脂肪非典型钙黏蛋白 4及 O型蛋白酪氨酸磷酸酶受体与胃癌预后的关系研究

刘真真，潘妍，胡辉歌

1西安市人民医院（西安市第四医院）胃肠内镜诊疗中心，西安 710000

2空军军医大学第一附属医院消化内科，西安 710032

3西安国际医学中心医院消化内科，西安 710000

近年来随着医学技术的发展，胃癌发病率呈逐渐下降趋势，但其病死率仍居高不下[1]。有研究发现，胃癌的发生与遗传学、表观遗传学的改变密切相关，而多种原癌基因激活、抑癌基因失活也与胃癌发生有直接的联系[2]。脂肪非典型钙黏蛋白4（FAT atypical cadherin 4，FAT4）是钙黏蛋白中的一员，属于重要的抑癌基因。有研究发现，FAT4在乳腺癌中为重要的抑癌基因，通过检测发现复发性胃癌患者外显子测序中，FAT4与术后复发转移密切相关，FAT4表达下调可促进肿瘤细胞侵袭、转移[3]。O型蛋白酪氨酸磷酸酶受体（protein tyrosine phosphatase receptor type O，PTPRO）属于候选抑癌基因，与胃癌预后可能存在一定的联系[4]。本研究通过对比分析FAT4及PTPRO在胃癌患者中的表达情况，了解其与胃癌患者预后的关系，为临床诊疗胃癌提供新思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2015年1月至2021年1月西安市第四医院收治的胃癌患者的病历资料。纳入标准：①均经手术后病理检查证实为胃癌；②临床资料、病理资料完整；③年龄≥18岁。排除标准：①非首次治疗；②合并其他部位肿瘤；③随访资料缺失。根据纳入、排除标准，共纳入112例胃癌患者，其中男64例，女48例；年龄45～78岁，平均（56.61±3.24）岁。选择距肿瘤≥5 cm处无癌变正常胃组织作为对照。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 FAT 4及PTPRO检测方法将标本使用常规石蜡包埋，行4 μm厚连续切片，癌旁组织进行相同的处理，FAT4及PTPRO均使用免疫组化检测。FAT4蛋白表达检测试剂为美国No-vus Biologicals公司提供的兔多克隆FAT4抗体（1∶150稀释）；PTPRO蛋白表达检测试剂为Abcam公司提供的兔抗人PTPRO多克隆抗体（1∶500稀释）；阴性对照采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替，已知阳性切片作为阳性对照。结果判定：FAT4以细胞质为黄色或黄棕色为阳性；PTPRO以细胞质为棕褐色为阳性。评价标准：阳性细胞数＜10%为1分，10%～39%为2分，40%～75%为3分，≥76%为4分；1分为阴性，＞1分为阳性。

1.2.2 收集资料收集患者临床资料，包括年龄、性别、TNM分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、分化程度（低分化、中～高分化）、分型（肠型、弥漫型）、淋巴结转移、肿瘤大小（≤5 cm、＞5 cm）等。

1.2.3 随访在患者治疗后进行为期6个月的随访以了解患者预后情况，根据有无复发/转移分为预后不良组与预后良好组。

1.3 观察指标

对比不同组织中FAT4及PTPRO表达情况，分析影响胃癌预后的危险因素。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验，影响因素分析采用多元Logistic回归分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FAT 4及PTPRO表达情况的比较

正常胃组织中FAT4及PTPRO阳性表达率均高于胃癌组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 胃癌组织与正常胃组织中FAT 4及PTPRO表达情况的比较[ n（%）]

2.2 胃癌预后影响因素的单因素分析

112例患者中，预后良好91例，预后不良21例。预后良好与预后不良患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况、FAT4表达情况、PTPRO表达情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；预后良好与预后不良患者年龄、性别、分型、肿瘤大小比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 胃癌预后影响因素的单因素分析

2.3 胃癌预后影响因素的多因素分析

将单因素分析中差异有统计学意义的指标作为自变量，胃癌预后作为因变量，经非条件多因素Logistic回归模型分析显示，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化、淋巴结转移、FAT4阴性、PTPRO阴性均是胃癌患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。（表3）

表3 胃癌预后影响因素的多因素分析

3 讨论

FAT钙黏蛋白家族由32～34次的重复钙黏蛋白组成，最早在果蝇中被发现[5]。FAT钙黏蛋白家族中的各成员虽有着相似的细胞外结构，但其细胞内结构有所不同，从而形成了每一个FAT钙黏蛋白家族的独特功能。FAT1是目前临床研究最多的FAT钙黏蛋白家族成员，在细胞黏附、神经元功能、细胞迁移中均有重要的团控作用。在以往研究中也发现，FAT1在多种疾病及多数恶性肿瘤中表达明显下降[6]。但FAT1在恶性肿瘤中并不完全一致，在乳腺癌、口腔癌中其表达下调，但在肺癌、小肠癌、白血病中其表达上调，因此FAT1在不同的研究中可表现出抑癌基因和致癌基因的功能[7]。FAT4则是与FAT1序列最为相似的成员，在目前多数研究中均显示，FAT4与多种恶性肿瘤之间存在明显相关性。有研究发现，FAT4表达下调对内皮细胞的运动及转移有促进作用，提示FAT4在肿瘤细胞的迁移中具有一定的作用[8]。此外，也有研究显示，FAT4属于细胞黏附性蛋白，可影响细胞的迁徙运动。在魏东等[9]研究中，发现FAT4为影响胃癌复发、转移的重要抑癌基因，其低表达可促进胃癌转移。在本研究中也发现，FAT4在正常胃组织中阳性表达率高于胃癌组织，与上述研究结果相符。

酪氨酸磷酸化对细胞的内通讯、转录、存活、分化等有重要的作用，而此种变化与酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸酶之间的平衡密切相关[10]。PTPRO与酪氨酸磷酸酶作用相反，PTPRO具有抑癌因子的大部分特征[11]。在以往研究中通过建立肝细胞肝癌大鼠模型发现，在其癌前病变、肿瘤组织中PTPRO启动因子出现甲基化改变，在肝癌细胞中也出现甲基化，但在正常的大鼠肝脏中并未出现甲基化[12]。PTPRO在大鼠原发性肝癌中表达明显下调，通过DNA甲基化酶抑制剂脱氧5-氮杂胞苷使细胞中PTPRO去甲基化后，PTPRO表达上调，肿瘤也随之缩小[13]。此外，在乳腺癌、白血病、肺癌等研究中，与正常组织相比，PTPRO在肿瘤组织中表达被抑制[14]。有研究通过使用基因表达谱芯片对胃腺癌患者相关基因进行筛查，胃腺癌与正常胃黏膜间多种基因表达存在差异，表达下调的基因中PTPRO可抑制细胞增殖[15]。在本研究中通过免疫组化法发现PTPRO在正常胃组织中阳性表达率明显高于胃癌组织。且通过影响因素分析发现，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化、淋巴结转移、FAT4阴性、PTPRO阴性均为影响胃癌患者预后的危险因素，与以往研究结果相符[16]，提示FAT4、PTPRO下调可能预示着患者预后不良，两者均可发挥抑制肿瘤的作用。

综上所述，FAT4、PTPRO在胃癌组织中表达下调，与预后密切相关。在临床中检测胃癌患者FAT4、PTPRO表达可为患者预后评估及术后治疗提供依据。