血清SOX9蛋白对胃癌的诊断及其与临床病理特征的相关性

何卫美 谢骁

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率[1-2]。目前，我国早期胃癌的诊断率仍较低，发现时多为进展期，患者5年总生存率低于30%[3]。寻找早期胃癌的诊断标志物对提高胃癌发现率以及延长患者生存期具有重要临床意义。SOX9（SRYBox 9）是一种核转录因子蛋白[4]，在胃癌肿瘤组织中表达异常增加，且与胃癌的增殖及侵袭相关，提示其可能成为胃癌的标志物及潜在治疗靶点[5-8]。目前，关于SOX9蛋白在胃癌患者血清中表达水平对胃癌诊断及其临床病理特征相关报道罕见。该研究通过检测胃癌、慢性胃炎和健康体检人群血清SOX9蛋白水平，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年1月至2017年12月湖州市中心医院收治的胃癌患者85例，作为胃癌组。（1）纳入标准：均经内镜或手术后病理确诊为胃癌；尚未接受放、化疗。（2）排除标准：合并严重肝、肾、心脑血管病；具有其他恶性肿瘤病史；合并免疫系统疾病。其中，符合早期胃癌诊断标准（癌组织浸润仅限于粘膜层及粘膜下层）患者22例；胃癌分期，I期12例、II期15例、III期32例、IV期26例。另选取同期慢性胃炎患者65例和健康体检者63例作为对照组。三组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表1。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有研究对象签署知情同意书。

表1 三组一般资料比较

1.2 研究方法 （1）采集所有研究对象清晨空腹静脉血3 mL，以3,000r/min离心10 min，血清分装并于-70 ℃储存备用。血清SOX9蛋白水平检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（ELH-SOX9-1，P48436，RayBiotech公司），按照说明书进行操作。在酶标仪（Model 680 Microplate Reader，美国BIO-RAD公司）上以双波长450 nm/630 nm测定OD值。以标准SOX9蛋白稀释后浓度为参考标准，标准曲线检测范围0～100 ng/mL，根据标准曲线计算样本血清SOX9浓度，以ng/mL表示。（2）收集所有胃癌患者的临床病理资料，包括Lauren分型、淋巴结是否转移、TNM分期、浸润深度、分化程度等。

1.3 统计学方法 采用SPSS24.0统计软件。非正态分布的计量资料以 [M（P25，P75）] 表示，两组比较采用非参数Mann-Whitney U检验，多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis H检验。诊断试验采用受试者工作特征（ROC） 曲线方法，并计算曲线下面积（AUC）。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同人群血清SOX9蛋白水平比较 胃癌组血清SOX9蛋白水平为76.8（48.1，84.3）ng/mL，慢性胃炎对照组血清SOX9蛋白水平为33.7（27.0，44.0）ng/mL，健康对照组血清SOX9蛋白水平为15.5（9.9，25.9）ng/mL。胃癌组的血清SOX9蛋白水平显著高于其他两组，差异有统计血意义（P＜0.05），见图1。不同分期胃癌患者的血清SOX9蛋白水平比较，随着胃癌的进展SOX9蛋白水平有逐渐上升的趋势，见图2。

图1 三组的血清SOX9蛋白水平比较

图2 不同分期胃癌患者血清SOX9蛋白水平

2.2 血清SOX9蛋白水平对胃癌的诊断价值 ROC曲线分析显示，血清SOX9蛋白水平区分胃癌和慢性胃炎的AUC值为0.845（95% CI：0.780～0.911），见图3A；区分胃癌和健康体检者的AUC值为0.951（95% CI：0.920～0.981），图3B；区分胃癌和非胃癌者的AUC值 为0.897（95% CI：0.851～0.944），图3C。以 . 清SOX9蛋白水平46.0 ng/mL为诊断界值时，对胃癌诊断的敏感度为81.2%、特异度为88.3%。进一步对早期胃癌的诊断价值分析，AUC值为0.757（95% CI：0.659～0.855），血清SOX9蛋白水平对早期胃癌诊断的敏感度为72.7%，特异度为70.3%，见图4。

图3 血清SOX蛋白水平诊断胃癌的ROC曲线

图4 血清SOX蛋白水平诊断早期胃癌的ROC曲线

2.3 血清SOX蛋白水平与胃癌临床病理特征相关性分析 有淋巴结转移、浸润肌层、低分化、处于临床进展期的胃癌患者血清SOX蛋白水平显著高于无淋巴结转移、浸润未及肌层、高分化、临床分期低的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。不同性别、年龄、Lauren分型分组胃癌患者的血清SOX蛋白水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 血清SOX9蛋白水平与胃癌患者临床病理特征相关性分析

3 讨论

胃癌的早期诊断对其治疗和患者预后有重要意义，但目前缺乏早期诊断的生物标志物。SOX9是SOX家族成员之一，研究发现其在多种恶性肿瘤中表达增加，具有促进肿瘤恶性生物学表型的作用[9-15]。研究表明，SOX9蛋白在胃癌组织中表达增加，且在胃癌的发生发展中起到促癌作用[5，7-8]，但血清中SOX9蛋白表达水平对胃癌的诊断价值及其与临床病理特征的相关性尚不清楚。

本研究通过检测不同人群的血清SOX9蛋白水平，结果显示胃癌患者血清SOX9蛋白水平显著高于慢性胃炎患者及健康体检者，差异有统计学意义（P＜0.05）。应用ROC曲线获得血清SOX9蛋白水平区分胃癌和非胃癌的AUC值达0.897，诊断胃癌与非胃癌的敏感度和特异度分别为81.2%、88.3%。既往有研究报道，胃癌组织SOX9蛋白表达水平显著高于癌旁组织[16-18]，但未对其在组织和血液中表达对胃癌诊断的性能进行评价。该研究结果显示，血清SOX9蛋白水平对胃癌诊断有一定价值，进一步对早期胃癌的亚组分析显示血清SOX9对早期胃癌具有一定的诊断意义，但敏感度并不是非常高，可能与研究纳入的早期胃癌病例数较少有关，所得结论有一定局限性。还有一些胃功能指标应用于胃癌早期诊断的研究，比如胃蛋白酶原Ⅰ（PG）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、胃泌素17（G-17）[19]，是否可以联合SOX9与其他生物标志物以及常规肿瘤标志物（CA199、CA724、CEA）等构建诊断panel以提高胃癌早期诊断能力还有待进一步探讨。

本研究中胃癌患者的血清SOX9蛋白水平与淋巴结转移、分化、浸润深度、临床分期显著相关（P＜0.05），与性别、年龄、Lauren分型等无相关性（P＞0.05）。既往有报道显示，胃癌组织SOX9蛋白与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关，与性别、年龄、肿瘤分化程度无显著相关性[20]。但邵长明等[16]报道显示，SOX9蛋白水平与胃癌患者的Lauren分型相关，因此SOX9蛋白与临床病理特征的相关性值得进一步探讨。本研究还显示，血清SOX9蛋白水平随着胃癌病情的进展呈现逐步升高趋势，说明其表达可能与胃癌的进展有关。有多项研究表明，多种分子（miRNA、LncRNA）可以通过调控SOX9蛋白来促进胃癌肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等恶性表型[21-24]，提示SOX9蛋白与胃癌的恶性生物学行为相关，在胃癌的发生发展中起着重要作用，SOX9可能成为潜在的诊断标志物和胃癌治疗新靶点。邵长明等[16]研究还发现，组织高表达SOX9胃癌患者的总生存时间短于SOX9低表达患者，同时组织高表达SOX9胃癌患者的无进展生存时间也短于SOX9低表达胃癌患者[25]，SOX还被认为是胃癌复发的生物标志物[17，26]，以上结果均提示组织SOX9蛋白表达水平可能成为胃癌患者预后的判断标志。本研究结果也显示，血清SOX9蛋白水平与胃癌的侵袭、转移和恶性进展有关，而且在临床中血清样本采集更方便、检测更快捷，还能进行动态监测。

综上所述，血清SOX9蛋白对胃癌有一定的辅助诊断价值，推测SOX9蛋白水平可能对胃癌的治疗疗效评估、复发和预后预测具有潜在临床应用价值，还有待进一步研究验证。