miRNA-21水平变化在妊娠期糖尿病患者中的应用价值

左显波

河南省南阳市第一人民医院检验科,河南南阳 473000

妊娠期糖尿病是女性妊娠期常见的内科并发症之一，不仅会引起妊娠高血压、先兆子痫、胎膜早破等一系列疾病的发生，还会增加新生儿高胆红素血症、低钙血症的发病风险，对孕产妇、胎儿及新生儿造成不容忽视的健康风险[1]。相关资料显示，妊娠期糖尿病是一种由饮食习惯、遗传因素、生活环境等共同导致的多因素疾病，具体发病机制尚未明确[2]。微小核糖核酸(miRNA)是一种内源性的小分子RNA，通过与信使RNA(mRNA)结合、调节基因的转录来发挥作用。而且成熟的miRNA具有高度稳定性，不受时间、温度等外在因素的影响而使检查结果发生变化[3]。miRNA-21作为miRNA中第1个由RNA聚合酶Ⅱ转录的miRNA，目前已有很多学者证实了其在胃癌、肺癌、宫颈癌及心血管疾病发生中的作用，因其所在组织细胞的类型和特异性不同，发挥着不同的生物学作用[4-5]。也有研究表示，miRNA-21在糖尿病患者中呈异常高表达状态[6]，但具体作用机制仍待进一步研究。基于此，本研究旨在探讨miRNA-21在妊娠期糖尿病患者中的水平及与血糖指标的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年2月至2020年1月于本院接受治疗的78例妊娠期糖尿病患者纳入试验组。将同期来本院产检的年龄、孕周与试验组相近的健康孕妇80例作为对照组。试验组年龄21～39岁，平均(26.43±4.26)岁；孕周7.6～21.3周，平均(13.4±1.2)周；体质量指数(BMI)21.14～23.72 kg/m2，平均(22.48±0.65)kg/m2。对照组年龄23～37岁，平均(26.52±4.31)岁；孕周7.9～21.6周，平均(13.1±1.4)周；BMI 21.23～23.68 kg/m2，平均(22.54±0.62)kg/m2。两组受试者一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会审核批准，两组受试者及家属均已知晓且签署知情同意书。

1.2纳入与排除标准 纳入标准：(1)所选受试者为单胎妊娠，试验组患者均符合第13版《实用内科学》中有关妊娠期糖尿病的诊断标准[7]；(2)所选受试者均能遵循医嘱完成相关检查或治疗。排除标准：(1)妊娠前合并甲状腺功能亢进等内分泌疾病者；(2)妊娠前合并冠心病、高血压等疾病者；(3)有视听障碍或意识障碍者；(4)近期服用降血压、血糖的药物或本次研究前已确诊妊娠期糖尿病者；(5)合并心、肝、肺、肾等器官功能严重异常或凝血功能障碍者；(6)临床资料不完整者或失访者。

1.3方法 所选受试者均于入组后第1、3、5天清晨空腹抽取静脉血3 mL，置于真空干燥管中，转入EDTA采血管中，经离心处理后取上清液进行检测。

1.3.1血糖指标检测 采用免疫比浊法检测受试者入组后第1、3、5天糖化血红蛋白(HbA1c)水平，采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FBG)水平，检测仪器为美国贝克曼库尔特公司生产的AU5800全自动生化仪，试剂盒均由上海东仁化学有限公司提供。

1.3.2miRNA-21检测 取受试者入组后第1、3、5天的血液标本，采用miRcute miRNA 提取分离试剂盒抽提和纯化总RNA，总RNA分装标记并置于-80 ℃环境下保存。以总RNA为模板，按照反转录试剂盒说明书进行反转录，miRNA反转录采用miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA试剂盒，获取cDNA。应用miRcute Plus miRNA qPCR 试剂盒进行荧光定量PCR扩增。miRNA-21引物序列以U6为内参基因对目标基因进行归一化处理。正向引物序列为5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向引物序列为5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。反应参数设置：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，共40个循环。

2 结 果

2.1两组受试者检验指标的比较 试验组第1、3、5天的FBG、HbA1c及miRNA-21水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组受试者FBG、HbA1c及miRNA-21水平比较

2.2试验组患者miRNA-21水平与血糖指标的相关性分析 试验组患者的miRNA-21水平与FBG、HbA1c呈明显正相关(r=0.782、0.618,P<0.05)。

3 讨 论

妊娠期糖尿病指既往无糖尿病史，妊娠期间发生或首次被发现的糖尿病，是妊娠期最常见的并发症之一[8]。目前全球范围内妊娠期糖尿病的患病率为1%～20%，占糖尿病孕妇的80%～90%，并呈逐年上升趋势，严重影响母婴健康[9]。由于妊娠期多种激素的相互作用及代谢的改变，使孕产妇易于发生糖尿病[10]。大部分妊娠期糖尿病患者的临床症状会在妊娠结束后消失，但其产后转为2型糖尿病的概率是其他孕产妇的数倍，特别是高龄、肥胖的孕产妇，这也是导致妊娠期糖尿病不良妊娠结局的高危因素[11]。关于糖尿病的临床诊断方法，目前主要通过检测FBG、葡萄糖耐量试验(OGTT)和HbA1c水平作为临床诊断依据[12]。其中FBG是最常用的糖尿病筛查和诊断指标，从1997年作为共识一直沿用至今，但该指标只能反映患者检测即刻的血糖状态，灵敏度较低，具有一定局限性，易造成漏诊[13]。OGTT是我国临床用于研究糖代谢状况和评价糖尿病患者胰岛β细胞功能的常用检测方法，有着灵敏度高、特异度高、干扰因素较少的优点，但该方法也存在着检测手段复杂，检测结果等待时间长等缺点，有少部分患者依从性差，并不利于临床的广泛开展[14]。HbA1c是血红蛋白和血糖的最终结合物，因其结合反应不可逆，HbA1c水平可随着血糖水平的升高而升高，也可随着红细胞的死亡而降低，可反映患者过去2～3个月的血糖变化情况，不易受进餐等因素的干扰，准确度较高。但HbA1c也有缺点，易受孕产妇中晚期血容量变化、血红蛋白代谢速度及红细胞寿命的影响，并不完全适用于高龄孕产妇作为糖尿病的诊断标准[15]。因此，寻求一种有效且安全的生物标志物来筛查和诊断妊娠期糖尿病，对改善妊娠期糖尿病患者的生活质量有重要价值。

妊娠期糖尿病是多因素、多机制共同作用的结果，多个具有重要功能基因的表达水平会影响该病的发生、发展，故妊娠期糖尿病的分子调控机制研究对该病的早期筛查及诊断有重要意义[16]。有学者指出，miRNA是基因表达的主要监管者和生物病理学的关键控制器，它的重要性已在癌症、病毒性疾病、心血管疾病中被证实，而且其在胰岛β细胞对胰岛素的调节过程中也发挥着关键作用[17]。目前研究最多的miRNA包括miRNA-1、miRNA-21、miRNA-133、miRNA-181等，其中miRNA-21已被证实参与了脂肪细胞分化、糖酵解、胰岛素分泌等生物学调控过程[18]。本研究结果显示，妊娠期糖尿病患者miRNA-21、FBG和HbA1c水平明显高于健康孕妇(P<0.05)，且经Spearman相关分析发现，miRNA-21水平与FBG、HbA1c呈正相关(P<0.05)，说明妊娠期糖尿病患者的miRNA-21呈高表达，其水平会随着血糖水平的上升而升高。分析其中原因：miRNA-21作为人类基因组中最早发现和命名的miRNA，其可直接作用于多种靶基因，表达水平也受多种因子的调控，当其直接靶向作用于胰岛素受体、胰岛素受体底物等因子时，可下调AMPK基因表达进而参与调控胰岛β细胞的生长、存活和有丝分裂，导致机体糖代谢异常，诱发妊娠期糖尿病。

综上所述，妊娠期糖尿病患者的miRNA-21水平相比健康孕妇明显升高，其水平与FBG、HbA1c呈正相关，孕期动态监测miRNA-21水平在一定程度上可预测妊娠期糖尿病是否发生。