孟鲁司特和布地奈德雾化吸入治疗对哮喘患儿血清miR-155、炎症因子和气道功能的影响

陈智，魏静丽，田芸（广东省深圳市前海蛇口自贸区医院，广东 深圳 518067）

支气管哮喘（以下简称“哮喘”）是呼吸系统十分常见的一类疾病[1-2]。其病理变化表现为支气管平滑肌出现明显的痉挛，产生大量的支气管黏液，和出现过度肿胀的支气管黏膜[3-4]。目前的治疗策略集中在抗炎、解痉和抗过敏[5]。急性哮喘发作会诱发患儿血流动力学紊乱，继而导致呼吸衰竭[6]。微小RNA（microRNA，miRNA）能通过调控靶基因而参与机体的病理、生理过程。近年来，多种miRNA如miR-155等异常表达被证实与哮喘发生、发展密切相关[7]。糖皮质激素是当前治疗哮喘患儿的重要药剂。然而，糖皮质激素虽能够在一定程度上抑制体内炎性因子的分泌，缓解临床症状，但仍无法控制白三烯的释放。因此，在临床治疗哮喘患者时，要科学、合理地选用药物。孟鲁司特是一种可以产生抗炎作用的白三烯受体阻滞剂。本研究采用孟鲁司特和布地奈德雾化吸入来治疗支气管哮喘患儿，监测治疗前后患儿的疗效、气道功能、miR-155和炎症因子含量。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2017年1月-2021年12月期间在深圳市前海蛇口自贸区医院儿科诊断为哮喘的80例患儿为研究对象。通过随机数字表法把入组患儿分成两组，每组各40例。给予孟鲁司特结合布地奈德雾化吸入治疗的患儿列为观察组，其中男18例、女22例，年龄6-12岁。给予布地奈德雾化吸入治疗的患儿列为对照组，其中男21例、女19例，年龄6-11岁。两组的临床资料比较，无明显差异（P＞0.05），未发现统计学意义，具有可比性。

纳入标准：①支气管哮喘患儿均符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南（2016年版）》中相关诊断标准。②年龄在6-12岁之间。③经医院伦理委员会批准，患儿家属同意参与本次研究，并签署知情同意书。

排除标准：①合并其他危重疾病需紧急抢救者。②合并存在其他先天性疾病者。③合并存在其他传染性疾病者。④药物过敏者。

1.2 医治方法 对照组采用布地奈德治疗，剂量用法：将1mg布地奈德溶解至2mL、0.9%的NaCl注射液，形成射流雾化剂，患儿通过仪器雾化吸入，每次10min，每天2次。观察组在对照组的基础上，加用孟鲁司特咀嚼片治疗，剂量用法：每晚1次口服，4-5mg/次。医治一周后评估两组患儿临床症状的缓解程度。

1.3 疗效标准 显效：患儿哮鸣体征消失，及患儿喘息等症状消失；有效：患儿哮鸣体征改善，及患儿喘息等症状改善；无效：患儿哮鸣音体征无改善，及患儿喘息等症状无改善[8]。

1.4 气道功能评价方法 用肺功能测定仪（PowerCube-ST，重庆柯洛德科贸）测定两组患儿治疗前、治疗3个月后的肺功能参数：第1s用力呼气容积（FEV1）和用力肺活量（FVC），并计算FEV1/FVC；潮气量25%、50%、75%时的呼气流速（TEF25%、TEF50%、TEF75%）。

1.5 血清miR-155含量检测方法 两组研究对象治疗前及治疗3个月后均采集外周血样本5mL，选用miR-X试剂盒（638314，Clontech）检测样本。最后在荧光定量PCR仪上分别对miR-155和U6进行扩增，采用2-△△Ct计算miR-155的相对表达量。miR-155上游序列：5’-GCG CGT TAA TGC TAA TTG TGA T-3’；miR-155下游序列：5’-GTG CAG GGT CCG AGG T-3’；U6上游序列：5’-CGG GTT TGT TTT GCA TTT GT-3’；U6下游序列：5’-AGT CCC AGC ATG AAC AGC TT-3’。引物序列交由上海生工合成。

1.6 血清炎症因子含量测定 两组研究对象治疗前及治疗3个月后均采集外周血样本5mL，离心得到血清后，用酶联免疫吸附试剂盒（均购自北京市索莱宝科技有限公司）测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）含量。

1.7 统计学方法 研究数据采用SPSS23.0软件系统完成分析。计数资料采用“%”表示，组间比较采用χ2检验。计量资料均符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组哮喘患儿的治疗效果比较 治疗后，观察组患儿的治疗总有效率为90.0%，明显高于对照组的75.0%，差异有统计学意义（χ2=6.723，P=0.033）。见表1。

表1 两组哮喘患儿的治疗效果比较[n(%)]

2.2 两组哮喘患儿气道功能各项相关指标比较 治疗后，两组气道功能各项相关指标（包括：FEV1/FVC、25%TEF、50%TEF和75%TEF）与治疗前相比均有所改善；观察组的气道功能各项相关指标改善情况均显著优于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患儿治疗前后气道功能参数比较(±s)

表2 两组患儿治疗前后气道功能参数比较(±s)

组别（n=40） 时间 FEV1/FVC 25%TEF（mL/s） 50%TEF（mL/s） 75%TEF（mL/s）观察组 治疗前 75.33±6.76 76.93±3.32 102.98±8.89 113.79±7.97治疗后 86.09±5.73 86.56±7.88 118.68±9.01 120.04±6.67对照组 治疗前 75.69±7.56 77.02±3.52 105.69±8.52 112.23±6.66治疗后 79.09±6.67 80.26±4.45 109.03±8.89 112.41±9.53 t/P观察组（治疗前后） -10.060/＜0.001 -6.857/0.002 -4.638/0.010 -2.912/0.044 t/P对照组（治疗前后） -3.477/0.025 -5.860/0.004 -8.499/0.061 -3.818/0.059 t/P组间值（治疗后） 3.005/0.040 5.344/0.006 3.290/0.030 4.382/0.012

2.3 两组哮喘患儿血清miR-155、炎症因子含量比较 治疗后，两组血清miR-155、IL-4含量与治疗前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量与治疗前相比均有所升高。观察组的血清miR-155含量降低幅度显著优于对照组；TNF-α和IFN-γ含量升高幅度显著优于对照组（P＜0.05）。见表3。

表3 两组患儿治疗前后血清miR-155、炎症因子含量比较(±s)

表3 两组患儿治疗前后血清miR-155、炎症因子含量比较(±s)

组别（n=40） 时间 miR-155 TNF-α（pg/mL） lFN-γ（μg/mL） lL-4（ng/mL）观察组 治疗前 16.19±0.59 13.21±1.09 5.32±0.61 1.98±1.38治疗后 9.74±1.36 23.77±2.19 8.97±1.53 1.12±1.86对照组 治疗前 16.44±0.80 13.71±1.50 5.33±0.62 1.96±1.32治疗后 12.03±1.59 18.32±0.88 6.37±0.77 1.12±0.96 t/P观察组（治疗前后） 9.766/＜0.001 -9.635/＜0.001 -4.966/0.001 6.626/＜0.001 t/P对照组（治疗前后） 5.552/＜0.001 -5.927/＜0.001 -2.342/0.047 5.272/＜0.001 t/P组间值（治疗后） 2.452/0.040 5.518/＜0.001 3.394/0.009 3.206/0.063

3 讨论

哮喘是一类免疫功能失调的慢性炎症性疾病。该病发生时主要富集气道黏膜下层CD4+T 淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞等，其炎症反应进展与气道重塑、大量黏液的产生和气道的高变异性呈正相关[9]。研究报告显示，我国20岁以上国民哮喘发病率为4.2%，患者数量能达到4570万例[10]。而近期我国学者Meta分析结果显示，我国0-14岁儿童哮喘患病率为2.6%，患病率总体呈上升趋势[11]。哮喘患儿的主要临床特征有咳嗽、气促和喘息等。因此，哮喘治疗策略上应以及时高效地抗炎、止咳、平喘为主。

布地奈德是一类常见哮喘治疗药物，功效是能显著抑制炎症反应，及降低相关炎症因子的分泌，从而有效地控制哮喘，是临床常用的治疗哮喘药物[12]。孟鲁司特是一类特异性白三烯受体抑制剂，能抑制白三烯受体的生物学功能，从而高效地降低白三烯所诱发的气道炎症反应和降低炎症因子的分泌。为了明确孟鲁司特和布地奈德雾化吸入对哮喘患儿的疗效，本研究首先评估了两组患儿的临床疗效，研究发现，治疗后，观察组患儿的治疗总有效率为90.0%，明显高于对照组的75.0%，P＜0.05。哮喘患儿最显著的临床症状是气流受限和气道痉挛，其中气流受限程度常用FEV1/FVC指标显示，小气道痉挛程度常用25%TEF、50%TEF和75%TEF指标显示。本研究经分析上述气道功能参数后发现：治疗后，两组气道功能各项相关指标（包括：FEV1/FVC、25% TEF、50%TEF和75% TEF）与治疗前相比均有所改善；观察组的气道功能各项相关指标改善情况均显著优于对照组（P＜0.05），提示孟鲁司特和布地奈德雾化吸入联合治疗哮喘患儿在改善气道痉挛和气流受限上显著优于单独使用布地奈德雾化等吸入治疗，这可能与孟鲁司特能抑制白三烯受体，继而抑制炎症反应有关。临床研究显示，孟鲁司特可直接抑制半胱氨酸白烯和白三烯受体，从而阻断生物活性物质（超敏C反应蛋白、免疫球蛋白E）的释放，进而减轻患儿的气道高反应性，发挥强效抗炎作用，从而改善哮喘患儿气道痉挛，缓解临床症状[13]；另有研究者发现孟鲁司特能高效减轻由血清炎症因子分泌异常所诱发的免疫病理损伤，下调气道高反应性，降低了炎症细胞堆聚于气管，进而抑制了炎症反应的发生，从而有效缓解哮喘症状[14]，以上研究结论与本研究基本一致。

miRNA是一种小非编码单链RNAs，作为DNA表达的转录后调控分子，已被证实和过敏性哮喘有关[15]。众多研究表明，哮喘患者均存在miRNA表达失调情况，这些miRNA与哮喘的发生过程密切相关[16]。miR-155是其中研究者关注的非编码RNA之一，其位于人类第21号染色体上，高表达于人类脾脏、胸腺、肝脏、肺脏以及肾脏中[17]，其功能与免疫细胞的发育、分化、活化、增殖及免疫应答等生物学过程有关。miR-155在多类激活的免疫细胞中高表达，能通过多条信号通路调控哮喘的进展[18]。研究表明，在过敏性鼻炎患者中，miR-155上调能提升ILC2表达，继而提高IL-4表达，从而诱发Th2的炎症反应[19]。转录因子T-bet是一类具有高度选择性加快Th1细胞分化功能的分子，在Th1细胞的分化中发挥不可或缺的作用。T-bet可促使IFN-γ等Th1型细胞因子的分泌，并促使Th2细胞向Th1方向分化。而转录因子GATA-3则是一类具有高度选择性促进Th2细胞分化功能的因子。GATA-3可高度选择性地促进Th2细胞发育、诱导产生Th2细胞分子和阻遏Th1细胞特异分子。Th1/Th2的免疫平衡对维持气道正常生理功能具有重要意义。Th1细胞分泌的特异性细胞因子有IL-2、IFN-γ和TNF-α等，可调控局部组织中的细胞免疫应答。Th2细胞分泌的特异性细胞因子有IL-4、IL-6等，能抑制Th1细胞的分化，同时能提升体液免疫应答和IgE的合成，从而让气道呈现致敏及高反应性状态[20]。在哮喘发病过程中，Th1/Th2平衡开始向Th2漂移，增强Th2细胞功能会提高气道炎症反应和气道敏感性，从而加重哮喘症状。目前，孟鲁司特治疗支气管哮喘的效果得到了越来越多的肯定。然而，该药对哮喘患儿miR-155及炎症反应的影响尚未见相关报道。因此，本研究进一步测定了哮喘患儿治疗前后血清中miR-155和Th1、Th2细胞特异性释放的细胞因子发现：治疗后，两组血清miR-155、IL-4含量与治疗前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量与治疗前相比均有所升高。观察组的血清miR-155含量降低，显著优于对照组；TNF-α和IFN-γ含量升高，显著优于对照组（P＜0.05），提示miR-155高表达时，Th1细胞比例降低，Th2细胞比例升高，布地奈德雾化吸入和孟鲁司特可能通过抑制miR-155高表达，进而调控Th1/Th2平衡，从而改善患儿哮喘。笔者推测miR-155高表达能直接或间接促进GATA-3表达，从而造成哮喘患儿Th1/Th2细胞失衡的新机制，该具体机制需进一步通过体内外实验阐明。

综上所述，用布地奈德雾化吸入联合孟鲁司特口服治疗哮喘患儿疗效满意，能有效地下调血清中miR-155表达、抑制Th1/Th2失衡介导的炎症反应和改善气道功能，有助于患者的康复，值得临床应用推广。本研究还存在一些不足之处，如选入样本量总体偏少，指标观察时间较短，仍需在后续工作中作多中心、多样本深入研究，以提供更可靠的研究数据。