Ddx5、Ddx17表达水平对脑胶质瘤患者术后远期预后的作用*

姜 羽， 吕国伟， 张文进， 张 辉

(郑州大学附属郑州中心医院神经外科，郑州 450000)

脑胶质瘤是源自神经上皮的肿瘤，占颅脑肿瘤的38%～52%，是颅内最常见的原发性肿瘤，浸润性生长，不易完全切除，术后易复发，可导致严重的中枢神经功能障碍，危及患者生命[1]。世界卫生组织把胶质瘤分为四个等级，Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤5 a存活率为30%～70%，Ⅲ～Ⅳ级生存期为9～12个月[2-3]。如何提高脑胶质瘤患者存活率，延长生存期，是神经外科一直以来研究的重点与难点。DEAD-box解旋酶(DEAD-box helicases，Ddx)家族是一类高度保守的RNA解旋酶，属于2型解旋酶超家族成员[4]。Ddx5具有多种生物活性功能，在转录、前mRNA处理或选择性剪接、miRNA处理等生物学过程中发挥重要作用，Ddx17是Ddx解旋酶家族的主要成员之一，与Ddx5有高度同源性。Ddx5/Ddx17作为转录共同调节因子在肿瘤发生发展中起重要作用。多种癌症细胞中Ddx5和Ddx17表达水平升高，参与肿瘤的发生发展[5]。本研究分析Ddx5和Ddx17表达水平及其对脑胶质瘤患者术后远期预后的作用，报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2017年2月—2018年2月在郑州中心医院诊治的脑胶质瘤术后患者118例，其中男69例，女49例；年龄27～74(41.64±5.17)岁。纳入标准：①均实施手术治疗，符合《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和诊疗指南(2015)》[6]对脑胶质瘤的诊断。②肝肾功能、血常规正常(中性粒细胞计数≥1.5×109L-1，血小板计数≥100×109L-1)。③无其他肿瘤或严重性疾病。④无免疫性疾病或神经系统疾病。排除标准：①术前经过化疗、放疗等治疗者。②临床资料不完整者。本研究经院伦理委员会批准，患者及家属已明确研究内容及可能存在的风险，均签署同意书。

1.2 方法

1.2.1 Ddx5、Ddx17表达水平检测 118例脑胶质瘤患者均实施手术治疗，手术中无菌环境得到脑胶质瘤标本制成石蜡切片(4～8 μm)，68 ℃，烤片20 min；经二甲苯脱蜡2次，每次10 min，依次通过无水乙醇10 min，体积分数95%酒精5 min，体积分数85%酒精5 min，体积分数75%酒精5 min水化；质量分数3%过氧化氢溶液灭活内源性过氧化物酶30 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min；柠檬酸溶液抗原修复后，用聚乙二醇辛基苯基醚通透，随后用山羊血清封闭；分别加兔抗人Ddx5和Ddx17一抗(1∶500，购自美国Invitrogen公司)，4 ℃孵育过夜，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min，加山羊抗兔二抗(1∶1 000，购自美国Invitrogen公司)37 ℃孵育1 h，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min；二氨基联苯胺染色1 h，苏木精复染20 s，脱水、透明、干燥、封片。显微镜下观察，每张切片观察5个视野，每个高倍镜观察100个细胞。染色强度评分：无着色0分，浅黄色1分，黄褐色2分，棕褐色3分；染色细胞百分比评分：染色细胞数< 5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。总分=染色强度评分+染色细胞百分比评分，总分0～3分为低表达，>3分为高表达[7]。

1.2.2 预后判断及分组 术后以电话和门诊方式进行随访，随访时间截止至2021年2月，随访资料完整。记录患者术后症状，定期进行影像学检查，关注有异常病变者，适时安排病理活检，对确诊为病情复发且各种条件允许的患者进行二次切除手术，手术病理确诊及因病情恶化死亡，作为终点事件[8]。符合终点事件者纳入预后不良组(36例)，其余患者纳入预后良好组(82例)。

1.2.3 可能影响因素收集 统计可能导致脑胶质瘤患者预后不良的危险因素，包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、是否完全切除肿瘤、放化疗疗效、放化疗结合、病理级别、术前肿瘤直径、术前头部损伤、KPS评分、术前癫痫发作、病灶数目、颅高压、肿瘤部位、体质量指数(BMI)。

1.2.4 logistic回归分析 所收集的因素中，预后不良的发生情况(是=1，否=0)为因变量(Y)，可能影响因素性别(男=1，女=0)、吸烟史(有=1，无=0)、饮酒史(有=1，无=0)、肿瘤切除程度(完全切除=1，部分切除=0)、放化疗疗效(有效=1，无效=0)、放化疗结合(是=1，否=0)、病理级别(Ⅲ、Ⅳ=1，Ⅰ、Ⅱ=0)、术前肿瘤直径(直径<6 cm=1，≥6 cm=0)、术前头部损伤(是=1，否=0)、术前癫痫发作(是=1，否=0)、病灶数目(单个=1，多个=0)、颅高压(是=1，否=0)、肿瘤部位(幕上=1，幕下=0)为二分类变量，年龄、BMI、术前KPS评分为连续变量。以上各因素均为自变量，实施logistic回归分析。

1.2.5 观察指标 ①2组Ddx5、Ddx17表达水平比较。②可能影响患者远期预后的因素比较。③logistic回归分析明确影响脑胶质瘤术后远期预后不良的危险因素。④受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析Ddx5、Ddx17水平对脑胶质瘤术后远期预后的预测作用。

2 结果

2.1 2组患者Ddx5、Ddx17水平比较 预后不良组Ddx5、Ddx17水平高于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者Ddx5、Ddx17水平比较

2.2 影响患者预后的可能因素比较 与预后良好组相比，预后不良组肿瘤部分切除比例及病理Ⅲ、Ⅳ级所占比例较高，差异有统计学意义(P<0.05)；2组的性别、年龄、吸烟史、饮酒史、放化疗有效、放化疗结合、术前肿瘤直径<6 cm、术前头部损伤、术前癫痫发作、单个病灶、颅高压、肿瘤部位在幕上、BMI、术前KPS评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 影响预后的可能因素比较

2.3 logistic回归分析影响患者预后不良的危险因素 经logistic回归分析，肿瘤部分切除、病理Ⅲ级、病理Ⅳ级、Ddx5、Ddx17水平均为导致脑胶质瘤患者预后不良的危险因素，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 logistic回归分析影响患者预后不良的危险因素

2.4 Ddx5、Ddx17水平对脑胶质瘤患者术后远期预后的预测作用 ROC曲线分析显示，Ddx5、Ddx17预测脑胶质瘤预后不良的灵敏度分别为83.78%、78.62%，特异度分别为77.47%、70.12%，准确度分别为81.43%、72.62%，曲线下面积(AUC)分别为0.825、0.751。见表4、图1。

图1 不同指标对脑胶质瘤预后不良预测价值的ROC曲线

表4 不同指标对脑胶质瘤预后不良的预测价值

3 讨论

脑胶质瘤是神经系统外胚层的胶质细胞病变形成的肿瘤，其发生发展与遗传和环境中的致癌因子密切相关，多种因素共同作用，导致细胞内遗传物质发生改变，细胞进入细胞周期不断增殖分裂，且不受生长接触抑制与自身免疫系统限制，持续分裂诱导肿瘤发生发展[9]。脑胶质瘤难以完全切除，术后极易复发，术后患者的病理组织取材困难[10]。因此寻找可以监测脑胶质瘤患者预后情况的指标，对术后复发及疾病未来走向进行有效评估预测具有很高的临床应用价值。

Ddx5参与多种生物学过程，如转录，前mRNA、rRNA和microRNA加工以及调控代谢，参与多种蛋白的复杂合成过程，调控细胞增殖和器官分化[11]。Ddx17氨基酸序列与Ddx5非常近， Ddx17和Ddx5作为RNA解旋酶，参与一系列RNA代谢过程。近年来有研究[12-13]发现，Ddx17和Ddx5可以与肿瘤细胞内转录因子形成复合物，促进相关基因表达，从而介导细胞增殖和上皮-间质转化等恶性生物学行为。有研究[14-16]表明，Ddx17和Ddx5参与调控多种肿瘤细胞增殖，在结肠癌细胞中，Ddx17和Ddx5可通过β-catenin形成转录复合物，诱导c-Myc、cyclin D1等基因表达，共同促进细胞的增殖。有研究[17-18]发现，Ddx17和Ddx5可以促进肿瘤细胞迁移和侵袭，最终导致肿瘤发生转移。孙宇婷等[19]发现，人脑胶质瘤组Ddx5表达水平明显增高。ALQAHTANI等[20]研究发现，Ddx17在乳腺癌细胞中存在高表达，其异常表达可能作为新的临床肿瘤标志物或者预后指标。本研究结果发现，预后不良组Ddx5、Ddx17水平均高于预后良好组，表明Ddx5、Ddx17水平与预后有关，其异常表达可以影响恶性肿瘤患者预后。

本研究发现，经logistic回归分析证实肿瘤部分切除、病理Ⅲ级、病理Ⅳ级、Ddx5、Ddx17水平是导致脑胶质瘤患者术后远期预后不良的危险因素。Ddx5、Ddx17水平能够反映术后患者的恢复情况，其与健康人群平均水平差值越大，说明病情越严重，预后越差。ROC曲线分析显示，Ddx5、Ddx17预测脑胶质瘤预后不良的灵敏度为83.78%、78.62%，特异度为77.47%、70.12%，准确度为81.43%、72.62%，AUC为0.825、0.751，表明Ddx5、Ddx17水平对脑胶质瘤患者病情评估及术后远期预后预测有较高的临床价值，可为临床治疗及预后判断提供参考。

综上所述，脑胶质瘤患者的Ddx5、Ddx17水平可反映病情变化，且是导致术后远期预后不良的危险因素，对于术后远期预后预测有一定的临床价值。在今后此类疾病的诊断、治疗及预后判断中，可以将Ddx5、Ddx17水平作为参考依据。