血清netrin-4、Vitronectin与急性缺血性脑卒中患者神经功能、颈动脉内膜厚度的关系

阳优 曹敏慧 何清 曾荣

急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke，AIS）是一种由脑血管堵塞或狭窄引起脑供血不足而导致的脑组织坏死性疾病［1］。既往相关统计发现，我国脑卒中每年新发病例约250 万，严重威胁人们的身体健康与生命安全［2］。有学者认为，早期识别疾病及其严重程度并给予干预对控制AIS 患者致残致死率至关重要［3］。神经导向因子4（netrin-4）是神经导向因子Netrins 家族在脊椎动物中的新成员，在多种组织器官中发挥促血管新生等功能［4］。既往有研究显示，netrin-4 与肿瘤侵蚀、转移密切相关［5］。玻连蛋白（Vitronectin）是一种分泌性糖蛋白，在细胞生长、分化、增殖、迁移以及黏附中发挥重要的作用［6］。既往有研究发现，Vitronectin 在小鼠小脑细胞前体分化中具有重要作用［7］。本研究拟分析血清netrin-4、Vitronectin 与AIS 患者神经功能、颈动脉内膜厚度的关系，以期为AIS 的防治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年5月至2020年5月郴州市第一人民医院收治的116 例AIS 患者作为研究组，其中男性68 例，女性48 例；年龄平均（60.36±8.44）岁。纳入标准：①所有AIS 患者均符合《急性缺血性卒中血管内治疗中国指南2018》中AIS 诊断标准［8］，并经过颅脑CT 或核磁共振证实；②获得患者及家属的知情同意；③神志清楚，均能配合完成本研究中的各项检查与观察。排除标准：①严重心、肝、肾等脏器疾病者；②伴有自身免疫性疾病、血液性疾病、感染性疾病及恶性肿瘤疾病者；③存在除急性缺血性脑卒中外其他脑部疾病或血管疾病者；④既往有脑部外伤以及近期进行脑部外科手术者；⑤长期使用糖皮质激素治疗者；⑥精神病史或伴有语言、认知功能障碍者；⑦临床资料不全或无法完全配合研究者。同时选择同期来我院进行体检的60 例健康人作为对照组，男性40 例，女性20 例；年龄平均（59.96±8.25）岁。本研究已获医院医学伦理委员会审核与批准。

1.2 方法

①收集本研究对象基线资料与生化指标：包括年龄、性别、吸烟史、高血压史、糖尿病史、体重指数、入院距发病时间基线资料以及生化指标血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycerides，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）。

②血清netrin-4、Vitronectin 检测方法：抽取本研究纳入对象入院次日清晨空腹外周静脉血5 mL，加入含抗凝剂的硅化试管中，并在室温下以3 000 r/min 离心10 min（离心半径12 cm），分离血浆后存放至-80℃冰箱内备用，并在规定时间内采用酶联免疫双抗体夹心法测定血清netrin-4 和Vitronectin 水平。所有试剂盒由美国CLOUD-CLONE 公司生产，具体步骤应严格按照试剂盒说明书进行。③神经功能评分与分组：入院后采用美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS）［9］评分评估患者神经功能缺损程度，并根据评分结果分为轻度组（NIHSS 评分＜5 分）、中度组（5 分≦NIHSS 评分≦20 分）、重度组（NIHSS 评分＞20 分）。④颈动脉内膜厚度测量与分组：入院后患者使用飞利浦公司产的IE33 彩色多普勒超声诊断仪进行颈动脉超声检查，首选由经过培训的同一名超声科医师在检测时嘱患者平卧位，暴露颈部皮肤，随后采用频率为7～12 MHz的探头从颈动脉锁骨上部开始，沿颈总动脉探查直至颈动脉分叉处，并测量分叉处前1 cm 处内膜内层至中膜外层的厚度，即颈动脉内膜中层厚度（IMT），最后取左右两侧颈总动脉测量的平均值。随后根据测量结果将IMT＜1.0 mm 及IMT≥1.0 mm 分为无颈动脉斑块组和颈动脉斑块组。

1.3 统计学分析

运用SPSS 23.0 软件进行统计处理，计量资料以（±s）表示，采用两独立样本t检验或单因素方差分析比较；计数资料使用n（%）描述，采用χ2检验比较；采用Pearson 相关分析探讨血清netrin-4、Vitronectin与AIS 患者神经功能、颈动脉内膜厚度的关系；采用多因素logistic 回归分析探讨影响AIS 患者神经功能的相关因素，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料及血清netrin-4、Vitronectin 比较

两组年龄、性别、吸烟史、高血压史、糖尿病史、体重指数、入院距发病时间比较无统计学意义（P＞0.05）。研究组血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、Vitronectin 水平均明显高于对照组，血清netrin-4 低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两基线资料及血清netrin-4、Vitronectin 比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of baseline data and serum netrin-4 and vitronectin between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 两基线资料及血清netrin-4、Vitronectin 比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of baseline data and serum netrin-4 and vitronectin between 2 groups［n（%），（±s）］

指标性别（男/女）年龄（岁）吸烟史高血压史糖尿病史体重指数（kg/m2）入院距发病时间（h/IQR）TG（mmol/L）TC（mmol/L）LDL-C（mmol/L）HDL-C（mmol/L）netrin-4（ng/mL）Vitronectin（μg/mL）研究组（n=116）68/48 60.36±8.44 30（25.86）80（68.97）70（60.34）24.10±2.20 26.20±5.62 5.02±0.36 1.83±0.21 2.89±0.18 1.12±0.09 45.18±6.65 84.60±12.36对照组（n=60）40/20 59.96±8.25 18（30.00）35（58.33）30（50.00）24.33±2.65 χ2/t 值1.080 0.300 0.341 1.974 1.725 0.612 P 值0.299 0.764 0.559 0.160 0.189 0.541 4.23±0.22 1.36±0.14 2.14±0.13 0.68±0.02 108.62±22.25 33.21±6.62 15.550 15.523 28.627 37.347 29.734 31.149＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.2 不同NIHSS 分组AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin 水平比较

不同组血清Vitronectin 水平比较：重度组＞中度组＞轻度组，差异有统计学意义（P＜0.05）；血清netrin-4 水平比较：重度组＜中度组＜轻度组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同NIHSS 分组AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin水平比较（±s）Table 2 Comparison of serum netrin-4 and vitronectin levels in AIS patients in different NIHSS groups（±s）

表2 不同NIHSS 分组AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin水平比较（±s）Table 2 Comparison of serum netrin-4 and vitronectin levels in AIS patients in different NIHSS groups（±s）

注：与轻度组比较，aP＜0.05；与中度组比较，bP＜0.05。

组别重度组中度组轻度组F 值P 值n 33 39 44 netrin-4（ng/mL）22.25±5.10ab 40.62±6.75a 66.40±8.96 57.750＜0.05 Vitronectin（μg/mL）106.62±13.25ab 84.25±12.10a 68.36±7.63 68.791＜0.05

2.3 不同颈动脉IMT 的AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin 水平比较

颈动脉斑块组患者血清Vitronectin 水平明显高于无颈动脉斑块组，差异有统计学意义（P＜0.05），血清netrin-4 水平低于无颈动脉斑块组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同颈动脉IMT 的AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin 水平比较（±s）Table 3 Comparison of serum netrin-4 and vitronectin levels in AIS patients with different carotid IMT（±s）

表3 不同颈动脉IMT 的AIS 患者血清netrin-4、Vitronectin 水平比较（±s）Table 3 Comparison of serum netrin-4 and vitronectin levels in AIS patients with different carotid IMT（±s）

组别颈动脉斑块组无颈动脉斑块组t 值P 值n 55 61 netrin-4（ng/mL）30.87±4.36 58.07±7.41 20.729＜0.05 Vitronectin（μg/mL）96.03±12.41 74.29±8.26 16.463＜0.05

2.4 血清netrin-4、Vitronectin 与AIS 患者神经功能、颈动脉内膜厚度的关系

经Pearson 相关性分析显示，血清netrin-4 水平与NIHSS 评分、颈动脉IMT 值均呈负相关（r=-0.365、-0.410，P＜0.001），血清Vitronectin 水平与NIHSS 评分、颈动脉IMT 值均呈正相关（r=0.485、0.445，P＜0.001）。

2.5 影响AIS 患者神经功能的多因素logistic 回归分析

本研究将AIS 患者神经功能缺损程度作为因变量（轻、中=0、重=1），以血清netrin-4、Vitronectin及年龄、吸烟史等基线资料相关指标为自变量，经多因素logistic 回归分析结果显示，血清netrin-4、Vitronectin 均为AIS 患者神经功能缺损程度的独立影响因素（P＜0.05）。见表4。

表4 影响AIS 患者神经功能的多因素logistic 回归分析Table 4 Multivariate logistic regression analysis of neurological function in patients with AIS

3 讨论

AIS 是目前临床常见的脑血管疾病，该疾病发病机制较为复杂，可能与脑血管内皮细胞的损伤或者粥样硬化性斑块的形成有关，而NIHSS 评分、颈动脉IMT 是判断AIS 脑功能及脑动脉动脉粥样硬化早期病变的指标［10］。虽然目前临床通过疾病临床表现以及影像学检查能够诊断AIS 病情严重程度以及临床结局，但动态评估价值不高且价格昂贵，无法广泛应用［11］。

Vitronectin 是一种存在于血浆、细胞外基质和血小板颗粒中的糖蛋白，主要参与凝血、细胞黏附、补体介导的细胞溶解与细胞外基质的蛋白水解过程［12］。既往有研究显示，血浆中玻连蛋白水平升高与主动脉疾病程度相关［13］。本次研究结果说明血清Vitronectin 参与AIS 病情进展，血清Vitronectin 水平能够反映AIS 疾病严重程度。本研究相关性分析显示，血清Vitronectin 水平与NIHSS 评分、颈动脉IMT 值均呈正相关，进一步提示血清Vitronectin 与AIS 病情密切相关，且血清Vitronectin 水平越高，AIS 脑功能损伤程度以及脑血管病变程度越严重。本研究进一步经多因素logistic 回归分析显示，血清Vitronectin 是AIS 患者神经功能缺损程度的独立影响因素，由此证实血清Vitronectin 水平变化能够作为评估AIS 神经功能缺损程度有效指标，能够为临床干预提供依据。Vitronectin 目前在血液循环中具有调节血栓形成与纤维蛋白溶解等多种作用，且能够参与AS 斑块细胞的合成，主要通过内皮损伤激活的血小板释放至血浆中［14］。因此当AIS 疾病进展过程中动脉壁形态以及压力的变化导致斑块破裂、斑块内出血，激活血小板时，可释放Vitronectin，进而导致血清Vitronectin 升高。

本研究结果显示，研究组血清netrin-4 低于对照组，说明血清netrin-4 与AIS 病情发生有关。本次研究结果提示血清netrin-4 水平反映AIS 病情程度。本研究进一步分析显示，血清netrin-4 水平与NIHSS 评分、颈动脉IMT 值均呈负相关，且血清netrin-4 作为AIS 神经功能缺损程度的独立影响因素，证实血清Vitronectin 与AIS 病情密切相关，且可作为评估AIS 神经功能缺损程度有效指标。

综上所述，AIS 患者血清中netrin-4 水平降低，Vitronectin 水平升高，且血清netrin-4、Vitronectin水平变化与神经功能缺损程度、颈动脉内膜厚度密切相关，同时能够作为评估AIS 患者神经功能缺损程度的有效指标。