miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7在食管鳞癌组织中的表达及相关性研究*
2022-07-29郏莉莉
赵 静,李 良,郏莉莉
1.东南大学附属中大医院江北院区/南京市大厂医院,江苏南京 210048;2.江苏省肿瘤医院,江苏南京 210000
食管癌是目前临床上常见的消化道肿瘤之一,食管鳞癌是食管癌两大病理类型之一,具有较好的侵袭性和转移性,癌肿甚至可侵入气管、支气管,形成食管、气管或支气管瘘等,严重影响患者日常生活和工作[1-3]。目前临床上治疗此病多采取综合治疗,但易受病理类型、手术效果及个体差异等影响,导致患者复发率较高[4]。目前对于食管鳞癌发病的具体分子机制尚未得到统一言论,分子生物学亦成为学术研究的热点,其可通过分子水平寻找基因突变位点进而了解食管鳞癌的发病机制[5]。故明确食管鳞癌的发生、发展机制对于此病的早期诊断、治疗及预防具有重要的价值意义。微小核糖核酸-330-3p(miR-330-3p)、FAM83H、长链非编码RNA 小核仁RNA宿主基因7(LncRNA SNHG7)分别在乳腺癌、胃癌、卵巢癌中有所报道,但暂无三者联合在食管鳞癌中报道,故本研究通过实时荧光定量PCR分析miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7在食管鳞癌组织中的表达及其与临床特征之间的相关性,为寻找食管鳞癌临床治疗方案的确定提供科学依据。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取2014年11月至2020年11月东南大学附属中大医院江北院区和江苏省肿瘤医院接诊的114例食管癌患者作为研究对象,男61例、女53例,年龄35~74岁,平均(46.23±4.38)岁,体重指数(BMI)为 24~35 kg/m2,平均BMI(28.62±2.93)kg/m2,TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期69例、Ⅲ期28例、Ⅳ期17例;分化程度:低分化12例、中分化59例、高分化43例。所有研究对象及家属均知情同意本研究,且经医院伦理委员会批准,伦理委员会批准文号:(2016)伦审第(58)号。纳入标准:(1)符合文献[6]中诊断标准;(2)首次确诊;(3)患者经术后病理学检查诊断为食管鳞癌;(4)术前未行放、化疗等抗肿瘤治疗,TNM分期和分化程度明确;(5)食吞钡X线、食管镜可见官腔狭窄、黏膜破坏且食管脱落细胞检查。排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤或严重心、肝、肺、肾功能不全;(2)入院治疗前行放化疗等治疗;(3)合并Barrett食管炎或反流性食管炎;(4)其他肿瘤转移至食管。
1.2方法
1.2.1标本采集 标本取自手术切除的无坏死食管鳞癌肿瘤组织及远端正常食管组织(距病灶>5 cm,经病理证实无肿瘤细胞浸润),新鲜切除的癌组织及癌旁组织,将制作的组织标本采用40 g/L 多聚甲醛进行固定,并进行常规石蜡包埋,厚度为3 μm。
1.2.2miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7检测方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7表达,步骤如下:提取食管鳞癌组织、癌旁组织中加入变性溶液、酸化苯酚氯仿,混匀1 min,提取上清液并且记录其体积,再往上清液中加入1/3体积浓度为100%的乙醇充分混匀以后通过第1个过滤柱;收集过滤液并记录其体积,再次往过滤液中加入其体积2/3浓度为100%的乙醇,充分混匀后通过第2个过滤柱;再用95 ℃无RNA酶水洗脱出总RNA,反转录后得到cDNA。miR-330-3p上游引物:5′-TTGCAGCACAGTAAAACATG-3′,下游引物:5′-GATAAGCACTCCACAACCAG-3′;LncRNA SNHG7上游引物:5′-TTGCTGGCGTCTCGGTTAAT-3′,下游引物:5′- GGAAGTCCATCACAGGCGAA-3′;FAM83H上游引物:5′-CTAGGGACTGGGCTGCT-3′,下游引物:5′-AGGGTCTTAGGTTCCAGGCA-3′。内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)引物序列上游:5′-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3′,下游:5′-CAAAGTTGTCATGGATGHACC-3′。反应条件:预变性95 ℃ 5 min,94 ℃ 20 s,56 ℃ 20 s;72 ℃ 1 min,40个循环;72 ℃终末延伸6 min,Ct值(2-ΔΔCt)法表示miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7的相对表达量。
2 结 果
2.1miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7在癌组织和癌旁组织中的表达比较 癌组织中miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7在 癌组织和癌旁组织中的表达比较
2.2miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7与食管鳞癌患者临床特征的关系分析 如表2所示,miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7与食管鳞癌患者性别、年龄、病变位置无关(P>0.05)。miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7与食管鳞癌患者分化程度、淋巴结转移、浸润程度、预后情况、TNM分期有关,低分化、有淋巴结转移、深浸润、预后不良、Ⅲ~Ⅳ期食管鳞癌患者miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7表达高于高中分化、无淋巴结转移、浅浸润、预后良好、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。
表2 miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7与食管鳞癌患者临床特征的关系分析
2.3ROC曲线分析miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7对食管鳞癌的诊断价值 三者联合对食管鳞癌的诊断价值高于miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3、图1。
表3 ROC曲线分析miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7对食管鳞癌的诊断价值
图1 miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7
2.4相关性分析 FAM83H与miR-330-3p呈正相关(r=0.914,P=0.001);LncRNA SNHG7与FAM83H呈正相关(r=0.867,P=0.001);miR-330-3p与LncRNA SNHG7呈正相关(r=0.902,P=0.001)。见图2。
图2 miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7的相关性
3 讨 论
食管癌是我国发病率位于第四位的恶性肿瘤,食管鳞癌占食管癌的比例高达70%,该病患者病死率较高且预后较差,目前临床上对于食管鳞癌预后的临床指标暂无定论,故寻找新的分子预后标志物,有助于临床医者制订个性化治疗策略、延长生存期[7-8]。miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7等许多生物分子对食管鳞癌患者预后产生一定影响。
miR-330-3p在食管鳞癌中表达状态可能具有一定组织特异性,而关于miR-330-3p在其他肿瘤中的表达状态有所争议[9]。有研究显示[10],miR-330-3p在胶质瘤和脑转移癌中表达上调,却在前列腺癌中表达下降,如此复杂的表达状态提示了miR-330-3p在不同肿瘤中可能发挥不同的作用,miR-330-3p可以显著加快食管鳞癌细胞体内、体外生长,促进细胞增殖、迁移和侵袭,并且可抵抗由顺铂引起的细胞凋亡。miR-330-3p表达升高可促进胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭,相反miR-330-3p的异常表达被认为可以抑制前列腺癌和结肠癌细胞生长[11]。随着对miRNAs研究的不断深入,越来越多的发挥多面性作用miRNAs被人们熟知,比如miR-9可以抑制卵巢癌细胞的生长,却能促进胃癌细胞增殖;可以通过激活β-catenin信号通路而促进肿瘤转移,却又能靶向调控基质金属蛋白酶14而发挥抑制神经母细胞癌细胞血管生成的作用,这些都证实了miRNAs可以在不同肿瘤中发挥复杂多样的作用[12-13]。
FAM83H是FAN83家族8位成员之一,其基因N端附近存在一段保守且功能未知的结构域,且这一结构可能与致瘤性相关,临床研究结果显示,其在肝癌、骨肉瘤、宫颈瘤等恶性肿瘤组织中呈异常高表达[14-15]。李景攀等[16]研究报道,FAM83A位于8q24.13,其在非小细胞肺癌患者中的表达异常及对非小细胞肺癌预后和诊断的作用,其还与骨形成蛋白BMP信号通路、KRAS信号通路、MAPK信号通路等有密切关系,低表达FAM83A可通过抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制肿瘤生长,为非小细胞肺癌中的功能开发及临床应用奠定基础。冯博等[17]等研究报道,FAM83H在食管鳞癌中表达上调,表明其在食管鳞癌中通过参与细胞信号传导,进而发挥癌基因的作用,其可食管鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,且其表达水平与病理学分化程度相关。在本研究中,FAM83H在食管鳞癌组织中呈异常高表达,证实其可能参与食管鳞癌的发生发展并发挥促癌作用且与食管鳞癌患者分化程度、淋巴结转移、浸润程度、临床分期有关。
LncRNA SNHG7已被证实在乳腺癌、肝癌中表达异常升高,其在乳腺癌中可通过miR-34a启动EMT和Notch-1通路促进乳腺癌的发生发展,在肝癌中高表达LncRNA SNHG7可发挥癌基因的作用促进肿瘤进展[18]。陈伟泉等[19]研究报道,LncRNA SNHG7在舌癌组织中低表达,可能与miR-9-5p相互作用,SNHG7内源性竞争结合miR-9-5p,从而上调靶基因Ambral表达,进而抑制舌癌细胞增殖。LncRNA是一类长度大于200 bp的长链非编码RNA,多表现出较高的组织特异性,可以RNA形式在基因转录等多个层面参与调控基因表达情况;SNHG7的RNA序列长度约为2 157 bp,其在食管鳞癌中作为致癌基因参与疾病发生、发展,且与食管鳞癌严重程度和疾病进展有关[20-21]。在本研究中,LncRNA SNHG7在食管鳞癌组织中呈异常高表达,且与患者分化程度、淋巴结转移、浸润程度、临床分期有关,其原因可能为LncRNA SNHG7可指导核仁小分子RNA进行翻译后修饰,而核仁小分子RNA参与癌症的发生发展。本研究结果显示,FAM83H与miR-330-3p呈正相关;LncRNA SNHG7与FAM83H呈正相关;miR-330-3p与LncRNA SNHG7呈正相关。
综上所述,miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7与食管鳞癌患者分化程度、淋巴结转移、浸润程度、临床分期有关,miR-330-3p、FAM83H、LncRNA SNHG7之间呈正相关,且均参与食管鳞癌的发生和发展过程,升高miR-330-3p、FAM83H水平,降低LncRNA SNHG7水平,能够有效抑制食管鳞癌的发展,可成为食管鳞癌诊断的一种新手段,为食管鳞癌的早期诊治提供一定的理论参考。本研究存在样本量小、病例来源局限等不足,研究结果仍需大量样本、多中心试验研究的进行进一步确定。