肉鸡新城疫病毒的诊断及治疗

夏 伟，李 华，冷敦鹏，张 浩，王友娟，李勤芳，刘思喜（青岛中仁动物药品有限公司 266329）

鸡新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的一种急性败血性传染病，俗称亚洲鸡瘟，主要侵害鸡和火鸡[1]。鸡群感染新城疫病毒后，常出现体温升高、呼吸困难、下痢、绿便、呼吸道和消化道发生出血性炎症，可引起较高的死亡率[2]。目前新城疫仍是困扰我国养鸡业的重要疫病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定报告的动物疫病，我国农业部将其列为一类动物疫病。

新城疫病毒（NDV）属副黏病毒科，禽腮腺炎病毒属，禽副黏病毒。新城疫病毒基因组由一条单股RNA组成，含有6种病毒特异性结构蛋白（L、NP、P、HN、M、F）和2种非结构蛋白V和蛋白W[3]。新城疫病毒主要存在于病鸡喉气管、肺脏、脾脏及体液、分泌物和排泄物中，宿主范围广泛，给养禽业和公共卫生安全带来了较大的隐患。

目前对于新城疫病毒检测方法主要包括：鸡胚接种、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散、免疫荧光技术等，但RT-PCR检测方式具有敏感性高、特异性强的优点。

山东省胶州某大型肉鸡养殖集团饲养的肉鸡在18日龄出现食欲不振，采食量降低，体温升高至42℃～43℃，呼吸不畅，出现鸡冠发紫，排绿色稀粪等症状。剖检症状为鼻腔和气管内有黏液；全身浆膜和黏膜出血；气管和喉头充血、出血；肺脏、胰腺出血；肾脏肿大出血；尤其是腺胃乳头与肌胃、食道交界处出血更加明显，初步确认感染新城疫病毒。在临床症状基础上进行RT-PCR实验，对病毒进行验证。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

病毒RNA快速抽提试剂盒、一步法RT-PCR扩增试剂盒、DNA分子量标准Marker（100-2000bp）均购自上海生工生物工程有限公司。

1.2 引物设计及合成

以F蛋白基因序列为模板，运用PrimerPremier5.0和DNAMAN进行引物设计筛选，由深圳华大基因科技有限公司进行特异性引物合成。上游引物为GAAGGCGCACTTACTACAC，下游引物为TCCCAAGCCATAATAAGGT，预计扩增片段为496bp。

1.3 病原RNA提取

将采集的10份鸡喉气管组织样品研磨后，按照1∶5的比例加入生理盐水混合，反复冻融3次，3000r/min离心10min，取上清后备用。采用病毒RNA快速抽提试剂盒进行病毒RNA的提取。

1.4 RT-PCR反应条件

PCR反应体系25.0μL：

10×OneStepRT-PCRBuffer2.5μL、上、下游引物各1μL、AMVRT0.25μL、TaqDNApolymerase0.25μL、RNaseInhibitor0.25μL、模板1.0μL、RNase-freeddH2O18.75μL。

最佳扩增程序：

45℃反 应30min；95.0℃预 变 性5min；94.0℃1min，58.5℃1min，72.0℃1min，进行35个循环；72.0℃延伸10min。

1.5 电泳

反应结束后，取5μLPCR产物，用1%的琼脂糖凝胶电泳观察结果。

2 结果

2.1 剖检临床症状

2.2 琼脂糖凝胶电泳检测

用新城疫病毒特异性引物进行RT-PCR反应，经琼脂糖凝胶电泳检测后，10份样品均在250～500bp，接近500bp处出现明亮的单一条带（如图1）。

图1 临床剖检图

图2 RT-PCR扩增结果

2.3 治疗措施

结合临床症状及RT-PCR检测结果，判断肉鸡感染鸡新城疫病毒。肉鸡在18日龄正处于免疫力最为薄弱的阶段，极易出现死亡现象。对症治疗，选用卡巴匹林钙、金银花、黄芪多糖等进行饮水治疗，起到清热解表、提高免疫力的作用。常规饮水方面：添加电解多维等，目的在于对脱水的控制、对体内钠的调节、减少应激；同时鉴于可能发生继发感染的情况，还应结合使用抗菌药物，例如，氨苄西林、硫酸黏菌素等。每日两次，连用3～5d。

2.4 治疗效果评价

在用药1d后观察死亡率，结果表明：在用药第2d后，死亡率明显下降；待第4d后，死亡率得到了控制；在第5d时，未见死亡数。从鸡的症状上来看，呼吸困难的症状都已消失，治疗获得了较好的效果。

3 讨论

随着我国家禽业的规模化集约化发展，鸡群混合感染和二次感染现象日益增多。目前新城疫是影响家禽业持续发展的主要疾病之一，引起了人们的高度重视[4]。鉴于新城疫对我国禽业的危害，急需建立一种特异性好、灵敏度高，可以快速、准确地检测NDV的诊断方法，提高我国禽业关于病毒的检测水平。

鸡新城疫是一种致死率较高的禽类传染病，所以在养殖过程中还是要以预防为主，及时做好养殖场的清理、消毒工作；做好疾病的检疫和接种工作。有研究表示黄芪、大青叶、金银花、板蓝根、百花蛇舌草、鱼腥草、野菊花等几类中药在抑制鸡新城疫病的疗效上有所区别，其中金银花具有较显著的抗病毒效果[5]。在疾病发生早期发现，早利用中西医结合的方式给予治疗，在很大程度上还是可能治愈的，极大地降低鸡新城疫引发的经济损失，这对于提升养殖户的经济收益，促进我国禽类产业的发展有巨大作用。