人巨细胞病毒感染对新生儿免疫功能与肝功能的影响

杨丽娟 ，王 斌，钱东萌，李建美

（1.青岛大学基础医学院，山东 青岛 266071；2.淄博市妇幼保健院检验科，山东 淄博 255029）

人巨细胞病毒（HCMV）又被称为人类疱疹病毒5型，当人体机能处于健康状态下，感染HCMV后，潜伏在细胞内的病毒可处于静息状态，不引起人体细胞病变反应；相反，对于免疫力低下的人群（如新生儿），可出现相应的临床反应，其中肝脏是其主要损伤的靶器官，其次是呼吸、神经、血液系统，严重时可危及患儿的生命[1]。有学者指出，HCMV感染在健康人群中多表现为亚临床隐性感染与潜伏感染，而孕妇和儿童感染HCMV较为严重，且其可通过母婴垂直传播造成新生儿的先天性感染，也是引起出生缺陷和各种不可逆损伤的重要因素[2-3]。HCMV肝炎作为常见的HCMV感染疾病，可表现为黄疸、肝肿大及肝功能异常，大部分患儿早期治疗后预后良好，但仍有部分重症患儿可发展为肝硬化、腹水等，预后较差[4]。因此，HCMV感染早期诊治的重要性越来越受到临床关注。本研究观察了新生儿在感染HCMV后的免疫功能与肝功能指标水平的变化，并分析了各指标间的相关性，旨在为新生儿感染HCMV的临床治疗工作提供参考，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2018年1月至2021年1月淄博市妇幼保健院收治的51例感染HCMV新生儿的临床资料，将其中20例活动性HCMV感染新生儿的临床资料作为活动组，31例潜伏性感染HCMV新生儿的临床资料作为潜伏组；另选同期于院内正常分娩的80例健康新生儿的临床资料作为健康对照组。其中健康对照组新生儿中男婴45例，女婴35例；日龄4～18 d，平均（10.51±4.07） d。活动组新生儿中男婴12例，女婴8例；日龄3～18 d，平均（10.45±4.33） d。潜伏组新生儿中男婴17例，女婴14例；日龄4～15 d，平均（10.48±3.16） d。3组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义（均P＞0.05），可进行组间对比。纳入标准：感染HCMV的新生儿均符合《2017国际孕妇及新生儿先天性巨细胞病毒感染预防、诊断与治疗专家共识》[5]中的相关诊断标准，且尿液经聚合酶链式反应显示HCMV阳性者；均为初次感染，且未经抗病毒或免疫抑制剂治疗者；母体均为单胎妊娠，且孕妇产前均接受规律产检者等。排除标准：日龄 ＞ 28 d者；合并单纯疱疹病毒、梅毒、艾滋病、肝炎等其他感染者；存在先天性畸形或其他疾病者等。本研究已经淄博市妇幼保健院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法 抽取3组新生儿清晨静脉血3 mL，一部分血液以2 500 r/min的转速离心10 min后取血清，采用散射比浊法检测血清免疫球蛋白水平[包括免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）]；采用全自动生化分析仪（日立公司，型号：LABOSPECT 008 AS）检测3组新生儿肝功能指标[总胆红素（TBiL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆汁酸（TBA）]水平；另取一部分血液采用流式细胞仪[美国BD公司，型号：FACS Calibur]检测3组新生儿外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分比水平及NK细胞水平，并计算CD4+/CD8+比值。

1.3 观察指标 ①对比3组新生儿免疫球蛋白水平。②对比3组新生儿外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞水平。③对比3组新生儿肝功能指标变化。④采用Pearson 相关性分析法分析各指标之间的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析，计量资料以(±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间计量资料比较采用重复测量方差分析；采用Pearson 相关性分析法分析各指标之间的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫球蛋白水平 健康对照组、潜伏组及活动组3组新生儿血清IgA、IgM、IgG水平，组间两两比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

表1 3组新生儿免疫球蛋白水平比较(  ±s , g/L)

表1 3组新生儿免疫球蛋白水平比较(  ±s , g/L)

注：IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M。

组别 例数 IgA IgG IgM健康对照组 80 0.47±0.16 5.19±1.38 1.02±0.43潜伏组 31 0.45±0.14 5.92±2.49 0.94±0.32活动组 20 0.50±0.20 5.68±1.22 0.92±0.31 F值 0.577 2.333 0.805 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.2 外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞水平 与健康对照组比，活动组与潜伏组患儿CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均显著降低，且活动组显著低于潜伏组；CD8+百分比均显著升高，且活动组显著高于潜伏组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），但3组间NK细胞水平比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 3组新生儿外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞比较(  ±s)

表2 3组新生儿外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞比较(  ±s)

注：与健康对照组比，*P＜0.05；与潜伏组比，#P＜0.05。

组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ NK细胞(%)健康对照组 80 75.15±6.41 48.21±7.45 19.80±2.63 2.43±0.83 12.72±3.60潜伏组 31 66.26±6.65* 40.10±9.21* 21.90±3.17* 1.83±0.49* 13.08±3.93活动组 20 59.60±8.23*# 33.70±7.13*# 24.60±3.90*# 1.37±0.37*# 13.35±3.43 F值 50.892 32.509 22.483 21.464 0.286 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05

2.3 肝功能指标 与健康对照组比，活动组与潜伏组患儿血清TBiL、ALT、AST、GGT、TBA水平均显著升高，且活动组显著高于潜伏组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表 3。

表3 3组新生儿肝功能指标比较(  ±s)

表3 3组新生儿肝功能指标比较(  ±s)

注：与健康对照组比，*P＜0.05；与潜伏组比，#P＜0.05。TBiL：总胆红素；ALT：丙氨酸氨基转移酶；AST：天门冬氨酸氨基转移酶；GGT：谷氨酰转肽酶；TBA：总胆汁酸。

组别 例数 TBiL(μmol/L) ALT(U/L) AST(U/L) GGT(U/L) TBA(μmol/L)健康对照组 80 10.05±2.66 9.23±3.38 37.95±11.10 31.99±14.39 7.73±3.26潜伏组 31 15.85±3.13* 21.94±5.54* 45.98±15.72* 42.05±15.43* 11.44±5.04*活动组 20 30.01±6.52*# 47.42±9.30*# 63.73±23.24*# 60.55±18.54*# 18.24±6.59*#F值 248.657 442.060 25.286 28.765 48.224 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 相关性分析 经Pearson相关性分析法分析，结果显示，外周血CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均与TBiL、ALT、AST、GGT、TBA 呈负相关，CD8+百分比均与TBiL、ALT、AST、GGT、TBA 呈正相关，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表4。

表4 HCMV感染患儿外周血T淋巴细胞亚群与肝功能之间的相关性分析

3 讨论

HCMV具有致病力弱，潜伏- 活化的生物学特性，可引起肝脏、泌尿生殖系统、中枢神经系统等各系统的感染，临床症状可从轻微无症状感染至严重缺陷或死亡。目前，HCMV感染率和发病率均呈升高趋势，新生儿作为一个机体免疫功能低下的群体，发生感染的风险较高，而其感染可分为先天性感染和后天性感染，其中以先天性感染致残率和病死率较高[6-7]。

HCMV感染不仅可以激活机体产生免疫应答，同时能影响机体的免疫系统[8]。研究表明，当HCMV感染机体后，在辅助性T细胞的作用下，B淋巴细胞系统可被激活，最终导致病毒特异性抗体与病毒结合，但HCMV感染后机体所产生的体液免疫应答不能预防感染，仅能起到一定的保护作用，抗病毒细胞免疫应答才是感染后的一种主要免疫应答机制[9-11]。在本研究结果中，健康对照组、潜伏组及活动组3组新生儿血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG、NK细胞水平比较，差异均无统计学意义，提示HCMV感染后对机体体液免疫及NK细胞均无明显影响。在姜涛等[12]研究中，通过对124例HCMV感染患儿进行研究后发现，HCMV感染后，其机体的体液免疫功能基本正常，与本研究结果相似。

有研究发现，HCMV感染可引起T细胞亚群及辅助性T细胞1（Th1）、辅助性T细胞2（Th2）细胞分泌的细胞因子比例失衡，从而引起机体的免疫系统功能紊乱，导致各脏器功能出现一系列损伤[13]。T细胞免疫作为机体适应性免疫应答的主要参与者，可对外来抗原进行识别，其中CD3+、CD4+、CD8+细胞是细胞免疫的主要效应细胞与调节细胞，而CD4+/CD8+比值是细胞免疫功能状态的重要指标，CD3+、CD4+T细胞反应可受新生儿体内未成熟的微环境影响，在急性HCMV感染的消退中起着重要的作用；而CD8+T细胞大多通过直接的细胞毒性来发挥其功能，在遇到外来抗原后，可导致携带特异性T细胞受体的幼稚T细胞激活并完成复制，在感染清除后，可导致抗原特异性T细胞凋亡，只留下一小部分记忆性T细胞发挥作用，若存在细胞免疫缺陷者，可导致严重的或长期的HCMV感染，进一步抑制机体的细胞免疫功能[14-15]。本研究中，与健康对照组比，活动组与潜伏组患儿CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均显著降低，且活动组显著低于潜伏组；CD8+百分比均显著升高，且活动组显著高于潜伏组，提示HCMV感染后，新生儿机体处于细胞免疫抑制与失调状态，而在活动期感染中该种状态更为明显，可能导致机体抗感染细胞免疫应答无法进行有效诱导，进而不能完全清除病毒，造成病毒持续感染。而在王智灵等[16]研究中认为，CD4+、CD8+细胞水平的异常可能是由于程序性死亡受体-1所致的机体T细胞一定程度的衰竭所致，故而阻断该受体，可增强HCMV感染新生儿机体的T细胞反应。

血清肝功能指标是反映新生儿肝功能损害的敏感指标，对其进行动态监测有助于观察其肝功能损害程度，ALT、AST都是转氨酶，也是人体肝脏正常运转过程必不可少的催化剂，当肝细胞发生炎症、坏死的时候，肝细胞膜会破裂，其可释放进血液中，使血清转氨酶升高；同时TBiL由肝脏代谢，其水平高低可反映肝脏代谢功能；GGT反映胆汁淤积情况[17-18]。研究显示，婴幼儿感染HCMV后，HCMV在肝细胞内繁殖，可导致肝细胞广泛坏死；同时，其会侵犯肝内胆管上皮细胞，引起胆管炎症反应，导致胆汁淤滞，进而出现HCMV肝炎、黄疸、多器官功能损害等[19-20]。本研究中，与健康对照组比，活动组与潜伏组患儿血清TBiL、ALT、AST、GGT、TBA水平均显著升高，且活动组显著高于潜伏组，从而证实了新生儿感染HCMV后可引起机体肝功能损害，引起肝脏间质性炎症与肝细胞变形坏死，且活动期HCMV感染对机体肝功能影响更严重，因此，对新生儿HCMV感染期间进行积极的肝功能指标检测，对预防患儿肝功能损害具有重要意义。此外，本研究还进一步分析了外周血T淋巴细胞亚群与肝功能之间的相关性，发现CD3+、CD4+、CD4+/CD8+与各项肝功能指标均呈负相关，CD8+百分比与各项肝功能指标均呈正相关，从而表明免疫功能缺陷与肝功能损害的相关性，因此，临床应针对HCMV感染患儿适当应用免疫调节剂，实时监测肝功能指标，积极预防继发感染，以减轻HCMV感染对患儿肝功能的影响，改善预后。

综上，HCMV感染对新生儿机体体液免疫功能影响较小，但可抑制患儿细胞免疫功能，加强肝功能的损害，且以活动期影响最大，故而临床应在新生儿HCMV感染期间，严密监测新生儿的免疫指标和肝功能指标，及时对感染患儿进行干预，以降低病毒感染对新生儿造成的损伤。