早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表达与颈动脉内-中膜厚度的关系分析

柳越

【摘要】 目的：研究早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表達与颈动脉内-中膜厚度（CIMT）的关系。方法：选取2019年1月-2021年6月朝阳市第二医院收治的376例早期T2DM患者，将其按照CIMT的差异分作CIMT增厚组（CIMT≥0.9 mm）172例及CIMT正常组（CIMT<0.9 mm）204例。另取同期健康体检者100例作为对照组。采集所有受试者的临床资料，采用全自动生化分析仪检测糖脂代谢指标，以实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清miR-142、miR-197表达水平。借助高频彩色多普勒超声技术完成CIMT的测定。以Spearman相关性分析明确早期T2DM患者CIMT与相关指标的关系。结果：CIMT增厚组及CIMT正常组体质量指数（BMI）、空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）及空腹胰岛素（FINS）水平均高于对照组，且CIMT增厚组均高于CIMT正常组，差异均有统计学意义（P<0.05）。CIMT增厚组血清miR-142、miR-197表达均低于CIMT正常组及对照组，且CIMT正常组均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。经Spearman相关性分析可得，早期T2DM患者CIMT与FPG、HbA1c水平呈正相关，与血清miR-142、miR-197表达水平均呈负相关（P<0.05）。结论：早期T2DM患者血清miR-142、miR-197均呈异常低表达，且和CIMT密切相关，即随着上述两项血清指标的表达下降，CIMT增加。

【关键词】 2型糖尿病 miR-142 miR-197 颈动脉内-中膜厚度

Relationship between the Expression of Serum miR-142 and miR-197 and Carotid Intima-media Thickness in Early T2DM Patients/LIU Yue. //Medical Innovation of China， 2022， 19（10）： -138

[Abstract] Objective： To investigate the relationship between the expression of serum miR-142 and miR-197 and carotid intima-media thickness （CIMT） in early T2DM patients. Method： A total of 376 patients with early T2DM admitted to the Second Hospital of Chaoyang City from January 2019 to June 2021 were enrolled in this study. According to CIMT differences， they were divided into the CIMT thickening group （CIMT ≥0.9 mm）

172 patients and in the CIMT normal group （CIMT <0.9 mm） 204 patients. Another 100 healthy subjects were selected as the control group. Clinical data of all subjects were collected， glucose and lipid metabolism indexes were detected by automatic biochemical analyzer， and serum miR-142 and miR-197 expression levels were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. The CIMT was measured by high frequency color doppler ultrasonography. Spearman correlation analysis was used to determine the relationship between CIMT and related indicators in early T2DM patients. Result： Body mass index （BMI）， fasting blood glucose （FPG）， HbA1c and fasting insulin （FINS） levels in the CIMT thickening group and the CIMT normal group were higher than those in the control group， and those in the CIMT thickening group were higher than those in the CIMT normal group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expressions of serum miR-142 and miR-197 in the CIMT thickening group were lower than those in the CIMT normal group and the control group， and those in the normal CIMT group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Spearman correlation analysis showed that CIMT were positively correlated with the levels of FPG and HbA1c in early T2DM patients， and negatively correlated with the levels of miR-142 and miR-197 in serum （P<0.05）. Conclusion： Serum miR-142 and miR-197 are abnormally low in early T2DM patients， and are closely related to CIMT， that is， CIMT increases with the decrease of the expression of the above two serum indicators.

[Key words] Type 2 diabetes mellitus miR-142 miR-197 Carotid intima-media thickness

First-author’s address： The Second Hospital of Chaoyang City， Liaoning Province， Chaoyang 122000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.10.032

颈动脉内-中膜厚度（CIMT）是临床上广泛用以评估早期动脉粥样硬化的可靠指标，且和2型糖尿病（T2DM）患者的动脉受损程度、范围有关[1-3]。微小RNA（miRNA）是近年来发现的一类长度约20～25个核苷酸的非编码RNA，其广泛存在于真核生物中，可通过和靶基因mRNA序列特异性结合，继而调节靶基因的表达，进一步在细胞增殖、分化及凋亡等过程中起着至关重要的作用[4]。迄今为止，临床上关于早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表达的研究较为少见，且上述两项指标表达和早期T2DM患者CIMT关系的研究更是未见报道。鉴于此，本文通过研究早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表达与CIMT的关系，以期为临床T2DM的防治提供新的靶点及思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019年1月-2021年6月朝阳市第二医院收治的376例早期（确诊时间<3个月）T2DM患者的临床资料，另取同期健康体检者100例为对照组。纳入标准：（1）符合文献[5]中T2DM诊断标准;（2）均为成年人，男女不限;（3）T2DM患者入组前尚未接受相关降糖治疗;（4）T2DM患者空腹血糖水平在6.1～6.9 mmol/L，餐后2 h血糖水平为7.8～11.1 mmol/L;（5）资料不完整。排除标准：（1）心、肝、肺等脏器发生严重病变;（2）合并严重感染性疾病、免疫性疾病或恶性肿瘤;（3）合并糖尿病并发症;（4）合并意识障碍或精神疾病。按照CIMT的差异将T2DM患者分为CIMT增厚组（CIMT≥0.9 mm）172例及CIMT正常组（CIMT<0.9 mm）204例。本研究经医院伦理委员会获悉并核准，入组人员均于知情同意书上签名。

1.2 方法 （1）临床资料采集，主要是通过医院病历系统完成所有受试者的临床资料统计、记录。（2）实验室生化指标检查，包括空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（DHL-C）等。FPG的检测通过己糖激酶法实现;HbA1c通过高效液相色谱法检测;空腹胰岛素（FINS）通过电化学发光法检测;脂代谢指标均通过酶法检测，使用仪器为美国贝克曼库尔特BECKMAN COULTER AU5800。（3）血清miR-142、miR-197表达检测，分别采集所有受试者晨起空腹静脉血4 mL，以10 cm为离心半径，以3 500 r/min为离心速率，低温条件下离心处理10 min。随后根据miRNA提取试剂盒说明书完成miRNA的提取，根据逆转录试剂盒对所提取的miRNA实施逆转录，获取cDNA。以miScript SYBR Green PCR Kit检测血清miR-142、miR-197相对表达水平。其中miRNA提取试剂盒选用天根生化科技有限公司产品;逆转录试剂盒选用美国应用生物系统公司产品;miScript SYBR Green PCR Kit选用北京东璞泰和科技有限责任公司产品，具体操作以试剂盒说明书为准。反应体系均为20 μL，反应条件如下：95 ℃下30 s，60 ℃下30 s，75 ℃下

10 s，共35个循环。miR-142引物序列如下：上游引物：5’-GCACTCGAGGAAAGGCCGGGATAAACCTA-3’，下游引物：5’-ATGCGGCCGCACACACAGCAAGAGGGGAG-3’。miR-197引物序列如下：上游引物：5’-CCGACACGGCCATCTCTCC-3’，下游引物：5’-GGCCATGCTGGGTGGAGAAG-3’。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，多组间对比采用单因素方差分析;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验;采用Spearman相关性分析明确早期T2DM患者CIMT与相关指标的关系。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料及实验室检查指标比较 CIMT增厚组及CIMT正常组BMI、FPG、HbA1c及FINS水平均高于对照组，且CIMT增厚组均高于CIMT正常组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 三组血清miR-142、miR-197水平比较 CIMT增厚组血清miR-142、miR-197表达均低于CIMT正常组及对照组，且CIMT正常组均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 早期T2DM患者CIMT与相关指标的相关性分析 经Spearman相关性分析可得，早期T2DM患者CIMT与FPG、HbA1c水平呈正相关，与血清miR-142、miR-197表达水平均呈负相关（P<0.05），见表3。

3 讨论

CIMT是公认的动脉粥样硬化早期可靠标志物之一，和心血管事件的发生、发展密切相关，因此及时有效评估T2DM患者的CIMT，对诊断及控制T2DM患者大血管病变具有重要的意义。有研究发现miRNA表达异常可在一定程度上反映機体的糖脂代谢状态，而miR-142与miR-197均是miRNAs家族重要成员之一，研究两者和T2DM患者CIMT关系具有一定的价值[6-8]。

本文结果发现，CIMT增厚组及CIMT正常组BMI、FPG、HbA1c及FINS水平均高于对照组，且CIMT增厚组均高于CIMT正常组，差异均有统计学意义（P<0.05）。且早期T2DM患者CIMT与FPG、HbA1c均呈正相关。这在既往相关研究中均得以佐证，反映了上述指标的异常表达可能参与了T2DM患者动脉粥样硬化发生、发展过程[9-11]。究其原因，随着FPG、HbA1c水平的升高，机体处于高血糖状态，可能进一步加剧患者的胰岛素抵抗水平，继而通过抑制蛋白激酶B途径实现对血管舒张功能的抑制，同时可对ROS信号转导途径起到抑制作用，继而抑制糖的利用及转化，引起糖原的大量积累，最终导致血管系统出现损伤。CIMT增厚组血清miR-142、miR-197表达均低于CIMT正常组及对照组，且CIMT正常组均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。早期T2DM患者CIMT与FPG、HbA1c水平呈正相关，与血清miR-142、miR-197表达水平均呈负相关（P<0.05）。这提示了血清miR-142、miR-197表达和早期T2DM患者CIMT密切相关，即血清miR-142、miR-197表达异常可能在动脉粥样硬化发生、发展过程中起着至关重要的作用。考虑原因，miR-142主要定位在人17号染色体上，其可能通过调控超敏C反应蛋白（hs-CRP）及血管内皮细胞黏附因子等表达，继而影响平滑肌细胞增殖，间接调控斑块的形成[12-14]。换言之，当miR-142表达下降时，其对炎症反应的调控效果降低，并使调控平滑肌细胞的增殖效果减弱，最终加速了动脉粥样硬化的形成及进展。miR-197可能对T2DM患者机体内的炎症反应调控密切相关，其中T2DM患者的持续高糖状态极易引起炎症及内皮细胞功能的障碍，而miR-197的过表达可通过抑制TLR4基因，实现对NF-kB/NLRP3通路的调控，进一步减轻T2DM患者机体内的炎症反应[15-17]。当miR-197表达下降时，其上述抑制炎症反应的作用随之减弱，继而促进了动脉粥样硬化的发生、发展[18-20]。

综上所述，早期T2DM患者血清miR-142、miR-197均呈异常低表达，且和CIMT密切相关，即随着上述两项血清指标的表达下降，CIMT增加。

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（收稿日期：2021-10-11） （本文编辑：张明澜）