血痕试纸在血痕预试验中的效能评价

巫家盛 赵荣昌 黎增强

（广州市公安局荔湾区分局刑事警察大队，广东 广州510140）

血迹是凶杀、伤害等重大刑事案件中最常见的生物物证，通过血痕预试验可以从大量的可疑斑迹中初步筛选出可能是血的物证。在现场勘查环境中，由于条件所限，操作相对简便的血痕预试验较人血痕确证试验更适合可疑血斑的快速初筛，为案情分析和物证提取提供参考意见。好的血痕预试验试剂应该具有灵敏度高、特异性强、操作简单、使用安全、结果可重现、且不损害检材中的DNA成分等特点。［1］

目前血痕预实验常见的方法有联苯胺试验、匹拉米洞实验、鲁米诺等。其中联苯胺试验是法医物证检验中血痕预试验的标准方法［2］，匹拉米洞是临床上用于隐血筛选实验的常规方法之一［3］。鲁米诺实验的试剂具有强氧化性，实验具有操作复杂、易爆炸等缺点，需要暗室观察，使用受限。血痕试纸是一种以联苯胺衍生物为主要成分的血痕预试验试剂条，相比以上三种实验，使用方法更为简便快捷。本文拟对血痕试纸的性能进行评价，包括实验室环境和模拟现场使用环境的灵敏度、特异性，为现场勘查与物证检验选择合适的血痕预试验试剂提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及样本

血痕试纸（长春博坤生物科技有限公司），四甲基联苯胺（北京布兰特警用装备有限公司），匹拉米洞试剂盒（珠海贝索生物技术有限公司），用于参考对照的FOB金标试剂条（用于实验室检验，为血痕确证检验方法）（长春博坤生物科技有限公司），已知血红蛋白浓度（130g/L）的健康人的全血样本。

1.2 实验室环境的灵敏度检测

用无菌蒸馏水，将全血样本分别稀释成20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000、20000、50000、100000、200000、500000 倍。取上述各稀释液10µL分别加入凹玻板凹槽内或试纸条中。四甲基联苯胺组依次滴入冰醋酸、四甲基联苯胺无水乙醇饱和液、3%过氧化氢溶液，立即出现翠蓝色为阳性，1min 内完成判读。匹拉米洞试剂组依次滴入A、B液，产生深紫蓝色至紫红色为阳性，2min 内完成判读。血痕试纸组立即出现翠蓝色为阳性，1min 内完成判读。FOB 金标试剂条，加样5min 后进行判读，10min内完成判读。

1.3 模拟现场使用环境的灵敏度检测

用生理盐水，将全血样本稀释成10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000 倍，取各浓度稀释液200µL分别加至玻片（非渗透性载体）、纱布（渗透性载体）中，晾干。使用定性滤纸折角、对折的血痕试纸在表面刮蹭5次，按照四甲基联苯胺、匹拉米洞操作方法，血痕试纸直接在试纸上滴入1滴纯水，分别进行检测。

1.4 特异性实验

收集现场常见标本：鸡血痕、鱼血痕、铁锈、酱油、陈醋、漂白水、红酒、火龙果汁、含碘消毒液、高锰酸钾、靛蓝染料、红色染料，分别用三种预试验试剂与FOB 金标试剂条进行检测。

2 结果

2.1 实验室环境的灵敏度比较

血痕试纸、四甲基联苯胺、匹拉米洞均能对稀释10 万倍血液产生阳性反应。当血液稀释大于2 万倍，匹拉米洞的显色较浅，判读为弱阳性；当血液稀释大于10 万倍，血痕试纸和四甲基联苯胺的显色较浅，判读为弱阳性。FOB金标试剂条能对稀释50 万倍血液产生阳性反应，但稀释100 倍以下的血液，由于血红蛋白浓度过高产生钩状效应，导致假阴性的结果（见表1）。

表1 实验室环境的灵敏度比较

2.2 模拟现场使用环境的灵敏度比较

匹拉米洞对纱布上血斑的检测下限是稀释100 倍，对玻片上血斑是稀释1000 倍。四甲基联苯胺对纱布上血斑的检测下限是稀释200 倍，对玻片上血斑是稀释2000 倍。血痕试纸对纱布上血斑的检测下限是稀释500 倍，对玻片上血斑是稀释5000倍（见表2、表3）。

表2 模拟现场使用环境的灵敏度比较（渗透性载体）

表3 模拟现场使用环境的灵敏度比较（非渗透性载体）

2.3 特异性实验（见表4）

表4 特异性实验结果

3 讨论

稀释血液的灵敏度试验结果显示，基于联苯胺或匹拉米洞的三种血痕预试验试剂，均能对稀释10 万倍的血液产生阳性反应，灵敏度高，略低于FOB 金标试剂条，当血液稀释2 万倍至10 万倍时，血痕试纸和四甲基联苯胺的显色较匹拉米洞更明显，更容易判读，与王清山［4］报道的联苯胺、匹拉米洞对血红蛋白可检测的最低浓度基本一致。

纱布、玻片上稀释血斑的试验结果显示，血痕试纸、四甲基联苯胺、匹拉米洞均能对纱布上稀释100 倍以下的血斑、玻片上稀释1000倍以下的血斑的刮蹭物产生阳性反应。玻片载体的检测下限高于纱布载体，分析原因是非渗透性载体上的微量血斑比渗透性载体更容易刮蹭下来。血痕试纸的检测下限高于四甲基联苯胺和匹拉米洞，对纱布上稀释200 倍、玻片上稀释2000 倍的血斑的刮蹭物产生阳性反应，分析原因是对折试纸的接触面更大，比定性滤纸折角的刮蹭效果更好。

特异性检测结果显示，三种基于化学法的血痕预试验试剂的特异性与FOB 金标试剂条相比较差，动物血、强氧化性［5］的物质都可能使其产生假阳性，血痕试纸、匹拉米洞在当前测试标本的表现略好于四甲基联苯胺。值得注意的是，对含碘消毒液进行特异性检测时，四甲基联苯胺显色为深蓝色，血痕试纸显色为蓝紫色，匹拉米洞试剂盒显色为浅紫色，与阳性对照颜色接近，有误判的风险。

在凶杀、伤害等案件的现场勘查和物证检验中，通过血痕预试验快速识别微量血痕，对大量疑似血斑进行初步筛选，能为现场的分析判断、物证的发现提取提供参考。血痕试纸在实验室环境灵敏度、模拟现场使用环境灵敏度、特异性三个评价实验的表现稳定，灵敏度持平或略高于四甲基联苯胺和匹拉米洞，特异性基本一致，其性能可满足血痕预试验的要求。在使用便捷性上，血痕试纸优点明显：（1）与四甲基联苯胺和匹拉米洞实验分别要加入3次和2次试剂相比，血痕试纸只需刮蹭可疑血斑边缘后滴水或直接滴入血痕浸出液即可显色，操作大大简化，便于现场进行大量疑似血斑的初筛；（2）血痕试纸单独封装，保质期长达2 年，没有挥发性试剂的保存问题，无需临时配制，可以直接放置物证工具箱中，携带更为方便。因此，可以将血痕试纸应用于现场勘查与物证检验，作为联苯胺血痕预试验的替代品。