lncRNA SNHG15在胃癌组织中的表达及临床意义

冀 叶，袁小笋，张 蕾，马慧利，董 薇，李长生，张敬伟，任中海，张怡飞

（1.南阳市中心医院肿瘤内科二病区，河南 南阳 473000；2.南阳市第二人民医院肿瘤科，河南 南阳 473000；3.郑州大学第一附属医院肿瘤内科，河南 郑州 450001）

胃癌是消化道常见的恶性肿瘤，发病率高、恶性程度高，且早期不易被发现，多数患者确诊时已处于中晚期，疗效不佳，病死率较高[1]。有研究发现，转移和复发是导致胃癌患者死亡的主要因素[2]。因此，探讨与胃癌转移和复发相关的分子机制对指导治疗及改善预后意义重大。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一种缺乏开放阅读框的RNA，没有或仅有少量蛋白编码功能，长度>200 nt，可对表观遗传、转录及转录后基因表达进行调控，在多种生理病理过程中发挥着重要作用[3]。小核仁RNA宿主基因15（small nuclear RNA host gene 15，SNHG15）作为新近发现的一种lncRNA，在多种恶性肿瘤组织中表达异常[4]，且与肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭转移过程密切相关[5]，但其在胃癌中的表达情况少有报道。本研究拟通过检测胃癌组织中SNHG15表达，探讨其在胃癌中的作用，以期为胃癌的机制研究提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

收集2012年5月—2015年5月南阳市中心医院择期行根治性手术治疗的胃癌患者97例，其中男59例、女38例，年龄（56.31±10.35）岁。所有患者均经胃镜及病理学检查确诊，术前未接受任何治疗。97例患者中，肿瘤≥5 cm者55例，肿瘤<5 cm者42例；低分化者61例，中高分化者36例；TNM分期Ⅰ期6例、Ⅱ期34例、Ⅲ期31例、Ⅳ期26例；发生淋巴结转移62例。本研究经南阳市中心医院医学伦理委员会批准（批准号：NYSZXYYZLK201108160933），所有患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 胃癌患者组织样本及一般资料收集 收集术中留取的肿瘤中心组织及距肿瘤边缘5 cm以上且病理学检查正常的胃黏膜组织，冲洗后液氮冷冻，-80 ℃保存。同时收集所有患者的一般资料，包括性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、Lauren分型、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移情况等。

1.2.2 实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测 取胃癌组织和正常胃黏膜组织，剪碎后超声匀浆。采用Tizol试剂盒（上海源叶生物科技有限公司）提取总RNA，用双蒸水溶解，-80 ℃保存。检测提取的总RNA的纯度和浓度。采用PrmeScriptRT reagent Kit[宝生物工程（大连）有限公司，货号DRR037]将RNA逆转录为互补DNA（complementary DNA，cDNA），-20 ℃保存。采用7500实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）及PCR Amplification Kit[宝生物工程（大连）有限公司，货号：DRR081]进行扩增。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。SNHG15：上游5'-GTTGCCTGACCATTCCTGAG-3'，下游5'-AGTAAGCTCTTCCACTTTGAGACC-3'。GAPDH：上游5'-CCAAAATCAGATGGGGCAA TGCTGG-3'，下游5'-TGATGGCATGGACTGT GGTCATTCA-3'。反应条件：95℃ 3 min，95℃30 s，56 ℃ 30 s，73 ℃ 30 s，38个循环。每份样本设6个复孔。以GAPDH为内参，采用2-△△Ct法计算SNHG15的相对表达量。

1.2.3 随访 对所有患者从术后第1天开始随访5年，形式包括院内查房、院外电话、门诊复查及病历追踪等，随访截止时间为2020年5月31日。随访终点为死亡或随访满5年，随访中无失访病例。患者生存时间定义为术后第1天至死亡的时间。

1.3 统计学方法

采用SPSS 14.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料采用±s表示，组间比较采用t检验。采用Kaplan-Meier生存曲线分析患者术后生存期，采用Cox比例风险模型对预后影响因素进行分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织和正常胃黏膜组织中SNHG15表达

胃癌组织SNHG15相对表达量为2.35±0.22，高于正常胃黏膜组织（1.02±0.10）（t=54.319，P<0.001）。

2.2 不同临床病理特征患者胃癌组织中SNHG15的表达

不同性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和Lauren分型的患者之间胃癌组织SNHG15相对表达量差异均无统计学意义（P>0.05），不同分化程度、TNM分期、浸润深度和淋巴结转移患者之间胃癌组织SNHG15相对表达量差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 不同临床病理特征患者胃癌组织中SNHG15的表达

2.3 SNHG15表达对胃癌患者生存期的影响

对97例胃癌患者随访3～60个月，中位随访时间为32个月。以胃癌组织SNHG15相对表达量的第25百分位数（P25）（2.18）为临界值，将患者分为低表达组（25例，S N H G 1 5≤2.1 8）和高表达组（7 2例，SNHG15>2.18）。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，低表达组平均生存时间[（53.20±2.92）个月]和5年生存率（80.00%）均高于高表达组[（30.38±2.32）个月、23.61%]（Log-rank χ2=20.832，P<0.001）。见图1。

图1 不同SNHG15相对表达量胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲线

2.4 胃癌患者死亡影响因素分析

Cox比例风险模型分析结果显示，低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移和SNHG15高表达是影响胃癌患者预后的危险因素[风险比（hazard ratio，HR）分别为0.381、2.568、2.892和4.851]。见表2。

表2 胃癌患者预后影响因素的多因素分析

3 讨论

近年来，肿瘤治疗方法的不断发展，特别是靶向药物的应用，在改善患者预后中发挥了重要作用，但胃癌靶向药物治疗效果总体仍不理想[6]。因此，临床亟需寻找与胃癌发生、发展密切相关的敏感基因，为胃癌的基因靶向治疗提供靶点。lncRNA是近年来肿瘤机制研究领域的热点，与肿瘤恶性增殖、侵袭、转移密切相关[7]。有研究发现，lncRNA在胃癌组织中表达异常，参与了胃癌的发生及恶性化进程[8]。SNHG15是一种定位于人7号染色体的lncRNA，已被发现在甲状腺癌[9]、结直肠癌[10]、肺腺癌[11]等多种恶性肿瘤中表达升高。本研究结果显示，胃癌组织SNHG15相对表达量高于正常胃黏膜组织（P<0.001），说明SNHG15在胃癌组织中呈高表达；低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度T3～T4和发生淋巴结转移的胃癌患者的癌组织SNHG15相对表达量明显升高，提示SNHG15可能参与了胃癌的发生、发展。

有研究结果显示，SNHG15与上皮性卵巢癌不良预后有关，可作为患者预后的生物标志物[12]。DONG等[13]的研究结果显示，SNHG15高表达与肺癌患者较差的预后有关。本研究结果显示，SNHG15低表达组平均生存时间和5年生存率均高于高表达组（P<0.001），说明SNHG15表达与胃癌患者预后有关，SNHG15高表达可能是患者预后不良的标志。Cox比例风险模型分析结果显示，分化程度、TNM分期、淋巴结转移和SNHG15表达是影响胃癌患者预后的风险因素，提示SNHG15或可作为评估患者预后的潜在标志物。

综上所述，SNHG15在胃癌组织中表达升高，且与胃癌分化程度、TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关，是影响患者预后的风险因素，有望成为胃癌机制研究及预后评估潜在的生物标志物，但其在胃癌中的具体作用机制还有待进一步研究。