酶联免疫吸附法与RT-PCR 法对血液标本内乙肝病毒的检验结果比较

陶琴芳

（南京市高淳人民医院 南京 211300）

乙肝病毒在我国属于常见且多发的一种传染性疾病，其患病率很高，传播比较广泛，一般情况下均表现为持续性带病毒的状态，进而形成慢性感染，是目前不容忽视的公共卫生问题。如果患者长期携带乙型肝炎病毒，且不加以控制，很容易出现肝衰竭及肝硬化的情况，进而危及患者生命安全[1]。传统的临床检验主要是多采取血清学标志物，不过期间一旦发生检测失误就会出现检测者被传染的情况[2]。随着临床上抗病毒药物的不断广泛应用，HBV 变异株数量也不断的增加，进而导致血清学检查更加困难，其敏感性及准确性均大大降低[3]。

近年来，生物技术得到不断发展，对HBV 的检测也有了很多新的突破，弥补了传统技术的缺陷。为进一步探讨对比ELISA（酶联免疫吸附法）与RT-PCR（实时荧光定量-PCR）法对血液标本内乙肝病毒的检验结果，本文将我院在2019 年4 月至2020 年12 月收入的血液标本，抽取其中的300 份乙肝病毒标本进行研究，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以我院在2019 年4 月至2020 年12 月收入的血液标本，抽取其中的300 份乙肝病毒标本进行研究，对其临床资料作回顾性分析。其中，男性160 例，女性140 例，年龄18～89 岁，平均（53.56±5.24）岁。

1.2 纳入标准

（1）均经过相关检验明确诊断为乙肝患者；（2）均未进行任何抗病毒治疗；（3）家属及患者均知情同意本研究，签署相关的同意书，本研究得到我院伦理委员会批准。（4）均为自愿参加本研究。

1.3 排除标准

（1）对于其他类型的肝炎患者进行排除，例如甲型、丙型等；（2）对于合并肝脏恶性肿瘤的患者进行排除；（3）对于有严重心脑血管疾病的患者进行排除；（4）对于中途退出本研究及不愿参加本研究的患者进行排除。

1.4 检验方法

抽取其中的100 份乙肝病毒标本进行研究，分别采取酶联免疫吸附法与RT-PCR 法进行乙肝病毒检测。其中，酶联免疫吸附法：在清晨空腹状态下，抽取患者的外周静脉血，约5ml，放置于环境温度为4℃的冰箱内，保存2h，在经过离心后取上层血清进行待检测。

然后，以ELISA 酶联免疫吸附法对其进行定性检验，检测HBsAg、HbcAb、HbeAg、HbsAb、HbeAb，分别为乙肝表面抗原、乙肝核心抗体、乙肝e 抗原、乙肝表面抗体、乙肝E 抗体，在检测过程中严格根据相关的操作标准执行。

RT-PCR 法定量检测：在清晨空腹状态下，抽取患者的外周静脉血，约5ml，放置于环境温度为4℃的冰箱内，保存2h，在经过离心后取上层血清进行待检测，仪器型号为AFD4800（安洁思），然后将200μl的血清样本与乙肝DNA 提取液450μl 进行混合，在100℃下的温育器中进行10min 的预热，然后以冰冻离心机进行5min 的离心，转速为12000r/min，取20μl的上清液放置于PCR 管内，相关流程操作严格根据操作说明书进行，然后弱阳性、阴性、阳性等，在反应结束后以Ct 值做荧光曲线，根据其Ct 值对其DNA 值进行计算。

1.5 观察指标

分别记录两种检查方式下乙肝病毒的检验结果，并进行对比分析。

首先，乙型肝炎病毒（HBV）与血清免疫学标志物（HBV-M）的表现模式有以下5 种：（1）大三阳阳性：即HBsAg、HbcAb、HbeAg 均为“+”；（2）小三阳阳性：即HBsAg、HbeAb、HbcAb 均为“+”；（3）HBsAg 和HbeAb 均为“+”；（4）HbsAb、HbeAb、HbcAb均为“+”；（5）HbeAg、HBsAg 均为“+”；HBV-DNA水平在1×103copies/ml 以上均为表示为阳性。

其次，对于不同模式下HBV-DNA 即乙肝病毒的脱氧核糖核酸含量分布情况，有以下3 种情况，第一：高水平复制情况，即HBV-DNA 水平在1×106copies/ml以上；第二：中、低水平复制情况，即HBV-DNA 水 平 在 1 ×103copies/m l -1 ×106copies/ml；第三：结果呈阴性，即HBV-DNA 水平在1×103copies/ml以内[4]。

1.6 统计学处理

应用SPSS 26.0 软件进行处理，计数资料比率（n，%）表示，以X2进行检验，计量资料以（）表示，以t 检验，P＜0.05 差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检验方法对HBV的检验阳性率对比

HBV 与HBV-M 的表现模式下ELISA 检验结果显示，HBV-M 表现模式为大三阳的情况下，阳性率为96.12%，HBV-M 表现模式为第五种模式的情况下，其阳性率为80.95%与其他3 种模式的阳性率比较差异显著，P＜0.05。见表1。

表1 两种检验方法对乙肝病毒的检验阳性率对比（n，%）

2.2 对比不同HBV-M 表现模式下HBV-DNA的分布

HBV-M 表现模式的大三阳，其HBV-DNA 水平显著高于其他，4 种模式下的HBV-DNA 水平，比较差异有统计学意义，P＜0.05，见表2。

表2 对比不同HBV-M 表现模式下HBV-DNA 的分布（）

表2 对比不同HBV-M 表现模式下HBV-DNA 的分布（）

注：与HBsAg、HbcAb、HbeAg 均为“+”大三阳模式进行对比统计学差异显著，＊P＜0.05。

HBV-M 表现模式 总例数 HBV-DNA 水平（copies/mL）HBsAg、HbcAb、HbeAg 均为“+” 103 5.63×106±2.12×105 HBsAg、HbeAb、HbcAb 均为“+” 51 3.35×104±1.68×103★HBsAg 和HbeAb 均为“+” 113 4.19×105±1.32×104★HbsAb、HbeAb、HbcAb 均为“+” 12 4.67×103±1.34×102★HbeAg、HBsAg 均为“+” 21 3.68×106±1.56×105★

3 讨论

乙型肝炎是HBV 感染导致的一种传染性肝脏疾病，如果没有及时进行诊治，研究显示[5]，有25%左右的患者病情会发展为肝炎，其中占据三分之一的患者会进展为肝硬化，严重危及患者的生活质量及生命安全，是目前导致人们死亡的第七位疾病。对于该疾病治疗的关键在于掌握HBV 病毒复制的情况及HBV 病毒感染的强弱程度[6]。酶联免疫吸附法属于一种免疫学检测技术，可以准确反应病毒在入侵机体后免疫应答的情况，可用于早期乙肝检出，但是该方法对于病毒的复制，感染情况及危险性等无法准确判断。因此，其敏感性比较差，具有一定的误诊和漏诊率，也可能会延误患者早期进行治疗。研究显示[7]，实时荧光定量RT-PCR 法能够在用于准确评估患者不同模式下HBV-DNA 含量的情况，进而为患者是否出现乙肝感染提供可靠的依据。RT-PCR法属于病原学检测手段，具有血清学标志物没有的优势，例如可重复操作，特异性、敏感性及灵敏度高等，能够自动检出，且通过累及荧光信号做到实时监测，能够更加直面观察患者乙肝病毒DNA 含量分布的情况，对临床判断乙肝病毒感染、病毒复制的情况及传染性具有有利的价值。研究指出[8]，即使患者表现出微弱的HBV-DNA 情况也能够将其检出，因此大大降低了误诊及漏诊的情况。

本研究结果显示，HBV-M 表现模式为大三阳的情况下，阳性率为96.12%，HBV-M 表现模式为第五种模式的情况下，其阳性率为80.95%，与其他3种模式的阳性率，P＜0.05。HBV-M 表现模式下第一种的大三阳模式下其HBV-DNA 水平显著高于其他4 种模式下的HBV-DNA 水平，P＜0.05。结果说明，实时荧光定量-PCR 检验血液标本中的乙肝病毒更加具有敏感性及可靠性，且可以真实反应患者机体内对HBV 感染及复制的状态。

综上所述，实时荧光定量-PCR 检验血液标本中的乙肝病毒可提高阳性率，利于临床上评估病毒传染性及感染复制状态，对临床上早期诊疗乙肝及传染性的判断，监测预后等具有重要的价值。