锌指蛋白44和雄激素受体对乳腺癌的诊断价值△

张玉文，王丹，梁运霞，李晓旭

商丘市第一人民医院1病理科，2乳腺外科，河南 商丘 476000

乳腺癌是临床中常见的恶性肿瘤，严重威胁女性的生命健康，其病因及发病机制尚不清楚，早期诊断并采取综合治疗是改善患者预后最有效的方式[1-2]。临床中常采用超声引导下穿刺活检对乳腺癌进行诊断，虽然可以有效提高乳腺癌的检出率，但乳腺良性病变与恶性病变在超声影像学特征上可能存在一定的重叠，此外由于部分病变组织形态多样，组织结构较为复杂，也在一定程度上增加了诊断的难度，因此漏诊率和误诊率仍较高，亟需寻找一种更加准确有效的方法对乳腺癌进行早期诊断。锌指蛋白（zinc finger protein，ZFP）是一类具有手指状结构域的转录因子[3-4]，锌指蛋白44（zinc finger protein 44，ZFP44）是其中一员，可通过与靶分子DNA、RNA等序列或其他ZFP蛋白结合，在转录、翻译水平上调控基因表达。雄激素受体（androgen receptor，AR）是核受体家族中的一员，广泛分布于人体的器官和组织中，具有介导雄激素信号通路的作用。相关研究报道，AR与其配体雄激素结合后，其构象发生变化，可导致热休克蛋白解离，然后被转移到细胞核中，进而促进靶基因的转录[5-6]。目前ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值尚不明确。本研究探讨了ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年7月至2021年6月商丘市第一人民医院收治的乳腺癌患者。纳入标准：①经术后组织病理学检查确诊为乳腺癌；②女性；③初次手术，术前未接受放疗、新辅助化疗等治疗；④临床资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②妊娠期或哺乳期；③合并心、肝、肾等重要脏器功能障碍；④合并免疫缺陷病、传染性疾病、血液系统疾病、全身系统性疾病；⑤合并认知功能障碍或精神疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入92例乳腺癌患者，作为观察组。另选取同期收治的60例乳腺良性病变患者作为对照组。观察组患者的年龄为25～72岁，平均（43.86±9.27）岁；病理类型：浸润性导管癌65例，浸润性小叶癌18例，导管原位癌9例。对照组患者的年龄为28～79岁，平均（45.17±9.27）岁；病理类型：乳腺纤维瘤31例，浆细胞性乳腺炎4例，乳腺导管内乳头状瘤17例，乳腺增生8例。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化染色检测ZFP44、AR的表达情况及结果判断

收集两组患者的乳腺组织，制作标本，石蜡包埋后进行切片，常规脱蜡，水化，采用3%H2O2室温孵育8 min，消除内源性过氧化物酶；磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）洗涤3次，每次5 min，10%羊血清封闭25 min，倾倒液体；加入一抗，4℃孵育过夜；PBS洗涤3次，每次5 min；加入二抗，37℃孵育35 min；PBS洗涤3次，每次5 min；滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃孵育35 min；PBS洗涤3次，每次5 min；滴加二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色液，显色10 min，苏木素复染，水洗；脱水，中性树胶封片。染色结果判断[7]：ZFP44位于细胞核，阳性表达呈深棕黄色，每个样本在高倍镜下计数500个细胞，依据阳性细胞占比进行判断，阳性细胞占比＜10%为阴性（-），阳性细胞占比10%～29%为弱阳性（+），阳性细胞占比30%～59%为中等阳性（++），阳性细胞占比≥60%为强阳性（+++）；弱阳性（+）、中等阳性（++）及强阳性（+++）均记为ZFP44阳性表达。AR阳性：细胞核呈棕褐色或棕黄色。

1.3 ZFP44和AR对乳腺癌的诊断分析

ZFP44和AR免疫组化染色图片均由两名高年资肿瘤病理学专家采用双盲法进行判断，意见不同时，增加第3个高年资阅片人，通过讨论达成一致意见。ZFP44表达阴性诊断为乳腺癌，AR表达阳性诊断为乳腺癌。以病理诊断结果为金标准，计算ZFP44和AR诊断乳腺癌的灵敏度、特异度和准确度。灵敏度=真阳性例数（/真阳性+假阴性）例数×100%，特异度=真阴性例数（/真阴性+假阳性）例数×100%，准确度=（真阳性+真阴性）例数/总例数×100%

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ZFP44和AR表达情况的比较

观察组患者的ZFP44阴性表达率和AR阳性表达率均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1、图1）

表1 两组患者ZFP44和AR表达情况的比较[ n（%）]

图1 乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中ZFP44和AR的表达情况（免疫组化染色，×200）

2.2 不同临床特征乳腺癌患者ZFP44和AR表达情况的比较

不同年龄、病理类型、分化程度、神经侵犯情况乳腺癌患者的ZFP44阴性表达率和AR阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同脉管侵犯情况乳腺癌患者的AR阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有脉管侵犯、有淋巴结转移乳腺癌患者的ZFP44阴性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无脉管侵犯、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=5.088、6.862、5.013，P＜0.05）；TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌患者的AR阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=5.919、5.192，P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征乳腺癌患者的ZFP44和AR表达情况（ n=92）

2.3 ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值

ZFP44诊断乳腺癌的灵敏度、特异度、准确度分别为 88.04%（81/92）、75.00%（45/60）、82.89%（126/152），AR诊断乳腺癌的灵敏度、特异度、准确度分别为 78.26%（72/92）、81.67%（49/60）、79.61%（121/152）。（表3）

表3 ZFP44和AR对乳腺癌的诊断结果与病理诊断结果的对照

3 讨论

近年来乳腺癌的发病率逐年升高，已居女性恶性肿瘤发病率的首位。乳腺癌的早期诊断和治疗有利于提高患者生存率及生活质量[8]。目前临床中多采用乳房超声等影像学检查对乳腺癌进行诊断，虽然可在一定程度上提高乳腺癌的检出率，但检出率仍有待提高[9-10]。研究表明，ZFP44和AR与乳腺癌的发生发展密切相关[11-14]。目前罕见关于ZFP44和AR对乳腺癌诊断价值的报道，探讨ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值具有重要的临床意义。

本研究结果显示，观察组患者的ZFP44阴性表达率和AR阳性表达率均明显高于对照组（P＜0.01），提示与乳腺良性病变患者相比，乳腺癌患者的ZFP44阴性表达率和AR阳性表达率均较高。ZFP44分布广泛，其家族蛋白参与人类细胞分化、胚胎发育等，其表达、染色体移位、基因突变与恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关[15]。AR是一种固醇类激素受体，其在乳腺癌中的作用较为复杂，在无配体时，可与热休克蛋白共存于细胞核中，雄激素通过细胞膜扩散后，可与AR结合，引发构象改变，导致热休克蛋白解离、激活，形成二聚体，二聚体移位至细胞核，与靶基因的雄激素反应原件结合，引发DNA转录，进而调节肿瘤细胞的分化、增殖、凋亡及血管生成。研究报道，AR在乳腺癌的发生发展中发挥着重要作用[16-18]。本研究结果显示，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有脉管侵犯、有淋巴结转移乳腺癌患者的ZFP44阴性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无脉管侵犯、无淋巴结转移的患者，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌患者的AR阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。提示ZFP44和AR表达与乳腺癌患者的临床特征具有一定的关系。本研究结果还显示，ZFP44诊断乳腺癌的灵敏度、特异度、准确度分别为88.04%、75.00%、82.89%，AR诊断乳腺癌的灵敏度、特异度、准确度分别为78.26%、81.67%、79.61%，提示ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值均较高，可作为临床诊断乳腺癌的重要参考指标。ZFP是人类基因组中最大的转录因子家族，其中锌指基序的不同组合可使锌指转录因子在机体中发挥不同的功能，参与肿瘤细胞的增殖、分化等，其表达与恶性肿瘤的发展及预后紧密相关。李墨等[19]研究表明，ZFP44在乳腺癌中可能作为一种抑癌基因，参与调控雌激素信号通路，可通过下调蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又称AKT）/糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK3β）信号通路，抑制肿瘤细胞的生长、侵袭，进而发挥抑癌基因的作用。AR是一种反式转录调节蛋白，具有配体依赖性，研究表明，AR可通过刺激肿瘤细胞增殖，发挥致癌作用；AR阳性的乳腺癌多携带磷脂酰肌醇-4，5二磷酸3-激酶催化亚基α（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA）突变基因，其与肿瘤细胞的异常增殖密切相关，且磷脂酰肌醇-3-羟激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/AKT通路中的AKT磷酸化后可诱导AR发生磷酸化，使AR诱导的细胞凋亡作用减弱或消失，导致肿瘤恶变；雄激素通过向雌二醇转化或与AR结合也可在一定程度上影响乳腺癌的发展[20]。

综上所述，与乳腺良性病变患者相比，乳腺癌患者的ZFP44阴性表达率和AR阳性表达率均较高，且ZFP44和AR对乳腺癌的诊断价值均较高，可作为临床诊断乳腺癌的重要参考指标。