特发性黄斑前膜的组织病理学特征
2022-07-12项振扬金琴辉罗华荣甘梅富徐伟铭张昕郑玥
项振扬 金琴辉 罗华荣 甘梅富 徐伟铭 张昕 郑玥
作者单位：1 温州医科大学附属台州医院眼科，台州 317000；2 温州医科大学附属台州医院病理科，台州 317000
视网膜内面无血管纤维增生膜出现在黄斑者称为黄斑视网膜前膜，简称黄斑前膜，其中绝大多数无确切原因可循，称为特发性黄斑前膜（Idiopathic epiretinal membrane，IMEM)。因其牵拉黄斑区视网膜造成黄斑区视网膜结构紊乱、黄斑水肿，甚至裂孔，进而引起视力下降及视物变形，而成为危害中老年人视觉功能的重要因素。现有的IMEM临床分期标准主要是根据体征、光学相干断层扫描（OCT）图像特点进行的，没有组织病理学方面的描述。为更好地认识IMEM疾病各个阶段的组织细胞学差异及变化规律，现从HE染色、免疫组织化学检查及特殊染色方面对各期IMEM的组织病理学特征进行观察分析，报告如下。
1 对象与方法
1.1 对象
选取台州医院路桥院区2016年2月至2018年9月期间收治的通过玻璃体切割联合内界膜-黄斑前膜剥除术治疗的IMEM患者。
纳入标准：①经检眼镜检查见黄斑区存在金箔样反光或覆盖玻璃膜样物质，引起局部视网膜皱褶，伴或不伴黄斑周围小血管扭曲变形；②OCT检查显示黄斑区视网膜表面有强反光带；③符合玻璃体切割联合内界膜-黄斑前膜剥除手术指征。排除标准：①合并其他眼部手术、激光治疗及外伤史；②存在高度近视、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜裂孔、视网膜脱离、葡萄膜炎等眼底合并症；③未联合内界膜剥除的前膜标本；④标本量过小或不完整且无法完成全部病理检查项目的病例标本。
最终纳入IMEM患者60例（62眼），其中2例为双眼发病。年龄55～78(65.0±5.8）岁，男32例（34眼），女28 例（28 眼）。根据Govetto等首先提出的频域光学相干层析成像（Spectral domain optical coherence tomography，SD-OCT）图像4期分期方案（见图1）将患者分为4组：1期IMEM组（以下简称1组），共5眼；2期IMEM组（以下简称2组），共12眼；3期IMEM组（以下简称3组），共34眼；4期IMEM组（以下简称4组），共11眼。本研究遵循赫尔辛基宣言，并经台州医院路桥院区伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。
1.2 材料和仪器设备
主要试剂：Envision试剂盒（丹麦Dako公司）、一抗SMA（鼠抗人单克隆抗体，克隆号UMAB237，福州迈新公司）、一抗GFAP（鼠抗人单克隆抗体，克隆号EP13，福州迈新公司）、一抗S-100(鼠抗人单克隆抗体，克隆号4C4.9，福州迈新公司）、一抗CD34（鼠抗人单克隆抗体，克隆号QBEnd/10，福州迈新公司）、一抗CD68（鼠抗人单克隆抗体，克隆号KP1，福州迈新公司)、弹性纤维染色液（维多利亚蓝法，珠海贝索生物技术有限公司）、Masson染色试剂盒（Masson三色改良法，珠海贝索生物技术有限公司）。
主要仪器：SPECTRALIS OCT（Heidelberg 69121，德国Heidelberg公司）、lEICA光学显微镜（Leica DM2000，德国Leica公司）、全自动封片机（Leica CV5030，德国Leica公司）、全自动组织脱水机（Leica ASP6025，德国Leica公司）、Thermo组织包埋中心（HistoStar，英国Thermo Fisher Scientific公司）、LEICA染色机（Leica ST5020，德国Leica公司）。
1.3 眼科检查和手术方法
术前每例研究对象均经过详细的病史询问、最佳矫正视力（BCVA）测量、裂隙灯显微镜及双目间接眼底镜、OCT及眼底照相等检查，并记录。手术方式：睫状神经节阻滞麻醉，白内障超声乳化吸除，囊袋内植入折叠式人工晶状体，做标准闭合式23 G玻璃体切割三通道，切除玻璃体后进行黄斑前膜剥除，术中一并剥除内界膜，剥除范围为黄斑中心及黄斑血管拱环内，术中将剥除的带内界膜的前膜组织置入10%中性福尔马林液予固定并送病理处理及检查。
1.4 组织病理学处理
1.4.1 HE染色 即苏木精—伊红染色法：先将膜平铺了解黄斑前膜的一般形态及膜类型、细胞计数；之后进行组织包埋切片进一步观察组织构型、细胞纤维排列特征及细胞组成。
1.4.2 免疫组织化学染色 将二甲苯脱蜡后的切片依次放入100%、95%、75%的乙醇中各5 min，流水冲洗后置入3%的HO10 min，然后在EDTA（PH=9.0）水浴修复20 min，滴加一抗，滴加Envision检测系统，DAB显色复染。对以下指标进行免疫组织化学检查：①平滑肌肌动蛋白（Smooth muscie actin，SMA)：免疫组化染色步骤同上，SMA在肌纤维母细胞或肌上皮细胞中有阳性表达，尤其更容易表达在胶原化显著的前膜组织中，一般呈灶性分布，表现为细胞质的棕黄色着色。②胶质纤维酸性蛋白（Glialfibrillary acidic protein，GFAP）：免疫组织化学染色步骤同上，GFAP是胶质细胞活动的标志物，在胶质细胞中有阳性表达，表现为细胞质的棕黄色着染。③S-100：免疫组织化学染色步骤同上，S-100是一种可溶性酸性蛋白，在神经组织中有阳性表达，表现为细胞质或细胞核的棕黄色着色。④CD34：免疫组织化学染色步骤同上，CD34是一种单联穿膜蛋白，是内皮细胞标记物，在血管内皮细胞中有阳性表达，表现为细胞膜或细胞质的棕黄色着色。⑤CD68：免疫组化染色步骤同上，CD68是细胞浆糖蛋白，与溶酶体颗粒有关，是巨噬细胞最可靠的标记物，在巨噬细胞中有阳性表达，表现为细胞质的棕黄色着色。
图1.IMEM的SD-OCT图像4期分期方案A：1期IMEM，前膜较稀薄，中心凹区域视网膜形态改变轻微，仍存在中心凹凹陷，视网膜亚组织分层均较清晰；B：2期IMEM，中心凹区域视网膜形态改变明显，外核层增厚，中心凹凹陷消失，但视网膜亚组织分层仍较为清晰；C：3期IMEM，连续的异常中心凹内层（EIFL）覆盖整个中心凹区域，中心凹凹陷消失，但视网膜亚组织分层仍能较清晰辨认；D：4期IMEM，较厚的前膜，EIFL进一步增厚，覆盖整个中心凹区域，中心凹凹陷消失，该区域视网膜结构紊乱，亚组织分层不清。IMEM：特发性黄斑前膜；SD-OCT：频域光学相干层析成像Figure 1.Representative SD-OCT images of IMEM in each stage.A:Stage 1.The IMEM was thin,the foveal morphology changes slightly and the foveal pit was present.The local retinal layers were well-defined.B:Stage 2.The foveal morphological changes were more pronounced,the outer nuclear layer thickens,and the foveal pit disappears,but the retinal layers were welldefined.C:Stage 3.The continuous ectopic inner foveal layer (EIFL) covers the entire foveal area.The foveal pit disappeared,but the retinal layers were still discernible.D:Stage 4.The IMEM was thick.The EIFL was further thickened,covering the entire foveal area,and the foveal pit disappeared.The local retinal structure was disordered,and the retinal layer stratification became obscure.IMEM,idiopathic epiretinal membrane.SD-OCT,spectral domain optical coherence tomography.
1.4.3 特殊染色 弹力纤维染色：显示组织中纤维的染色方法。具体方法如下：将二甲苯脱蜡后的切片依次放入100%、95%、75%的乙醇中5 min，流水冲洗后，0.5%高锰酸钾氧化5 min，1%草酸溶液漂白，水洗，95%乙醇稍洗，浸入Elastin染液中常温作用12 h，1%盐酸乙醇分化、水洗，Van Gieson染液染1 min，95%乙醇快速分化，无水乙醇脱水后二甲苯透明封片。显色时弹力纤维呈蓝黑色，胶原纤维呈红色，肌纤维、红细胞呈黄色。
Masson染色：显示组织中纤维的染色方法。具体方法如下：将二甲苯脱蜡后的切片依次放入100%、95%、75%的乙醇中5 min，流水冲洗后，0.5%高锰酸钾氧化5 min，1%草酸溶液漂白、水洗，Masson复合液染色5 min，0.2%醋酸水溶液稍洗，5%磷钨酸3 min，0.2%醋酸水溶液再次冲洗，无水乙醇脱水后二甲苯透明封片。显色时胶原纤维呈蓝色或绿色，肌纤维、纤维素呈红色。
1.4.4 细胞密度统计 光学显微镜下观察，将400倍单位视野下的总细胞个数定义为细胞密度。具体方法如下：选择朗珈数字成像系统PathQC V2.0自动截取的1个画面记为1个视野，高倍（400倍）视野下进行观察，每张片随机取5个满视野计数，5个视野计数的结果取平均值记为细胞密度。
1.5 读片质量控制
所有染色均设阴性和阳性对照，并由2位高年资病理科医师交叉读片，光学显微镜下观察，分别记录每例标本数据，包括膜组织类型、组织构型特点、细胞密度、免疫组织化学阳性率、特殊染色的纤维定性等各项指标，归组总结。
1.6 统计学方法
前瞻性临床研究。采用SPSS 26.0软件包进行统计学分析。对数据进行正态性检验，符合正态分布的计量资料以表示，分类变量计算百分率（%）。基线资料比较中，年龄、病程、视力、黄斑中心凹厚度的比较采用方差分析，视力及黄斑中心凹厚度的多重比较采用LSD-t
检验。各组膜组织类型分布及各免疫组织化学阳性率比较采用χ
检验。各组细胞密度的分布情况比较采用Kruskal-WallisH
检验，各组间的两两比较通过Bonferroni校正法。以P
＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 基线资料比较
各组患者年龄、病程（指从主诉发现眼部症状至接受手术时间）比较差异均无统计学意义（F
=0.68，P
=0.565；F
=0.64，P
=0.595）。术前最佳矫正视力（BCVA）差异有统计学意义（F
=10.74，P
＜0.001）；进一步两两比较显示，1组和2组的术前BCVA差异无统计学意义（P
=0.352），余各组之间的差异均有统计学意义（P
＜0.05）。术前各组黄斑中心凹厚度（Central macular thickness，CMT）差异有统计学意义（F
=96.89，P
＜0.001），各组之间两两比较差异均有统计学意义（均P
＜0.05）。见表1。2.2 IMEM的膜组织类型
HE染色后进行组织平铺展开，光学显微镜下观察IMEM大致可分为以下2种组织类型：（1）致密型（见图2A）：细胞排列密集，纤维相对致密均匀，染色稍深；（2）稀疏型（见图2B）：整体结构以松散的纤维为支架，其间散在少许清晰可数的细胞，纤维相对疏松，染色较淡。4组均涵盖了这2种膜组织类型，从1 组到4组，致密型占比分别为60%、67%、24%及9%；稀疏型分别占40%、33%、76%及91%。4组膜组织类型分布差异有统计学意义（χ
=11.44，P
=0.006），见表2。2.3 各期IMEM的组织构型特点
将IMEM标本经HE染色后组织包埋切片进行光学显微镜观察，见淡红色胶原纤维构成前膜支架，细胞沿纤维支架分布，主要细胞为成纤维细胞及形态相似细胞，间杂巨噬细胞、淋巴细胞、红细胞及光学显微镜下尚无法定性的细胞。各期前膜组织结构特点如下。
2.3.1 1期IMEM 可见细胞排列密集，HE染色光镜下见以呈梭形的成纤维细胞为主，簇状或沿胶原纤维排列成排，胞质丰富，颜色较胶原纤维更深，呈红色或紫红色，胶原纤维相对较少，致密均匀分布，与细胞胞质无间隙，部分较薄，纤维自主体结构向外延伸。见图3A、3E。
2.3.2 2期IMEM 细胞仍以沿胶原纤维排列成排分布为主，光镜下细胞仍以呈梭形或椭圆形的成纤维细胞为主，胞质较丰富，聚集度较1期前膜有所降低，胶原纤维结构较1期前膜疏松，呈现条栅状的支架结构。见图3B、3F。
2.3.3 3期IMEM 细胞聚集度进一步降低，胶原纤维膨胀扩展延伸，HE染色颜色较淡，多个横断面显示部分胶原纤维支架上无细胞分布，成纤维细胞胞核呈梭形或椭圆形、圆形，胞质减少，部分似被胶原纤维“取代”。见图3C、图3G。
2.3.4 4期IMEM 细胞成分仍以成纤维细胞为主，胞质少，胶原纤维排列更无规律性，部分纤维菲薄、进一步膨胀扩展，甚至呈空泡状改变，细胞聚集度低，部分视野见条片状的“纯胶原纤维”。见图3D、3H。
表1.各组特发性黄斑前膜患者临床资料比较
Table 1.Clinical characteristics of IMEM patients in each group
Group 1,pathological Stage 1 of IMEM;group 2,pathological Stage 2 of IMEM;group 3,pathological Stage 3 of IMEM;group 4,pathological Stage 4 of IMEM.IMEM,idopathic epiretinal membrane;BCVA,postoperative best-corrected visual acuity;CMT,central macular thickness.
图2.特发性黄斑前膜的膜组织类型A：致密型，可见前膜纤维致密，染色深，细胞较多且密集；B：稀疏型，可见前膜纤维松散，细胞沿纤维散在少许分布Figure 2.Two types of histopathological images of the IMEM.A:Dense cell type of IMEM,dense fibers,deep staining,dense cells presence.B:Sparse cell type of IMEM,loose fibers,few cells scattered along the fibers.IMEM,idiopathic epiretimal membrane.
表2.各组膜组织类型分布情况
Table 2.Distribution of membrane types in each group
Group 1,pathological Stage 1 of IMEM;group 2,pathological Stage 2 of IMEM;group 3,pathological Stage 3 of IMEM;group 4,pathological Stage 4 of IMEM.=11.44,=0.006. IMEM,idiopathic epiretinal membrane.
图3.各期特发性黄斑前膜的病理组织结构特点A—D：低倍镜下1、2、3、4期IMEM的HE染色切片病理组织结构；E—H：高倍镜下1、2、3、4期IMEM的HE染色切片病理组织结构。A、E：1期膜内细胞以IMEM 成纤维细胞为主，胞质丰富，沿胶原纤维密集排列，胶原纤维相对较少，分布均匀，与细胞间隙小。B、F：2期膜内IMEM 细胞聚集度降低，胶原纤维变疏松，其余结构特征基本同1期表现。C、G：3期膜内IMEM 细胞聚集度进一步降低，胶原纤维扩张并延长，成纤维细胞的细胞核呈梭形、椭圆形或圆形。D、H：4期IMEM 成纤维细胞胞质少，胶原纤维排列紊乱，部分呈空泡状改变Figure 3.Pathological and structural characteristics of IMEM in each group.A-D:Low magnification images of HE-stained sections from stage 1-stage 4 IEME respectively.E-H:High magnification images.A,E:The cells in stage 1 IMEM mainly consist of fibroblasts with rich cytoplasm,which are densely arranged along the evenly distributed collagen fibers.The fibers were relatively few and in close contact with the cells.B,F:Cell density decreases and collagen fibers became loose in stage 2 IMEM.Other structural features were basically similar to those in stage 1.C,G:Cell density further decreases and collagen fibers were expanded and elongated in stage 3.The nuclei of fibroblasts were spindle,oval,or round.D,H:Fibroblasts in stage 4 IMEM have less cytoplasm,collagen fibers were disordered,and some of them show vacuolar changes.IMEM,idiopathic epiretimal membrane.
2.4 各期膜组织细胞密度情况
记录在400 倍光镜下各组细胞密度，发现从1 组到4 组，细胞密度分别为10.2～43.5（中位数为34.2）、20.8～56.5（中位数为50.6）、14.3～28.8（中位数为19.5）、9.6～17.2（中位数为12.0），4组间差异有统计学意义（H
=13.73，P
=0.003）。采用Bonferron法校正显著性水平的进一步两两比较显示2 组和4组细胞密度差异有统计学意义（标准H
=3.69，校正P
=0.001），余组间细胞密度差异均无统计学意义（1组与2 组比较：标准H
=-1.31，校正P
=1.000；1 组与3组比较：标准H
=0.26，校正P
=1.000；1组与4组比较：标准H
=1.57，校正P
=0.706；2组与3组比较：标准H
=2.44，校正P
=0.088；3组与4组比较：标准H
=2.08，校正P
=0.227）。2.5 免疫组织化学表现
各组病例SMA均以阳性表达为主，其中1 组、2组、4组SMA无阴性表达；各组病例S-100均以阴性表达为主，其中1组、4组无阳性表达；各组病例CD68则均有阳性和阴性表达。各组SMA、S-100、CD68 等免疫组织化学阳性率比较，差异均无统计学意义（χ
=0.84，P
=1.000；χ
=2.63，P
=0.429；χ
=1.33，P
=0.745）。各组CD34均无阳性表达，表明黄斑前膜属于非血管性纤维组织，光镜下类似的血管内皮细胞样实为其他细胞。各组GFAP均为阳性表达，提示各期黄斑前膜主要组成细胞均为胶质细胞，见表3。各免疫组织化学染色表现见图4。2.6 弹力纤维染色和Masson染色结果
经过弹力纤维染色及Masson染色证实所有组别的IMEM纤维成分均为胶原纤维，并可与胞质延伸后形态如纤维支架的细胞结构进行区分。对各组特殊染色结果进行比较可见各期IMEM结构有其共性的一面，其总体支架均由胶原纤维构成，以支架为基体散在细胞分布，纤维扭曲折叠。但是1期到4 期，纤维由均匀的染色状态逐渐变得不均匀、染色浓淡不一，纤维结构从致密逐渐变疏松，直至3期、4期可见纤维扩张、铺展，局部呈现空泡样改变。见图5。
3 讨论
图4.特发性黄斑前膜免疫组织化学染色图A：SMA阳性图，组织中可见大量胞质被染成棕黄色的细胞分布；B：GFAP阳性图，组织中可见大量被染成棕黄色的细胞分布；C：S-100阳性图，组织中可见部分被染成棕黄色的细胞分布；D：CD34阴性图，组织中未见包膜或胞质被着染的细胞。E：CD68阳性图，组织中可见少量胞质被染成棕黄色的大细胞Figure 4.Specific immunohistochemical staining of the IMEM.A:SMA staining,positive cells marked with brown-yellow cytoplasm in the tissue.B:GFAP staining,positive cells marked with brown-yellow in the tissue.C:S-100 staining,positive cells marked with brown-yellow in the tissue.D:CD34 staining,negative staining.E:CD68 staining,few positive cells marked with brown-yellow in the tissue.IMEM,idiopathic epiretinal membrane;SMA,smooth muscie actin;GFAP,glialfibrillary acidic protein.
表3.特发性黄斑前膜各组免疫组织化学阳性率比较
Table 3.Comparison of positive rates of various immunohistochemical staining among groups
All IMEM samples were CD34 negative,while GFAP staining was positive in all samples.Group 1,pathological Stage 1 of IMEM;group 2,pathological Stage 2 of IMEM;group 3,pathological Stage 3 of IMEM；group 4,pathological Stage 4 of IMEM.IMEM,idiopathic epiretinal membrane.
图5.各期特发性黄斑前膜组织弹力纤维染色和Masson染色情况A—D：分别为1期到4期IMEM组织的弹力纤维染色结果，可见被染成红色的胶原纤维逐渐从致密变稀疏，逐渐扩张、伸展；E—H：分别为1期到4期IMEM组织的Masson染色结果，可见被染成较淡蓝绿色的胶原纤维逐渐从致密变稀疏，后期扩张、伸展Figure 5.Elastic staining and Masson staining of IMEM tissues in each stage.A-D:Elastic fiber staining of IMEM tissues from stage 1 to stage 4.The collagen fibers were dyed red and gradually become sparse from dense,meanwhile the fibers were expanded and elongated.E-H:Masson staining of the IMEM tissues from stage 1 to stage 4 show that the collagen fibers dyed light blue-green gradually become sparse from dense,and expanded and stretched as well in the later stages.IMEM,idiopathic epiretinal membrane.
现代组织病理学的发展已大致了解了IMEM的主要成分，主要构成细胞有神经胶质细胞（主要为Müller细胞）和成纤维细胞，还有一些色素上皮细胞、玻璃体细胞、炎症细胞等。目前的国内外研究热点主要是IMEM手术前后的OCT结构形态及视功能变化。在基础研究方面成果较少，基本侧重于IMEM的蛋白表达、细胞因子表达、手术前后光感受器细胞和神经节细胞层的形态特征变化。现有的IMEM临床分期标准主要基于临床体征、OCT图像特点，没有组织细胞学和视功能标准的描述。通过本研究希望能进一步完善组织病理细胞学方面的资料，并为以后相应各期IMEM视功能方面的研究及新药开发提供一定的理论基础。由于内界膜在黄斑前膜的发生发展及手术治疗中均意义重大，尤其在1期、2期前膜中二者难以完全独立区分，故本研究将黄斑前膜-内界膜作为一个复合体来进行研究阐述。
本研究发现，不同分期的IMEM组织切片在光学显微镜下有不同的表现形式，从组织病理学结构来看1期到4期，组织的细胞聚集度有降低趋势，细胞的胞质减少，组织内胶原纤维由致密变得疏松；再结合各组膜组织类型分布及对细胞密度的比较，证实在IMEM疾病发展过程中，细胞增殖强度及纤维扩张状态有所不同。从各组细胞密度中位数上我们可以看出细胞密度从高到低依次为2 组、1 组、3 组、4 组，并非完全遵循逐期降低的规律，我们推测可能从1 期到2 期细胞增殖进一步活跃，到3 期、4 期时细胞增殖活动减弱，转而以纤维分泌为主，并且这种纤维分泌扩张的表现在后期逐渐领先于细胞的增殖。对细胞密度进一步两两比较发现2 组和4 组差异有统计学意义，余组间比较差异并无统计学意义，故本研究只能说明4期IMEM细胞密度小于2期，尚不能说明细胞密度按1到4期先升后降的规律，这可能与本研究的样本量不足有关，期待后期增大样本量并结合胶原纤维的定量分析去发现其变化规律。
在IMEM的发展过程中，纤维的改变与细胞的增殖是相互影响，相辅相成的，纤维的改变源于分泌它们的细胞的活动，如炎症促使纤维化的发生，在纤维增生的同时又带来视网膜结构的改变。而视网膜结构的改变亦会导致细胞行为的改变，比如是否会带来相应的炎症反应、是否会诱导其他细胞的游走吞噬、是否会刺激神经胶质细胞的增生修复。为了探讨这些问题，我们试图进行各期前膜各成分细胞的构成比统计，但光学显微镜下成纤维细胞与胶质细胞有时难以完全鉴别，需要免疫组织化学染色下计数，但免疫组织切片后组织折叠，细胞占比计数失去其规律性，无法进行上述量化统计，希望日后能发现更为可靠的研究手段对此进行量化研究。
通过针对性的免疫组化染色，SMA、S-100、CD68等抗体在各期IMEM组织中其染色阳性率差异并无统计学意义，这意味着IMEME的细胞类型在IMEM各期基本类似。通过HE染色切片观察，我们发现各期前膜主要细胞的胞质大小有所不同，这是否侧面反映了细胞的内部活动强度，需要我们去探讨研究。前膜组织中的胶质细胞表达一些营养因子受体和转录因子，如NF-kappaB，提示胶质细胞信号转导参与了视网膜前膜的发展过程，而在其发展的各个阶段是否存在差异需进一步研究。Yamamoto等在黄斑前膜的标本中发现白介素-6（Interleukin-6,IL-6)蛋白的表达；Myojin等发现IMEM患者玻璃体腔IL-6、细胞粘合素C等炎性因子的高表达；此外还有多个研究也都揭示了IMEM发生发展伴随着炎症介导反应，如Yoshimura等通过多重微珠分析系统测定IMEM患者的可溶性因子浓度，发现IL-6、IL-8及单核细胞趋化蛋白-1的浓度明显高于对照组；Öhman等基于质谱的无标记定量蛋白质组学方法，对IMEM和黄斑裂孔患者的玻璃体蛋白质组进行分析发现一些独特的玻璃体蛋白，其中许多与炎症和补体级联有关。在本研究的各组组织切片中均发现淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等炎症细胞的存在，这与炎症介导反应的过程是相吻合的。但这些炎症反应在IMEM的不同阶段是否存在差异值得我们探讨，若能找到各期前膜细胞的活动规律，我们就可以开发新药来阻止其病情进展，这样可以弥补手术适应证的局限性及手术本身带来的潜在风险。本研究中全部标本CD34呈阴性表达，而GFAP全部阳性表达，这一发现与Ngan等对IMEM的组织学观察发现是一致的，在其全部切片中均发现胶质细胞，其次是成纤维细胞，其5个细胞类型中并无血管内皮细胞的存在，然而该研究并未对IMEM进行分期研究，故本研究一定程度上与其是互为补充的。
另外，本研究通过弹力纤维染色及Masson染色这2种特殊染色检查，进一步证实IMEM的主要纤维成分为胶原纤维，而非弹力纤维或肌纤维、网状纤维等成分，这与目前的研究发现一致。而纤维形态结构在IMEM各期的表现特征，一定程度上揭示了其发展过程。IMEM在疾病发展过程中其厚度是逐渐增加的，这与其胶原纤维的分泌量增加、内部结构的扩张是直接相关的，而前膜的厚度会影响到视网膜微结构、视力、视物变形度、对比敏感度的变化，这同样与IMEM术后视功能的预测息息相关。若是能结合各期纤维厚度及视网膜结构的改变，以及临床中对患者相应视力、光敏感度变化和术后视功能预后等情况进行分析研究，可能得到更为有意义的发现。
综上所述，IMEM属于细胞分泌的非血管性的纤维增生组织，其主要细胞成分为胶质细胞及成纤维细胞，纤维成分为胶原纤维。IMEM从1期到4期，伴随着OCT显示下的视网膜形态结构的改变，膜组织类型及一般组织病理学结构表现有所不同，细胞密度发生变化，这些变化可能源于胶质细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等活动特性的差异，因细胞量化统计的困难、标本量的限制，以及无法把IMEM组织与内界膜组织单独取材进行病理研究，这些均导致我们不能更全面地认识IMEM，但研究带来困惑的同时也鞭策着我们设计更完美、更科学可行的方案去探究其真正规律，并为以后IMEM新药的开发提供可靠的理论基础。
利益冲突申明
本研究无任何利益冲突作者贡献声明
项振扬：参与选题、设计及资料的分析和解释；撰写论文；修改论文中关键性结果、结论；根据编辑部的修改意见进行核修。金琴辉：参与选题、设计，收集数据及资料的分析，根据编辑部的修改意见进行修改。罗华荣、甘梅富：参与选题、设计，收集数据及资料的分析，修改论文的结果、结论。徐伟铭、张昕、郑玥：参与收集数据及资料的分析，根据编辑部的修改意见进行修改