高效液相色谱法测定小麦粉中过氧化苯甲酰的含量

2022-07-18王烽凡

新农业 2022年13期

摘要：本文使用岛津高效液相色谱仪，建立了测定过氧化苯甲酰在小麦粉中含量的方法。本方法使用C18色谱柱，乙酸铵/甲醇=90/10 （v/v）为流动相进行等度洗脱，二极管阵列检测器检测。过氧化苯甲酰在5.0～100毫克/公斤的浓度范围内具有良好的线性，相关系数为0.9998，方法检出限为0.11毫克/公斤，定量限为0.36毫克/公斤。将标准溶液配制成不同浓度连续进样6次开展精密度实验，6次保留时间实验结果的相对标准偏差低于0.10%，6次峰面积实验结果的相对标准偏差低于2.27%，实验结果表明仪器精密度良好。实际样品添加不同浓度，回收率为96.8%～97.0%，结果表明方法准确可靠。

关键词：小麦粉；过氧化苯甲酰；高效液相色谱；二极管阵列检测器

过氧化苯甲酰（简称BPO）是一种面粉改良剂，具有强氧化性，这种强氧化性不仅对面粉有显著的增白作用，还有杀菌防腐作用。因此可以对面粉的筋力及色泽起到改善作用，并将面粉的质量等级提高，显著提升经济效益，许多国家也因为这些原因选择其作为一种常用食品添加剂。但将过氧化苯甲酰过多的加入到面粉中会对面粉的营养进行破坏，从而导致面粉中的一些天然成分，如类胡萝卜素、叶黄素等丧失。长期过量使用这种面粉会使肝脏的负担加重，引发多种并发症；就算短期过量食用这种面粉也会让人中毒，产生神经衰弱、恶心、头晕等现象，因此对过氧化苯甲酰在小麦粉中的添加量需要严格控制。目前不同国家和地区针对BPO的法规不尽相同。美国对BPO在小麦粉中使用无最大使用量限制；加拿大规定BPO在小麦粉中最大使用量为150毫克/公斤；日本批准的最大使用量为300毫克/公斤；而欧盟禁止使用BPO。我国卫生部等多个部门在2011年3月1日发出公告，自2011年5月1日起，禁止在面粉中添加BPO。本文将标准《GBT 22325-2008 小麦粉中过氧化苯甲酰的测定高效液相色谱法》作为参考，采用岛津LC-20A高效液相色谱仪，建立了测定过氧化苯甲酰在小麦粉中含量的方法，本方法具有灵敏度高、操作简便的特点。

1.1 仪器

本实验使用岛津高效液相色谱仪LC-20A，包括CBM-20A 系统控制器，LC-20AT高精度溶液输送泵，DGU-20A5在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，SPD-20A二极管阵列检测器。

1.2 分析条件

色谱柱：C18柱，4.6毫米×150毫米， 5微米；流动相：A-20毫摩尔/升乙酸铵，B-甲醇，A/B=90/10 （v/v）；流速：0.8毫升/分鐘；洗脱方式：等度洗脱；检测波长：190～370纳米；进样量：10微升。

1.3 样品处理

苯甲酸基质工作曲线的配制：标准工作溶液配制。用甲醇配制1毫克/毫升的标准溶液，用甲醇稀释成25.0微克/毫升、50.0微克/毫升、100.0微克/毫升、200.0微克/毫升、400微克/毫升、500.0微克/毫升的标准溶液系列浓度点，将标准《GBT22325-2008小麦粉中过氧化苯甲酰的测定高效液相色谱法》作为参照进行基质加标，基质加标具体浓度见表1。

试样的制备：称取5克（准确至0.1毫克）样品置于50毫升具塞比色管中，加10.0毫升甲醇，在涡旋混合器上混匀1分钟，混匀后静置5分钟，然后加入质量分数为50%的碘化钾水溶液5.0毫升，在涡旋混合器上混匀1分钟，混匀后静置10分钟。最后加水至50.0毫升，混匀，静置，离心，然后吸取上层清液并通过0.22微米滤膜，将滤液承接入样品瓶中备用。

2.1 标准谱图

2.2 线性关系

由图3可以看出在5～100毫克/公斤的浓度范围内，苯甲酸的线性相关性良好，相关系数为0.9998，以5毫克/公斤进行低浓度实验，计算方法检出限为0.11毫克/公斤，定量限为0.36毫克/公斤。

2.3 精密度实验

将标准溶液配制成不同浓度连续进样6次进行测定，考察仪器的精密度，结果显示不同浓度标准溶液的保留时间及峰面积实验结果的相对标准偏差分别在0.05%～0.10%和0.24%～2.27%之间，仪器精密度良好。

2.4 基质加标实验

按照1.3所述试样的制备步骤处理空白小麦粉，图4为空白基质色谱图，图5为基质加标的样品色谱图，由图可知，小麦粉基质并未干扰到目标物的定量，且结果显示回收率均在95%以上。

本实验使用岛津高效液相色谱仪（LC-20A），建立了测定过氧化苯甲酰在小麦粉中含量的方法。过氧化苯甲酰在 5～100毫克/公斤的浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系数为0.9998，方法检出限为0.11毫克/公斤，定量限为0.36毫克/公斤，灵敏度高于标准《GBT 22325-2008小麦粉中过氧化苯甲酰的测定高效液相色谱法》。向空白的基质中添加不同浓度标准溶液，回收率范围为96.8%～97.0%，结果表明方法准确可靠。