释放诱发了HSP27水平的代偿性增高。CHD组内HSP27水平无明显差异，表明在存在动脉粥样硬化导致的固定狭窄时，机体HSP27水平未改变，提示HSP27可能与冠状动脉的斑块稳定性无关，与Seibert等[18]的研究结论具有一致性，但与汤鑫等[19]的研究结果不一致，推测可能与本研究中患者合并基础病较多有关，特别是睡眠呼吸暂停综合征的存在，可能缺氧、缺血的刺激干扰了HSP27的水平。本研究结果显示，AMI组血清低密度脂蛋白水平高于对照组、UAP组，高密度脂蛋白水平低于对照组、SAP组，UAP组中高密度脂蛋白水平低于对照组，说明高密度脂蛋白越低，越易出现不稳定的斑块；相对于心绞痛及健康者，不管斑块是否稳定，高低密度脂蛋白水平患者更易发生AMI。按冠状动脉病变程度对CHD患者进行分组后发现，三支病变组中HSP27水平高于对照组，提示HSP27与冠状动脉的严重范围及程度有关。本研究通过不同分组方法进一步研究C反应蛋白水平，结果提示CHD患者的冠状动脉血管的C反应蛋白水平大于无CHD患者，C反应蛋白水平可能与冠状动脉病变处斑块的稳定性有关，但与冠状动脉病变的范围无关。logistic回归分析结果显示，血清HSP27是CHD的保护性因子，高血压、高脂血症、超重、糖尿病、睡眠呼吸暂停综合征、C反应蛋白是CHD的危险因素；经Pearson相关性分析发现，血清HSP27与体质量指数、C反应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、血糖呈负相关，与高密度脂蛋白呈正相关。HSP27抗动脉硬化的可能机制为：机体在缺血、缺氧、高压力等急性应激状态下，细胞内的部分蛋白变性，引起机体HSP27水平上调，诱导其磷酸化[4]。磷酸化的HSP27，在细胞内通过抑制Bax、上调谷胱甘肽还原酶、降低活性氧等来稳定细胞膜的完整及活力[7]，激活NF-κB信号通路以诱导粒细胞-单核细胞集落刺激因子，与ATP结合转运蛋白A1转运蛋白G1，从而促进总胆固醇外流[20]，还可抑制巨噬细胞对乙酰化的低密度脂蛋白的摄取能力[2]，抑制泡沫细胞的形成，通过p38信号通路刺激白细胞介素-10的分泌，降低清道夫受体A的表达，调控促炎因子的释放，抑制炎症反应的进程[21]。磷酸化的HSP27可增强肌动蛋白的重聚，同时抑制其降解，加强纤维状肌动蛋白的聚集能力，最终达到抑制动脉硬化进展的目的[7]。Shi等[22]的研究显示，用重组HSP25接种小鼠可提高HSP27天然IgG自身抗体水平，减少动脉粥样硬化形成，减轻斑块炎症，降低总胆固醇水平。Kim等[23]通过构建大鼠缺血/再灌注模型发现，靶向给药重组HSP27可抑制缺血性损伤诱导的细胞凋亡，减少纤维化面积，并改善心肌梗死大鼠的心脏功能，促进心肌梗死后的恢复，提示血清HSP27有望成为抗动脉硬化治疗的靶点。

综上所述，血清HSP27水平与AMI及冠状动脉三支病变有关，是CHD的保护性因子。血清中HSP27水平对预测CHD的严重性有一定价值，随着循证医学的深入研究，血清HSP27有望作为CHD早期预防和判断预后甚至治疗的靶点。本研究的局限性在于未对AMI进一步分组研究，缺乏对CHD患者的随访及动态对比研究，可能会对试验结果造成一定偏倚。今后应进一步设计多中心的随机对照研究，加入随访研究数据及亚组分析结果，进一步探讨HSP27对CHD病程的影响及靶向治疗的可能性。