白芍不同炮制品中5种成分差异研究

王新民　王晴　冯杰　魏志华

摘要：采用高效液相法（HPLC）测定了白芍生品及5种炮制品（清炒白芍、醋制白芍、酒制白芍、土炒白芍和麸炒白芍）中芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖及儿茶素等5种成分含量，结果表明白芍生品中芍药苷含量高于其他炮制品含量，其高低顺序为生品>酒制品>醋炒品>麸炒品>清炒品>土炒品，而白芍生品中芍药内酯苷含量低于其他炮制品;清炒白芍中没食子酸含量最大为0.132%，酒制白芍中含量最小为0.106%，其含量顺序为清炒品>麸炒品>土炒品>醋炒品>生品>酒制品;白芍生品中1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖含量最低（0.259%），而酒制白芍中最高（0.297%），其含量顺序为酒制品>炒制品>麸制品>醋制品>土制品>生品;所有炮制品中儿茶素含量变化不大。

关键词：白芍;炮制;HPLC;成分检测

中图分类号： 文献标识码：A  文章编号：

白芍为毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，广泛应用于人及动物疾病的治疗，但需经炮制后入药;其炮制方法多样，常用炮制品有生白芍、清炒白芍、酒炙白芍、醋炙白芍、麸炒白芍、土炒白芍、硫磺熏蒸以及发酵等多种，不同的炮制方法对其化学成分会产生不同的影响，从而影响其临床疗效;2020版《中华人民共和国药典》对生白芍、炒白芍和酒白芍有较完善的质控标准，但对其炮制品没有明确的质量控制标准，容易造成炮制品在临床应用时质量参差不齐，炮制品质量难以得到保证。本研究通过对不同炮制品中多种标示性成分进行定量检测，以期为白芍炮制加工提供依据，同时为完善白芍不同炮制品的质量标准提供些许参考。

1仪器与材料

实验所用主要仪器有Waters-e2695高效液相色谱仪、BSA224S-CW十万分之一分析天平（赛多利斯特科学仪器有限公司）、FL-1封闭电炉、SC-1000Y型高速多功能粉碎机、101-3A型电热鼓风干燥箱、KQ-100DB型数控超声波清洗器以及铁锅等。药材及试剂有白芍生品（购于郑州瑞龙饮片公司）、芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素等对照品（均购于上海源叶生物科技有限公司）、黄土、麸皮、黄酒、白醋、甲醇（色谱纯，3000 mL，Thermo Fisher Scientific Inc.），乙腈（色谱纯，3000 mL，Thermo Fisher Scientific Inc.）、娃哈哈纯净水、乙醇及磷酸等。白芍炮制品及炮制方法见表1。将白芍生品及其5种炮制品放凉，使用高速多功能粉碎机将其粉碎后，过60目筛，装入分装袋，标记，备用。

2样品的制备

2.1 对照品溶液的制备

用十万分之一分析天平分别精密称取干燥至恒重的芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素等对照品适量于6个10mL棕色容量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成对照品储备液;取各对照品储备液配制成每1 mL含芍药苷50.10 μg、芍药内酯苷50.20 μg、没食子酸50.10μg、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖50.10μg和儿茶素50.20 μg的混合对照品溶液，于4℃冰箱保存，上机测定前用0.22 μm微孔滤头滤过。

2.2 供试品溶液的制备

分别取白芍生品及其5种炮制品粉末各0.1 g，精密称定，分别倒入6个50 mL容量瓶中，向容量瓶中各加入稀乙醇溶液35 mL，使用超声仪超声30 min，温度设定为30℃，然后放入离心机中进行离心，取上清液转移至容量瓶中，加稀乙醇定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得，保存于4℃冰箱。上机测定前用0.22μm微孔滤头滤过。

3含量测定

3.1 色谱条件

GS-120-5-C-A色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相采用0.1%磷酸溶液（A）和乙腈（B），检测波长设置为230nm，柱温为30℃，流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL;梯度洗脱程序为0～5 min，10%～15% B，5～25 min，15%～25% B，25～45 min，25%～65% B;理論板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

3.2方法学考查

3.2.1稳定性试验

制备芍药生品溶液后0、6、12、24和48 h，按照“3.1”项色谱条件分别测定芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素等5种成分，根据色谱参数，计算5种成分峰面积的RSD分别为1.36%、1.78%、1.69%、0.94%和1.68%。表明48 h内供试品溶液稳定性良好。

3.2.2 精密度试验

按照“3.1”项色谱条件进样测定芍药苷对照品溶液，连续进样6次，根据色谱峰参数，计算其峰面积的RSD为0.58%;同样方法得对照品芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素峰面积RSD分别为0.76%、0.62%、0.88%和0.76%，均小于3%，表明HPLC仪器精密度良好。

3.2.3重复性试验

按照“3.1”项色谱条件进样测定制备好的芍药生品溶液6次，根据色谱参数，计算5种成分峰面积的RSD分别为2.18%、2.42%、1.85%、1.79%和1.88%，均小于3%，表明该方法重复性良好。

3.2.4线性关系考察

芍药苷对照品溶液稀释处理后，按照其浓度的0.1、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0倍依次上机，得到进样量X与峰面积Y的关系方程式为Y = 13469.568X-146.328，r = 0.9992，表明芍药苷在0.1000 -1.2000 mg间成良好的线性关系;同样方法得到对照品芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素进样量X与峰面积Y的关系方程式分别为Y = 11398.684X-310.248（r = 0.9995）、Y = 10529.443X-136.448（r = 0.9992）、Y = 10785.426X-144.398（r = 0.9996）和Y = 10875.523X-156.287（r = 0.9994），其进样量和峰面积之间均为良好线性关系。

3.3 含量测定

将对照品和供试品溶液用0.22μm微孔有机滤头滤过，分别注入高效液相色谱仪，得到HPLC色谱图，根据色谱峰面积，利用外标一点法计算各成分含量。

4 结果与分析

利用HPLC法测定白芍生品及5种白芍炮制品中芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸、1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖和儿茶素的含量，结果见表2。

4.1芍药苷含量

由表2知，所有白芍供试品中，芍药苷含量均大于1.6%，符合《中华人民共和国药典》2020年版规定的白芍质量控制标准。白芍生品中芍药苷含量高达2.98%，高于供试品中其他炮制品含量，说明白芍生品在不同的炮制过程中，芍药苷均有不同程度的损失，其机制可能有两种，一种是炮制过程中的高温加热条件使得芍药苷部分分解，另一种可能是芍药苷与炮制辅料发生反应而损失。芍药苷质量分数从高到低顺序为生品>酒制品>醋炒品>麸炒品>清炒品>土炒品，该趋势与连德明、刘素香等研究结论相似，而连德明研究报道中所测定白芍生品中芍药苷最高含量为1.95%，酒白芍中为1.92%。远低于本实验相应炮制品中芍药苷质量分数。芍药苷作为《中华人民共和国药典》2020年版收载白芍药材的指标性成分，其炮制工艺对其含量影响较大，所以制定炮制加工标准对中药质量标准制定有重要意义。

4.2 芍药内酯苷含量

供试品中醋制品所含芍药内酯苷最多，麸制品中芍药内酯苷含量与其无差别，其次是酒制品、炒制品、土制品，而白芍生品中芍药内酯苷最少（见表2）。白芍经炮制后，其临床效果存在变化，与药物本身成分含量变化相关。白芍生品中芍药苷含量较高，而经炮制后白芍炮制品酸性和寒性降低，具有了抗惊厥、镇痛镇静之效，而该药效正是芍药内酯苷所具有，推测可能是白芍生品中芍药苷经炮制后，促进了芍药内酯苷成分含量的增加。刘素香等通过采用HPLC法测定白芍及其炮制品中芍药内酯苷含量，整体小于本次试验测定结果，芍药生品中芍药内酯苷含量最低，与本试验结果一致;而土炒品中含量最高，麸炒品大于酒制品和醋炒品，与本试验结论相左。由于本试验和刘素香等测定方法相似，所以，造成结果不同的原因应归因于炮制过程中，而炮制方法、辅料成分、热量等因素的差异，使得部分芍药苷转化为芍药内酯苷时比例不同。

4.3没食子酸与1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖含量

白芍生品中没食子酸含量为0.116%，高于酒制白芍，而低于其他炮制品，其中清炒白芍中没食子酸含量最大为0.132%，而酒制白芍中含量仅为0.106%;没食子酸质量分数从高到低顺序为清炒品>麸炒品>土炒品>醋炒品>生品>酒制品，该趋势与于定荣等报道相似，而其研究结果中相应炮制品没食子酸含量均低于本实验所测数据。没食子酸是一种有机酸，易溶于醇，在酒制过程中，高温条件下，可能会失去二氧化碳成焦性没食子酸，使得检测时没食子酸含量降低。全部炮制品中的1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖含量均比白芍生品高，酒制白芍中1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖含量最高为0.297%，说明炮制过程中，辅料、温度等因素促进了1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖的溶出或者生成，其机制有待进一步研究;其质量分数顺序为酒制品>炒制品>麸制品>醋制品>土制品>生品。

4.4儿茶素含量

白芍生品、清炒白芍和土炒白芍中儿茶素含量均为0.035%，低于酒制白芍、麸炒白芍和醋制白芍，而后三者中儿茶素含量接近，本试验中所用白芍生品直接购买于药店，无白芍药材，没有测定白芍药材中儿茶素含量。于定荣等研究证明白芍药材（含儿茶素较高）切制后（为白芍生品），儿茶素含量明显降低，而白芍生品炒制后含量基本保持不变，酒制和醋制后儿茶素含量均明显增加，但没有到达白芍药材含量值。究其原因可能是儿茶素不稳定，白芍药材中含量较高，切制时，高温使其分解，使得白芍生品中含量偏低;后经辅料催化，在加热条件下，儿茶素分解物又可能重新合成了部分儿茶素，具体机制可做更深层次研究。

5 结论与讨论

中药炮制是否得法對中药药效影响很大，在炮制过程中其诸多成分会发生变化，有些成分含量会增加或减少，甚至消失，有些成分可能是新生成物。因此，研究中药炮制前后理化性质的变化以及同种中药不同炮制品的理化性质的差异，对探讨中药炮制作用和原理具有重要意义。通过本次研究结果可看出，白芍炮制品中芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸及1，2，3，4，6-五没食子酰基葡萄糖含量均发生了不同程度的改变，原因除了与各成分自身物化特性有关外，辅料成分、用量、温度及炒制火候的把握等炮制方法也起到关键性作用，比如芍药苷、芍药内酯苷及儿茶素等成分易溶于水或醇等，在炒制（加热）过程中不稳定发生分解。所以，加强白芍炮制方法的规范与统一，有利于实现其饮片质量控制，从而保障其质量与临床安全用药。

参考文献：

[1] 国家药典委员会编. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京： 中国医药科技出版社，2020， 115-120.

[2] 于定荣， 邓志灏， 翁小刚， 等. 炮制加工对白芍中9个成分含量的影响[J]. 中药材， 2020，43（12）： 2909-2913.

[3]刘素香， 黎阳， 丰晶， 等. 不同炮制方法对白芍质量的影响[J]. 药物评价研究，2010，33（02）：125-128.

[4]黄斐然， 张泽国， 徐富菊. 不同加工炮制方法对白芍质量的影响研究[J]. 中兽医医药杂志，2015， 34（4）： 31-33.

[5]连德明. 白芍不同炮制品芍药苷含量测定及其镇痛作用的比较研究[J]. 北方药学， 2017， 14（2）： 136.

[6]吴国学. 不同炮制方法对白芍中多种化学成分的影响分析[J]. 国医论坛， 2018， 33（4）： 62-63.

[7] 胡雨， 金传山， 张伟. 不同炮制方法对白芍质量的影响[J]. 安徽中医药大学学报， 2015， 34（2）： 91-94.

基金项目： 河南省教育厅重点项目（19B360002）;河南牧业经济学院院级重点培育学科-中兽药生药学项目（41000003）

作者简介： 王新民（1970—），男，河南虞城人，博士，副教授，从事中药制剂分析教学及相关科研工作