海王鹿皮胶免疫调节作用研究*

李会影 康樱樱 王庆 翟英濯 程宪春

吉林省中医药科学院，吉林 长春 130021

动物药作为中药的三大来源之一，在我国具有悠久的应用历史，丰富的临床经验。目前，常用有六种补胶药材，如阿胶、黄明胶、龟甲胶、鳖甲胶、鹿角胶、鱼鳞胶等，均存在广阔的发展潜力。海王鹿皮胶是由吉林海王健康生物科技有限公司研制的，以养殖鹿鹿皮为原料，经熬胶取汁、浓缩凝胶等工艺制成的符合食品安全国家标准的普通食品[1，2]。探讨海王鹿皮胶的免疫调节功能是针对鹿皮胶的全新研究，通过建立免疫低下动物模型，观察海王鹿皮胶与阿胶对免疫低下小鼠的免疫调节作用差异，为将海王鹿皮胶开发成为保健食品提供药理学依据。

1 材料

1.1 鹿皮胶 鹿皮胶，吉林海王健康生物科技有限公司生产，批号:20180621。以养殖鹿鹿皮为原料，棕色至棕红色的长方形块状固体，味微甜，略腥。配置方法:用少量黄酒中蒸化配置合适浓度的水溶液。

1.2 阿胶 阿胶，山东东阿阿胶股份有限公司提供，批号:20180910。

1.3 实验动物 SPF级小鼠，昆明种，性别:雄性，体重18～22g，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供，许可证号:SCXK(辽)2020－0001。饲养于清洁级动物室，室温:22－25℃，相对湿度:40%－50%。采用标准饲料喂养，自由饮水，垫料为玉米芯，放射线同位素钴60辐照消毒。雌、雄分笼饲养，每笼10只。实验前动物适应性喂养3天。

2 试验方法

2.1 鹿皮胶对免疫低下小鼠单核－巨噬细胞系统碳粒廓清功能的影响 取健康昆明种小鼠60只，体重18～22g，雄性，采用随机数字法，将其分为5组，正常对照组、阿胶对照组、鹿皮胶高剂量组、鹿皮胶中剂量组、鹿皮胶低剂量组，每组10只，各组均连续给样品30天。从给药第27天开始，正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠按剂量50mg/kg腹腔注射环磷酰胺，连续3天。于末次灌胃后1小时，各鼠由尾静脉按剂量(0.1ml/10g体重)注射印度墨汁，然后在注射2min及12min时，从小鼠眼静脉丛取血20ul，加入浓度为0.1%碳酸钠溶液2ml中，摇匀，静置1h，然后以碳酸钠溶液作空白对照，采用分光光度计测光密度OD值[3]。最后，颈椎脱臼处死动物，剖取肝脏、脾脏称重，计算廓清指数K值、吞噬指数α值。结果见表1。

2.2 鹿皮胶对免疫低下小鼠免疫器官重量的影响 取60只健康昆明种小鼠，性别为雄性。体重为18～22g，分组给药方式如2－1。阿胶对照组和鹿皮胶高剂量组、鹿皮胶中剂量组、鹿皮胶低剂量组按以上所示剂量。从给药第27天开始，正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠按剂量50mg/kg腹腔注射环磷酰胺，连续3天。建立免疫机能低下小鼠模型，正常对照组注射等量生理盐水。各组小鼠于末次给药后，禁食不禁水12h，称重，脱颈椎处死，仔细剥离脾脏、胸腺后称重，并计算脾指数及胸腺指数[4]。

2.3 鹿皮胶对免疫低下小鼠血清溶血素的影响 取60只健康昆明种小鼠，性别为雄性。体重为18～22g，分组给药方式如2－1。阿胶对照组和鹿皮胶高剂量组、鹿皮胶中剂量组、鹿皮胶低剂量组按以上所示剂量。从给药第27天开始，正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠按剂量50mg/kg腹腔注射环磷酰胺，连续3天。建立免疫机能低下小鼠模型，正常对照组注射等量生理盐水。①SRBC:于绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中摇动脱纤维，4℃冰箱保存。②制备补体:采集多只豚鼠血分离血清，将1ml压积的SRBC加入到5ml豚鼠血清中，放4℃冰箱30min，经常震荡，离心取上清，用时以SA液按1:8稀释。③免疫动物 取羊血，用生理盐水洗涤3次，2000r/min每次离心10min。将SRBC配成2%(v/v)的生理盐水细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫，5d后，摘眼球取血至离心管中，放置1h，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。④溶血反应:将血清∶SA缓冲液＝1∶200(V/V)稀释后，冰浴中各试管依次加入0.5m L 稀释血清、0.25m L 10%SRBC、0.5ml补体(用SA液按1∶8稀释)，另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃ 恒温水浴中保温10～15min，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清液0.5m L，加都氏液1.5m L。同时取10%SRBC 0.125m L，加 都 氏液1.875m L，充分混匀，室温放置10min，于570nm 处以对照管做空白，分别测血清溶血素含量，计算半数溶血值(HC50)[5]。

3 试验结果

3.1 海王鹿皮胶对小鼠单核－巨噬细胞功能的影响表1结果表明:与正常对照组比较，模型对照组小鼠的廓清指数明显降低，P＜0.001，差异极显著的统计学意义；吞噬指数略降低，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明免疫低下小鼠模型复制成功。与模型对照组比较，海王鹿皮胶高剂量组的廓清指数K值明显升高，P＜0.05，差异具有统计学意义；阿胶对照组的廓清指数K值无明显变化，P＞0.05，差异无统计学意义。

表1 海王鹿皮胶对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响(±s)

表1 海王鹿皮胶对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响(±s)

注:与空白对照组比较，＃P＜0.05，＃＃＃P＜0.001，与模型对照组比较，*P＜0.05，***P＜0.001，差异具有统计学意义。

组别 动物数(只) 剂量(g/kg) 廓清指数K值 吞噬指数α值正常对照组 10 －－ 0.060±0.016 6.617±0.474模型对照组 10 0.016±0.010＃＃＃ 5.240±1.556＃阿胶对照组 10 0.39 0.024±0.015 5.595±0.994海王鹿皮胶组 10 1.04 0.027±0.007* 6.042±0.673海王鹿皮胶组 10 0.52 0.021±0.004 5.587±0.454海王鹿皮胶组 10 0.26 0.023±0.011 5.963±1.183

3.2 海王鹿皮胶对小鼠脾指数、胸腺指数的影响 表2结果表明:与正常对照组比较，模型对照组小鼠的脾指数和胸腺指数明显降低，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义，说明免疫低下小鼠模型复制成功。与模型对照组比较，海王鹿皮胶高剂量组的胸腺指数明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义；阿胶对照组的胸腺指数明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义。且阿胶对照组和海王鹿皮胶高剂量组的胸腺指数比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

表2 海王鹿皮胶对小鼠脾指数、胸腺指数的影响(n=10，±s)

表2 海王鹿皮胶对小鼠脾指数、胸腺指数的影响(n=10，±s)

注:与空白对照组比较，＃＃＃P＜0.001，与模型对照组比较，***P＜0.001，差异具有统计学意义。

组别 动物数(只) 剂量(g/kg) 脾指数(mg/g) 胸腺指数(mg/g)正常对照组 10 — 3.346±0.316 1.127±0.364模型对照组 10 — 1.951±0.302＃＃＃ 0.330±0.256＃＃＃阿胶对照组 10 0.39 2.191±0.595 1.015±0.286***海王鹿皮胶组 10 1.04 2.272±0.493 0.865±0.296***海王鹿皮胶组 10 0.52 1.823±0.387 0.574±0.372海王鹿皮胶组 10 0.26 1.771±0.371 0.311±0.162

3.3 海王鹿皮胶对免疫低下小鼠血清溶血素的影响表3结果表明:与正常对照组比较，模型对照组小鼠的半数溶血值显著降低，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义，说明免疫低下小鼠模型复制成功。与模型对照组比较，海王鹿皮胶高剂量组、海王鹿皮胶中剂量组的半数溶血值明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义；阿胶对照组的半数溶血值明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义。阿胶对照组和海王鹿皮胶高剂量组的半数溶血值比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

表3 海王鹿皮胶对免疫低下小鼠血清溶血素的影响

3 讨 论

鹿产业是吉林省重要优势产业，发展潜力大、后劲足，鹿皮胶保健食品的开发将有利于带动我省鹿业产品又快又好的提升。由于传统驴皮胶(阿胶)具有补血、止血、抗氧化、抗休克的作用，尤其是在机体免疫功能的调节方面得到广泛的证实。人们也日益重视鹿皮胶能否在增强机体免疫力方面发挥与驴皮胶同样的功效，为此，深入研究鹿皮胶与驴皮胶在增强机体免疫力方面的作用差异，为鹿皮胶保健食品的开发提供理论支持。本组试验研究表明，与模型对照组比较，海王鹿皮胶高剂量组的廓清指数K值明显升高，P＜0.05，差异具有统计学意义；海王鹿皮胶高剂量组的胸腺指数明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义；海王鹿皮胶高剂量组的胸腺指数明显升高，P＜0.001，差异具有极显著的统计学意义。说明海王鹿皮胶与阿胶在提高免疫功能方面作用相当。综上所述，海王鹿皮胶可明显增强免疫功能低下小鼠的免疫功能，值得进一步开发利用。