佛山地区脑梗死患者阿司匹林药效相关基因GP1BA多态性分析

杨康，欧阳佩雯，吴芸华（广东省佛山复星禅诚医院，广东 佛山 528000）

脑梗死又称缺血性脑卒中，约占脑卒中的70%，是由于各类原因导致脑组织血液供应障碍，致使缺氧缺血性坏死，进而出现神经功能问题的临床综合征，是当今社会中导致残疾和死亡较严重的神经系统血管性事件[1-2]。阿司匹林作为一线的抗血小板药物被临床普遍地应用于脑梗死患者的治疗和预防。部分患者使用阿司匹林后呈现阿司匹林抵抗（AR）现象，发生率为5%-50%[3]。AR受临床、遗传和环境等多种因素影响。当前AR被报道与多种单核苷酸多态性（SNP）存在相关性[4]，包括编码血小板糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa的GP1BA（5792C＞T）基因多态性。由于基因多态性在不同人群间存在一定的差异[5-6]，目前该基因位点多态性在本国人群中的研究较少。本研究中通过计算GP1BA（5792C＞T）基因位点在佛山地区脑梗死人群中的突变情况，分析阿司匹林药效相关基因GP1BA（5792C＞T）基因型及等位基因频率在不同性别和不同地区人群间的差异，为我国临床进行个性化的阿司匹林用药方案提供遗传信息依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 回顾性随机收集2019年4月-2021年4月至我院神经内科行GP1BA基因多态性检测的脑梗死患者193例病例资料，所有患者均详细记录相关临床基线资料，包括年龄、性别、体重指数（body mass index，BMI）、吸烟史以及合并症（高血糖、高脂血症、高血压）。脑梗死依据中华医学会神经病学分会脑血管病学组制定的相关纳入及排除标准[1]，所有患者之间无血缘关系，籍贯为广东佛山，且久居佛山地区。所纳入患者均签订知情同意书，符合医学伦理程序。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器 TL988型荧光定量PCR仪（西安天隆科技有限公司），5424R型高速离心机（德国Eppendorf公司），XO-01漩涡振荡器（北京泰普联合科技开发有限公司）。

1.2.2 试剂 地高辛染色液、样本萃取液、细胞保存液（济南广音医疗科技有限公司）。

1.2.3 GP1BA（5792C＞T）基因多态性检测 采集患者外周血2ml于EDTA·K2抗凝剂保存，提取白细胞。应用荧光染色原位杂交技术测定白细胞中GP1BA（5792C＞T）基因位点。经过95℃变性解链10min，60℃恒温特异性杂交并实现非酶级联荧光信号放大90min。采用双通道荧光定量PCR仪测定结果。

1.3 观察指标 通过检测患者的GP1BA（5792C＞T）基因位点，分析GP1BA（5792C＞T）基因多态性的分布情况、基线资料方面的差异以及与其他地区人群的差异并作统计分析。

1.4 计算方法

1.4.1 基因型频率的计算 收集的GP1BA（5792C＞T）基因位点存在3种可能的基因型：野生型（CC）、杂合突变型（CT）以及纯合突变型（TT）。CC型频率=CC型标本数量/标本总数×100%；CT型频率=CT标本数量/标本总数×100%；TT型频率=TT标本数量/标本总数×100%。

1.4.2 等位基因频率的计算 依据HWE定律[2]，当标本中某个基因位点只存在C和T两个等位基因时，等位基因C的频率P(C)=（CC型标本数量×2+CT型标本数量×1）/（标本总数×2）×100%；等位基因T的频率P(T)=（TT型标本数量×2+CT型标本数量×1）/（标本总数×2）×100%或者P（T）=1-P（C）。

1.5 统计学处理 研究数据采用SPSS26.0统计学软件分析。使用χ2检验分析基因型频率是否符合Hardy-Weinberg（HWE）遗传平衡定律，当P＞0.05时为符合。采用频数（百分比）表示计数数据，两组间数据统计学差异比较采用χ2检验，以P＜0.05（双侧）表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HWE遗传平衡定律检验 使用χ2检验对入组人群的基因型频率进行HWE平衡检验，基因型分布符合HWE检验平衡（χ2=4.98，P＞0.05），说明入组的人群具有群体代表性。

2.2 GP1BA（5792C＞T）位点基因型、等位基因频率及在不同性别中的分布 本研究共检测193例佛山地区脑梗死患者的GP1BA（5792C＞T）基因位点。其中CC型为175例（90.67%）、CT型为16例（8.29%）、TT型为2例（1.04%）。在GP1BA（5792C＞T）基因位点中等位基因C出现的频率较高为366（94.82%），而等位基因T出现的频率较低为20（5.18%），尽管该等位基因突变频率较低，一旦出现，便对阿司匹林的用药剂量具有重要的指导意义。研究人群中男性118例，女性75例，通过比较不同性别间GP1BA（5792C＞T）位点基因型及等位基因频率，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 GP1BA（5792C＞T）位点基因型、等位基因频率及在不同性别中的分布[n(%)]

2.3 不同区域人群GP1BA（5792C＞T）位点等位基因频率分布比较 将本研究人群的等位基因频率结果与千人基因组计划数据库中GP1BA（5792C＞T）等位基因频率在其他地区人群中分布[7]进行比较，佛山地区人群T等位基因突变频率显著低于非洲人、欧洲人、美国人（P＜0.05），与南亚人、东亚人比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 GP1BA（5792C＞T）等位基因频率在不同地区人群间的分布[n(%)]

3 讨论

阿司匹林作为治疗和预防脑梗死患者的主要药物，但部分患者即使规律使用阿司匹林仍会出现AR。当前，AR的机制尚不明确，抗血小板药物作用与代谢过程中涉及的相关基因，其多态性可能是重要原因[8-9]。以往研究[4]提示，GP1BA（5792C＞T）基因多态性是阿司匹林抗血小板药效相因素，Matsubara Y[10]等研究表明GP1BA（5792C＞T）基因多态性与患者对阿司匹林药效有关，患者携带C等位基因，其阿司匹林抵抗风险较高。因此，研究GP1BA（5792C＞T）基因多态性有助于临床实施个体化使用阿司匹林，提高药物疗效。

伴随分子生物学研究的逐步深入，大量学者开始研究遗传因素在阿司匹林抵抗中的作用[11-13]。广东省药学会在抗血小板药物个体化药学服务指引中表明，在使用阿司匹林抗血小板治疗时，应行GP1BA（5792C＞T）基因多态性检测[14]。本研究结果显示193例佛山地区脑梗死患者GP1BA（5792C＞T）基因多态性中，CC型为175例（90.67%）、CT型为16例（8.29%）、TT型为2例（1.04%），等位基因C突变为T的频率为5.18%，表明该基因位点在佛山地区脑梗死患者存在不同基因型。通过比较不同性别间GP1BA（5792C＞T）位点基因型及等位基因频率，发现差异无统计学意义（P＞0.05），这可能与本研究纳入的样本量较少有关。同时笔者将佛山地区人群T等位基因频率同千人基因组计划研究的人群进行比较，结果显示佛山地区人群与东亚地区人群、南亚地区人群等位基因频率无显著性差异（P＞0.05），与欧洲人、美国人、非洲人存在着显著性差异。GP1BA（5792C＞T）基因多态性在国内外研究报道较少，其中刘磊磊[15]等人报道显示江苏南京地区汉族脑梗死人群的GP1BA（5792C＞T）T等位基因频率（7.2%），等位基因突变频率与本研究突变频率（5.18%）较为一致。楚明明[16]等人报道显示西南地区358例动脉粥样硬化性心血管疾病患者GP1BA（5792C＞T）基因CC型307例（85.75%），CT型48例（13.41%），TT型3例（0.84%），突变率14.25%，与本研究基因型及等位基因频率存在一定差异，可能由于地区种族人群原因导致。杨秀峰[17]等人研究显示缺血性脑卒中患者GP1BA（5792C＞T）基因型检测结果野生型（CC）78例（61.9%），与本研究结果中野生型175例（90.67%）、突变型（CT+TT）18例（9.33%），存在差异，可能是由于黑龙江大庆地区人群与本地区人群存在差异。相关报道[7]显示亚洲人T等位基因突变频率（7.61%）、东亚人T等位基因突变频率（7.04%）、南亚人T等位基因突变频率（5.58%）与本研究结果相近，非洲人T等位基因突变频率（20.12%）、美国人T等位基因突变频率（20.08%）、欧洲人T等位基因突变频率（8.75%）与本研究结果存在较大差异。

综上所述，GP1BA（5792C＞T）基因存在多态性，不同性别间比较，无统计学差异，但不同地区人群中存在统计学差异。研究结果提示针对其他人群在基于GP1BA基因进行诊断治疗时，其诊断治疗方案有可能不适用于我国人群。临床医生使用阿司匹林治疗前应考虑GP1BA（5792C＞T）基因多态性问题，根据不同患者的基因型，给予不同治疗方案，以期患者能获得更好的疗效。本研究存在的局限有：①纳入的样本量较少；②未对不同基因型患者进行不同用药剂量设计及药物治疗效果的监测。未来可通过扩大样本量、多中心，进行长期随访评价不同基因型对疗效的影响。