MMP-14、HSP27、miR-26a与结肠癌临床病理特征的关系*

孔令梅, 石燕燕, 唐莹, 田蕾

1锦州市中心医院消化内科(辽宁锦州 121000)； 2锦州医科大学附属第一医院消化内科(辽宁锦州 121000)

结肠癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤，直肠与乙状结肠交界部位为主要发病位置[1-2]。结肠癌主要发病群体为中老年人群，具有发病率高、治疗难度大、预后差的特点，据世界卫生组织调查数据显示，结肠癌发病率位居所有胃肠组织恶性肿瘤前3位，引起广大专家学者的关注[3-4]。结肠癌患者患病前期无明显临床症状，难以被察觉，因此早期确诊率较低，确诊时病情恶化程度较高，导致预后较差，因此结肠癌早期检查、诊断至关重要[5-6]。许多专家学者致力于结肠癌发病机制的研究，以期通过探寻新的肿瘤标志物，从而对结肠癌诊断及靶向治疗进行研究[7]。本研究检测结肠癌组织中基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14，MMP-14)、热休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)、微小RNA-26a(microrna-26a，miR-26a)表达，从而探究三者表达与结肠癌临床病理特征的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年6月至2021年6月于我院进行手术治疗的结肠癌患者50例，年龄53～66岁，平均(59.5±5.2)岁，其中包括腺癌、黏液细胞癌各25例，肿瘤组织位于左半结肠26例，位于右半结肠24例，病理分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期患者24例，Ⅲ期患者5例，Ⅳ期患者4例；癌组织分化程度：高分化24例，中分化19例，低分化7例。本研究所有患者均知情同意，获我院伦理委员会批准(2020MY04-2)。

纳入标准：均符合结肠癌诊断标准[8]，均为首次确诊，并进行根治手术手术治疗，病历资料齐全。

排除标准：(1)接受过放疗、化疗者；(2)手术禁忌证患者；(3)高血压、心脏病患者；(4)合并其他恶性肿瘤者；(5)血液系统、免疫系统疾病患者；(6)沟通障碍者。

1.2 标本采集 收集结肠癌患者手术切除癌组织、距癌组织5 cm癌旁组织标本，将收集的组织标本切小块(4 mm×4 mm×2 mm)，使用甲醛溶液浸泡、固定，脱水后石蜡包埋，4 μm厚度切片，做免疫组化标记。

1.3 指标检测

1.3.1 免疫组化染色 切片脱蜡、水化处理，置入煮沸的柠檬酸修复液(高压锅)中2 min,降温、自然冷却至常温，PBS液清洗3次后加入POD阻断剂，30 min后再次使用PBS液清洗，添加一抗后过夜保存。取出后将一抗吸除，再次使用PBS液清洗，常温环境下添加二抗并完全覆盖，30 min后再次使用PBS液清洗，DAB染色后显微镜观察，苏木精染核，反蓝、脱水处理后封片。

1.3.2 Western blot法检测MMP-14、HSP27表达 待测标本中加入裂解液，提取总蛋白，定量、煮沸后进行SDS-PAGE凝胶电泳，并转膜、室内封闭，2 h后添加一抗(1∶2 000)过夜孵育，次日使用Western液清洗3次，之后添加二抗(1∶5 000)孵育，1 h后取出并再次使用Western液清洗3次，显色、曝光、成像，检测条带灰度值，检测MMP-14、HSP27相对表达量。

1.3.3 RT-PCR检测miR-26a表达 使用Trizol法提取总RNA，逆转录处理，并进行扩增处理。miR-26a引物序列：上游：5′-UUCAAGUAAUUCAGGAUAGGU-3′，下游：5′-CUAUCCUGAAUUACUUGAAUU-3′。反应条件：预变性处理10 min、变形处理10 s(95℃)，退火25 s(63℃)，延伸10 s(72℃)，进行42个循环，2-ΔΔCt方法计算miR-26a表达量。

2 结果

2.1 结肠癌癌旁组织、癌组织MMP-14、HSP27、miR-26a表达比较 与癌旁组织比较，癌组织MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1和图1、2。

表1 结肠癌癌旁组织、癌组织MMP-14、HSP27、miR-26a表达比较

2.2 结肠癌患者MMP-14、HSP27、miR-26a表达与一般资料关系 不同性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤类型结肠癌患者MMP-14、HSP27、miR-26a表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

注：A:MMP-14; B:HSP27; C:miR-26a

注：A:MMP-14; B:HSP27; C:miR-26a

表2 结肠癌患者MMP-14、HSP27、miR-26a表达与一般资料的关系

2.3 结肠癌患者MMP-14、HSP27、miR-26a表达与病理特征关系 与肿瘤最大径≤3 cm患者相比，肿瘤最大径>3 cm患者MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)；与Ⅰ+Ⅱ期相比，Ⅲ+Ⅳ期患者MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)；与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移患者MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)；与高分化患者相比，中、低分化患者MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低；与中分化患者相比，低分化患者MMP-14、HSP27表达较高，miR-26a表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4 结肠癌组织中MMP-14、HSP27、miR-26a表达相关性 结肠癌组织中MMP-14、HSP27呈正相关(r=0.455，P=0.001)；结肠癌组织中MMP-14、miR-26a呈负相关(r=-0.673，P=0.001)；结肠癌组织中HSP27、miR-26a呈负相关(r=-0.548，P=0.001)。见图3。

3 讨论

近年来随着社会的不断发展，人们生活方式改变，饮食习惯、结构也随之改变，致使我国结肠癌发病率一直居高不下。据相关流行病学调查数据显示，我国新增结肠癌病例数呈逐年递增趋势，且患者预后较差，术后5年生存率较低[9-10]。目前临床医学尚未将结肠癌的发病趋势研究透彻，许多专家学者开始尝试使用基础医学、病理研究等渠道探究结肠癌发病机制，对结肠癌诊断、治疗靶点进行研究[11-12]。

表3 结肠癌患者MMP-14、HSP27、miR-26a表达与病理特征的关系

MMP-14为MMP家族的重要组成成员，具有降解细胞外基质成分、基底膜、细胞因子及激活其他多种MMP的作用[13]。有研究表示，MMP-14能够激活MMP-2、MMP-13等因子，从而促进肿瘤组织浸润性生长、转移的作用[14]。还有研究表示，MMP-14能够促进VEGF等因子表达，具有促进肿瘤组织新生血管形成的作用，从而在肿瘤组织不断生长过程中发挥重要作用[15]。大量实验研究结果显示，MMP-14在胃癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤中表达出现明显异常，与恶性肿瘤患者临床特征具有一定相关性，参与恶性肿瘤的发生、发展，但是关于MMP-14在结肠癌组织中表达意义的研究还相对较少[16-17]。本研究结果显示，结肠癌组织中MMP-14表达相对较高，说明MMP-14在结肠癌中呈现异常高表达，为进一步探究MMP-14表达变化是否与结肠癌患者病理特征具有相关性，本研究对不同病理特征结肠癌患者MMP-14表达进行对比，结果显示，肿瘤较大、Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化结肠癌组织中MMP-14表达相对较高，说明MMP-14的异常表达与结肠癌患者临床病理特征密切相关，因此本研究推测MMP-14表达变化参与结肠癌的发生演进，可能成为结肠癌诊断、治疗的重要靶点。

图3 结肠癌组织中MMP-14、HSP27、miR-26a表达的相关性

Hsp家族在机体病理、生理变化过程中具有重要作用，参与大多数恶性肿瘤的发生、发展。有研究表示，HSP27为Hsp家族的重要成员，在细胞增殖、周期分布等生物学行为中发挥重要作用[18]。还有研究表示，HSP27在肝癌、卵巢癌等恶性肿瘤中表达出现明显异常，在恶性肿瘤发生演进过程中发挥重要作用[19-20]。本研究结果显示，结肠癌组织中HSP27表达较高，并且肿瘤较大、Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化结肠癌组织中HSP27表达较高，说明HSP27在结肠癌组织中呈现异常高表达，并且其表达变化与患者临床病理特征具有密切联系，参与结肠癌的发生演进，将来有机会作为结肠癌诊断、治疗、疗效评价的靶点。

微小RNA(miRNA)具有抑癌、促癌等特性，在细胞增殖、凋亡、周期分布等生物学行为中至关重要。miR-26a为miRNA家族的重要组成成员，有研究显示，miR-26a在胃癌、肺癌等恶性肿瘤中呈现异常表达[21-22]，但是关于miR-26a表达变化与结肠癌发生演进关系的研究还相对较少。本研究显示，miR-26a在结肠癌组织中呈异常低表达，并且肿瘤较大、Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化结肠癌组织中miR-26a表达相对较低，说明miR-26a表达与结肠癌病理特征具有一定相关性，参与结肠癌的发展。

本研究还发现，结肠癌组织中MMP-14、HSP27呈正相关；MMP-14、miR-26a呈负相关；HSP27、miR-26a呈负相关。由此本研究推测，MMP-14、HSP27、miR-26a三者的表达变化是结肠癌早期检查、诊断重要指标，且三者可能共同参与结肠癌的发生发展、演进。

综上所述，MMP-14、HSP27、miR-26a在结肠癌组织中呈现异常表达，三者表达变化与结肠癌组织大小、病理分期、淋巴结转移、组织分化等临床病理特征密切相关，并且三者在结肠癌组织中的表达之间具有相关性，在结肠癌发生演进过程中共同发挥重要作用。本研究也有不足之处，选取病例数较少，且并未对MMP-14、HSP27、miR-26a表达变化与结肠癌患者预后相关性进行研究，下一步研究需增加样本量，探究三者表达变化与结肠癌患者预后相关性。

利益相关声明：本文无任何利益冲突。

作者贡献说明：孔令梅：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写，论文修改；田蕾：提出研究思路，分析试验数据，论文审核；唐莹：资料搜集整理；石燕燕：进行统计学分析。