小蓟内生真菌Chaetomium Bostrychodes次级代谢产物及其生物活性研究

吴 迪，徐奥然，牟青林，鲜鹏杰，柳树直，黄泽雕，杨 健，王文静*，杨小龙*

(1.中南民族大学 药学院 湖北省少数民族医学现代化工程技术研究中心，湖北 武汉 430074；2.重庆大学 药学院，重庆 401331；3.中国中医科学院 国家中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700)

真菌次级代谢物具有结构新颖、活性显著等特征，是药物先导化合物的重要来源[1]。植物内生真菌[2]是指生活在健康植物组织中，与宿主植物互利共生的一类特殊真菌[3]。因其生活环境的特殊性而具有独特的代谢体系，可产生结构新颖，活性优良的次级代谢产物[4]。研究表明，植物内生真菌能产生萜类、生物碱、聚酮、酯类、醌类、酚类等类型多样的天然产物，且部分化合物具有显著抗菌活性[5-12]。因此，从植物内生真菌中寻找新型的抗菌药物先导化合物研究前景广阔。

毛壳属(Chaetomium)真菌具有丰富的次生代谢产物，至今已从该属真菌中分离得到300多个化合物[13-14]，是微生物天然产物研究的热点之一。旋丝毛壳(Chaetomiumbostrychodes)为毛壳属的分支，是一种植物病源真菌，最早由Zopf分类并鉴定[15]。研究表明，旋丝毛壳对病原菌有较强的拮抗作用[16]。目前，关于其次级代谢产物的研究还未见报道。因此，本研究选择一株小蓟内生旋丝毛壳菌进行扩大培养发酵，并对其代谢产物进行系统分离，以期从中分离得到具有抗菌活性的先导化合物。最终从该菌株大米发酵产物中共分离得到9个单体化合物，并进行抗菌活性测试。对该菌次级代谢产物化学结构及生物活性的研究，可为该种属真菌的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 菌株来源 该菌株分离自2017年采自宁夏银川的小蓟叶片，编号为XL-1371，经ITS序列鉴定为旋丝毛壳菌(C.bostrychodes)，GenBank编号为MW960270，现保存于中南民族大学药学院民族药与药用菌研究组。

1.1.2 培养基 PDA培养基(每升水中含0.5% 马铃薯浸粉，1.5% 葡萄糖，1% 蛋白胨，0.5% 氯化钠)，MEB培养基(每升水中含2% 的麦芽浸粉，2% 的蔗糖，1% 的蛋白胨)，LB培养基(每升水中包含1% 胰蛋白胨，0.5% 酵母提取物，10% NaCl)。

1.1.3 植物病源真菌和临床耐药细菌 8株植物病原真菌(油菜菌核菌Sclerotiniasclerotiorum，水稻纹枯菌Rhizoctoniasolani，玉米小斑菌Helminthosporiummaydis，花生黑斑菌Cercosporapersonata，番茄灰霉病菌BotrytiscinereaPers，小麦赤霉菌Gibberellasaubinetii，黄瓜褐斑菌Corynesporacassiicola，烟草赤星菌Alternarialongipes)，8株临床耐药细菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Methicinllin-resistantStaphylococcusaureus，多耐药性表皮葡萄球菌Multidrug-resistantStaphylococcusepidermidis，多耐药性屎肠球菌Multidrug-resistantEnterococcusfaecium，多耐药性粪肠球菌Multidrug-resistantEnterococcusfaecalis，耐碳青霉烯铜绿假单胞菌Carbapenems-resistantPseudomonasaeruginosa，耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌Carbapenems-resistantAcinetobacterbaumannii，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌Carbapenems-resistantKlebsiellapneumoniae，耐碳青霉烯大肠埃希菌Carbapenems-resistantEscherichiacoli)。

1.1.4 仪器和试剂 10%次氯酸钠、75%乙醇、甘油、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等有机试剂(分析纯，天津富宇精细化工有限公司)；GF254薄层色谱硅胶板，柱层析硅胶(80～100目，100～200目)(安徽良臣硅源材料有限公司)；葡聚糖凝胶LH-20(上海优宁维生物科技股份有限公司)；BHC-1300IIA2型超净工作台(苏州市金净净化设备科技有限公司)；SPK-250BIII型生化培养箱购自上海天呈科技有限公司；LDZM-80KCS型压力蒸汽灭菌锅购自森塔实验室科技服务有限公司；EYELA旋转蒸发仪购自上海爱朗仪器有限公司；1260型高效液相色谱仪购自美国Agilent公司；恒温水浴锅购自上海爱朗仪器有限公司；C-18液相柱购自Waters 公司(4.6 mm×250 mm)；Bruker Avance Ⅲ 600 MHz 购自瑞士Bruker 公司。Autopol Ⅳ 旋光仪购自美国鲁道夫公司。Q ExactiveTMObitrap 高分辨质谱仪购自美国赛默飞公司。

1.2 方法

1.2.1 内生真菌的分离纯化 植物内生真菌的分离纯化采用组织切块法，首先用自来水冲掉小蓟叶片受损的部位，然后用75%的乙醇浸泡3 min，无菌水冲洗3次，再用10%次氯酸钠溶液浸泡3 min，无菌水冲洗3次，放置于超净工作台中晾干。用无菌手术刀将叶片部分切成0.5 cm×0.5 cm的小块，用无菌镊子将下表皮揭开，正面朝上置于含有0.12 g/L氯霉素的PDA平板上，每个平板均匀放置3～4块，平板密封后置于28 ℃恒温培养箱。当叶片块边缘有肉眼可见的菌落后，采用菌丝顶端纯化法，用接种针挑取少许单一菌落边缘的菌丝，按照平板划线法，将其转接到含氯霉素的PDA平板，封口，倒置于28 ℃恒温箱中培养。待长出菌落或菌丝后重复上述操作3～4次，定时观察并记录菌落生长状态，经多次纯化后，得到单一菌落。

1.2.2 菌种鉴定 单一菌种经ITS序列鉴定，ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)为正向引物，ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)为反向引物。

1.2.3 种子液制备 2 000 mL PDB液体培养基分装入7个1 000 mL锥形瓶中，每瓶约300 mL，封口膜封住，121 ℃灭菌30 min。灭完菌后放至常温，在超净工作台中将于PDA平板活化好的菌种切成小块，均匀接入锥形瓶中，于136 rpm，28 ℃的条件下摇床培养4 d，待长出明显菌球即种子液制备完毕。

1.2.4 大规模发酵 发酵培养基为大米+MEB液体培养基。每个锥形瓶(1 000 mL)中加入250 g大米和250 mL MEB培养基，封口膜封住，121 ℃灭菌30 min。灭完菌后放至常温，在超净工作台中，加入10 mL种子液，混合均匀，28 ℃静置中培养30 d，共发酵200瓶。

1.2.5 发酵产物提取 发酵完成后，每个锥形瓶中加入300 mL甲醇，浸泡6 h，将溶剂和发酵物转移出来，甲醇提取3次，减压浓缩后得到甲醇提取物，再加水进行分散，并用等体积乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩，最终获得60 g粗浸膏。

1.2.6 次级代谢产物分离 首先选择硅胶色谱柱进行分离，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(比例：100∶0-50∶1-20∶1-10∶1-5∶1-2∶1-1∶1)，分离得到6个组分(编号为A-F)。B组分再次采用硅胶柱进行分离，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(比例为60∶1-40∶1-20∶1-10∶1-0∶1),得到2个组分(编号为Fr.B.1和Fr.B.2)，Fr.B.1经过葡聚糖凝胶柱(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇=1∶1)得到5个组分(编号为Fr.B.1.1-Fr.B.1.5)，Fr.B.1.2经HPLC(MeOH-H2O，85∶15，v/v)纯化得到化合物3 (tR= 22.2 min) (2 mg)，Fr.B.1.3经HPLC(MeOH-H2O，20%→100%，30 min，v/v)纯化得到化合物6 (tR=18.8 min) (4.5 mg)。C组分经过硅胶柱层析，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(比例为30∶1-20∶1-10∶1-0∶1)，得到4个组分(编号为Fr.C.1-Fr.C.4)，Fr.C.2经过葡聚糖凝胶色谱柱(洗脱剂为甲醇)得到化合物7 (10 mg)。Fr.C.3经HPLC(MeOH-H2O，20→100，30 min，v/v)纯化得到4 (tR= 11.1 min)(7 mg)和5 (tR=7.39 min)(5.5 mg)。D组分采用硅胶柱层析，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(洗脱比例为60∶1-40∶1-20∶1-10∶1-0∶1)，得到7个组分(编号为Fr.D.1-Fr.D.7)，Fr.D.2经过葡聚糖凝胶色谱柱(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇=1∶1)，得到4个组分Fr.D.2.1-Fr.D.2.4，Fr.D.2.3经过HPLC(MeOH-H2O，93∶7，v/v)纯化得到化合物2 (tR=24.8 min)(7 mg)和1(1.7 mg)(tR=27.1 min)。Fr.D.3经过HPLC(MeOH-H2O，70∶30，v/v)纯化得到化合物8(tR=18.6 min)(6 mg)，Fr.D.6经过葡聚糖凝胶色谱柱(洗脱剂为甲醇)，得到化合物9(4 mg)。

1.2.7 活性检测 (1)单体化合物抗细菌活性评价：采用二倍稀释法评价单体化合物的抗细菌活性。具体步骤如下：配制抗细菌活性所需的LB培养基并分装至试管中，每只试管装入15 mL培养基，高压蒸汽灭菌后晾凉备用。选取实验所需的8株临床耐药细菌，分别接种至已灭菌处理的LB培养基中，37 ℃，160 r/min振摇培养12 h，培养液浑浊且不沉淀，培养完成。将被测单体化合物和阳性对照(环丙沙星)分别用DMSO配置成浓度为10 mg/mL的样品溶液。在超净工作台中取试管中培养好的细菌液体100μL，加入100 mL LB培养基中稀释1 000倍。在96孔板的第一排加入198μL稀释后的菌液，第二至八排中分别加入100μL稀释后的菌液。第一排孔中分别加入待测样品、空白(DMSO)、阴性对照、阳性对照2μL，移液枪抽吸混合均匀(此时第一排孔的样品与阳性对照的浓度均为100μg/mL)后吸取100μL混合液至第二排，将其混合均匀后吸取100μL混合液至第三排，后面几排操作同上，最后一排孔中吸出的混合液当废液打入废液缸中。使每排样品终浓度依次为100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.12μg/mL、1.56μg/mL、0.78μg/mL。将处理好的96孔板置于37 ℃的恒温培养箱中培养12 h，每隔2 h观察1次，待阴性对照组长满细菌，记录活性结果，将最后一排澄清的孔所对应的样品浓度定为该化合物的最小抑菌浓度，同时记录阳性对照的最小抑菌浓度。将观察完结果的96孔板及所用实验器材进行灭菌后处理。

(2)单体化合物抗真菌活性评价：采用二倍稀释法评价单体化合物的抗真菌活性。具体步骤如下：将需要测活性的单体化合物、阳性对照(酮康唑)用DMSO配置成浓度为10 mg/mL的样品。配制抗菌活性所需的PDB培养基，分装至锥形瓶中，每瓶装入100 mL培养基，高压蒸汽灭菌后晾凉，选取实验所需的8株植物病原真菌接种至PDB培养基中，28 ℃，160 r/min振摇培养2 d。在超净工作台中操作，取锥形瓶中培养好的真菌液1 mL加入100 mL PDB培养基中稀释100倍。在96孔板的第一排加入198稀释后的菌液，第二至八排中加入100μL稀释后的菌液。第一排孔中分别加入样品、空白、阴性对照、阳性对照2μL，移液枪抽吸混合均匀(此时第一排孔的样品与阳性对照的浓度均为100μg/mL)后吸取100μL混合液至第二排，将其混合均匀后吸取100μL混合液至第三排，后面几排操作同上，最后一排孔中吸出的混合液当废液打入废液缸中。使每排样品终浓度依次为100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.12μg/mL、1.56μg/mL、0.78μg/mL。将处理好的96孔板置于28 ℃的恒温培养箱中培养24 h，每隔4 h观察1次，待阴性对照组长满真菌记录活性结果，将最后一排澄清的孔所对应的样品浓度定为该化合物的最小抑菌浓度，同时记录下阳性对照的最小抑菌浓度。将观察完结果的96孔板及所用实验器材进行灭菌后处理。

2 结果与分析

采用大米+MEB培养基对C.bostrychodes进行大规模发酵培养，通过各种色谱柱和HPLC半制备等方法对其发酵产物进行分离纯化，得到9个单体化合物(图1)，经NMR和HRESIMS图谱分析结合文献数据分别鉴定为aurasperone A(1)、fonsecinone A (2)、granulolactone (3)、4-hydroxyphenylacetone (4)、latifolicinin C (5)、p-hydroxy-benzoic acid ethylester (6)、p-hydroxybenzoic acid (7)、phallac acid A (8)、1，2，4-benzenetriol (9)。

2.1 化合物1的结构鉴定

绿色固体，C32H26O10，HRESIMSm/z571.159 4 [M + H]+(calcd for C32H27O10，571.160 4)，1H NMR (600 MHz，CDCl3-d1)，δH：2.48(3H，s，2-CH3)，6.34 (1H，s，H-3)，12.84 (1H，s，5-OH)，7.05 (1H，s，H-6)，6.97 (1H，s，H-7)，3.78 (3H，s，8-OCH3)，3.42 (3H，s，10-OCH3)，2.12 (3H，s，2′-CH3)，6.01 (1H，s，H-3′)，15.25 (1H，s，5′-OH)，4.03 (3H，s，6′-OCH3)，6.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-7′)，3.61 (3H，s，8′-OCH3)，6.19 (1H，d，J=3.0 Hz，H-9′)；13C NMR (150 MHz，CDCl3-d1)，δC：167.7 (C-2)，20.6 (C-2-CH3)，110.7 (C-3)，182.9 (C-4)，109.4 (C-4a)，156.7(C-5)，106.0 (C-6)，140.8 (C-6a)，101.6 (C-7)，160.0 (C-8)，56.0 (C-8-OCH3)，117.1 (C-9)，156.9 (C-10)，108.0 (C-10a)，155.1 (C-10b)，166.9 (C-2′)，20.7 (C-2′-CH3)，107.4 (C-3′)，184.6 (C-4′)，104.2 (C-4′a)，162.8 (C-5′)，108.6 (C-5′a)，161.1 (C-6′)，56.2 (C-6′-OCH3)，97.0 (C-7′)，161.6 (C-8′)，55.2 (C-8′-OCH3)，96.0 (C-9′)，140.6 (C-9′a)，105.0 (C-10′)，150.8 (C-10′a)。对比文献[17]结构确定为aurasperone A。

2.2 化合物2的结构鉴定

绿色固体，C32H26O10，HRESIMSm/z571.159 3 [M + H]+(calcd for C32H27O10，571.160 4)，1H NMR(600 MHz，CDCl3-d1)，δH：2.41 (3H，s，2-CH3)，6.05 (1H，s，H-3)，14.83 (1H，s，5-OH)，3.46 (3H，s，6-OCH3)，3.78 (3H，s，8-OCH3)，6.97 (1H，s，H-9)，7.15 (1H，s，H-10)，2.12 (3H，s，2′-CH3)，5.98 (1H，s，H-3′)，15.25(1H，s，5′-OH)，4.02 (3H，s，6′-OCH3)，6.41 (1H，d，J=2.3 Hz，H-7′)，3.62 (3H，s，8′-OCH3)，6.21 (1H，d，J=2.3 Hz，H-9′)；13C NMR (150 MHz，CDCl3-d1)，δC：167.8 (C-2)，21.0 (C-2-CH3)，107.6 (C-3)，184.6 (C-4)，104.9 (C-4a)，162.1 (C-5)，111.6 (C-5a)，158.7 (C-6)，62.2 (C-6-OCH3)，117.8 (C-7)，160.3 (C-8)，56.1 (C-8-OCH3)，101.5 (C-9)，140.9 (C-9a)，101.4 (C-10)，153.5 (C-10a)，167.8 (C-2′)，20.9 (C-2′-CH3)，107.4 (C-3′)，184.8 (C-4′)，104.4 (C-4′a)，162.9 (C-5′)，108.7 (C-5′a)，161.2 (C-6′)，56.4 (C-6′-OCH3)，97.0 (C-7′)，161.6 (C-8′)，55.3 (C-8′-OCH3)，96.6 (C-9′)，140.7 (C-9′a)，105.3 (C-10′)，151.0 (C-10′a)。对比文献[17]结构确定为fonsecinone A。

2.3 化合物3的结构鉴定

白色无定型粉末，C15H18O2，HRESIMSm/z231.137 8 [M + H]+(calcd for C15H19O2，231.138 5)，1H NMR (600 MHz，CDCl3-d1)，δH：2.70 (2H，s，H-1)，4.49 (2H，t，J=6.0 Hz，H-4)，2.93 (2H，t，J=5.9 Hz，H-5)，7.77 (1H，s，H-8)，2.75 (2H，s，H-10)，1.14 (3H，s，H-12)，1.14 (3H，s，H-13)，2.17 (3H，s，H-15)；13C NMR (150 MHz，CDCl3-d1)，δC：47.2 (C-1)，149.3 (C-2)，130.7 (C-3)，66.7 (C-4)，25.1 (C-5)，136.1 (C-6)，123.5 (C-7)，124.1 (C-8)，142.4 (C-9)，47.5 (C-10)，39.7 (C-11)，39.7 (C-11)，28.8 (C-13)，166.2 (C-14)，15.2 (C-15)。对比文献[18]确定其结构为granulolactone。

2.4 化合物4的结构鉴定

褐色油状物，C9H10O2，HRESIMSm/z151.075 20 [M + H]+(calcd for C9H11O2，151.075 9)，1H NMR (600 MHz，CD3OD-d4)，δH：6.73 (2H，d，J=10.2Hz，H-2，6)，7.02 (2H，d，J=10.2Hz，H-3，5)，3.62 (2H，s，H-7)，2.15 (3H，s，H-9)；13C NMR (150 MHz，CD3OD-d4)，δC：157.6 (C-1)，116.4 (C-2，6)，131.5 (C-3，5)，126.6 (C-4)，50.6 (C-7)，210.2 (C-8)，29.0 (C-9).对比文献[19]结构确定为4-hydroxyphenylacetone。

2.5 化合物5的结构鉴定

白色粉末，[α]25 D +12 (c0.1，MeOH)，C10H12O4，HRESIMSm/z197.080 6 [M + H]+(calcd for C10H13O4，197.081 4)，1H NMR (600 MHz，CD3OD-d4)，δH：6.70 (2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，7.04 (2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，2.95 (1H，dd，J=5.24，13.8 Hz，H-7a)，2.83 (1H，dd，J=7.79，14.08 Hz，H-7b)，4.30 (1H，dd，J=5.15，7.56 Hz，H-8)，3.68 (3H，s，H-10)；13C NMR (150 MHz，CD3OD-d4)，δC：157.2 (C-1)，116.0 (C-2，6)，131.5 (C-3，5)，129.1 (C-4)，157.2 (C-1)，40.8 (C-7)，175.8 (C-9)，52.3 (C-10)。对比文献[20]结构确定为latifolicinin C。

2.6 化合物6的结构鉴定

黄色粉末，C9H10O3，HRESIMSm/z167.070 1 [M + H]+(calcd for C10H11O3，167.070 8)，1H NMR (600 MHz，CD3OD-d4)，δH：6.82 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，7.86 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)，4.31 (2H，q，J=7.1 Hz，H-8)，1.36 (3H，t，J=6.0 Hz，H-9)；13C NMR (150 MHz，CD3OD--d4)，δC：163.7 (C-1)，116.1 (C-2，6)，132.7 (C-3，5)，122.5 (C-4)，168.3 (C-7)，61.7 (C-8)，14.6 (C-9)。对比文献[21]确定结构为p-hydroxy-benzoic acid ethylester。

2.7 化合物7的结构鉴定

白色固体，C7H6O3，HRESIMSm/z139.038 8 [M + H]+(calcd for C7H7O3，139.039 5)，1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)，δH：6.82 (2H，d，J=7.79 Hz，H-2，6)，7.78 (2H，d，J=7.79 Hz，H-3，5)，10.22 (1H，br s，-COOH)；13C NMR (150 MHz，DMSO-d6)，δC：161.8 (C-1)，115.3 (C-2，6)，131.7 (C-3，5)，121.5 (C-4)，167.4 (C-7)。对比文献[22]确定为p-hydroxybenzoic acid。

2.8 化合物8的结构鉴定

橙红色油状物，[α]25 D +22 (c0.1，MeOH)，C15H26O4，HRESIMSm/z293.172 1 [M + Na]+(scalcd for C15H26O4Na，293.172 9)，1H NMR (600 MHz，CDCl3-d1)，δH：5.68 (1H，br s，H-2)，2.19 (2H，m，H-4)，2.25 (2H，m，H-5)，5.14 (1H，t，J=7.8Hz，H-6)，2.09 (1H，m，H-8a) 2.21 (1H，m，H-8b)，1.55 (2H，m，H-9)，3.34 (1H，d，J=12.6 Hz，H-10)，1.15 (3H，s，H-12)，1.20 (3H，s，H-13)，1.61 (3H，s，H-14)，2.16 (3H，s，H-15)；13C NMR (150 MHz，CDCl3-d1，δC：171.1 (C-1)，115.5 (C-2)，162.2 (C-3)，40.9 (C-4)，26.3 (C-5)，123.6 (C-6)，135.9 (C-7)，36.5 (C-8)，29.4 (C-9)，77.7 (C-10)，73.4 (C-11)，22.8 (C-12)，25.6 (C-13)，15.8 (C-14)，18.9 (C-15)。对比文献[23]结构确定为phallac acids A。

2.9 化合物9的结构鉴定

淡黄色粉末，C6H6O3，HRESIMSm/z127.039 0 [M + H]+(calcd for C6H7O3H，127.039 5)，1H NMR (600 MHz，CD3OD-d4)，δH：7.44 (2H，m，H-3，5)，6.81 (1H，d，J=8.1 Hz，H-6)；13C NMR (150 MHz，CD3OD-d4)，δC：123.9 (C-1)，146.0 (C-2)，115.7 (C-3，5)，151.4 (C-4)，117.7 (C-6)。对比文献[24]结构确定为1，2，4-benzenetriol。

2.10 单体化合物的活性评价

选择8株植物病源真菌及8株临床耐药细菌对化合物1～9的抗菌活性进行了测试，当观察到96孔板上阴性对照变浑浊时，开始记录活性结果。结果显示，测试化合物在不同浓度下均变浑浊，最高浓度与最低浓度给药量组间无明显差异，说明测试化合物在实验浓度下对植物病原真菌或临床耐药细菌无抑制活性。所有化合物最小抑菌浓度均>100μg/mL。见图1、表2、表3。

图1 化合物1～9的结构

表2 化合物1～9的抗细菌活性

表3 化合物1～9的抗真菌活性

3 讨论

微生物天然产物化学结构和生物功能多样，是新药研发的重要资源。旋丝毛壳菌作为毛壳属的一个大分支，其次生代谢产物还未见报道。本文对一株小蓟内生旋丝毛壳菌的次级代谢产物化学结构及抗菌活性进行了研究，从其大米加MEB培养基固体发酵产物中分离得到9个单体化合物，通过NMR和HRESIMS数据确定为aurasperone A (1)、fonsecinone A (2)、granulolactone (3)、4-hydroxyphenylacetone (4)、latifolicinin C (5)、p-hydroxybenzoic acid ethylester (6)、p-hydroxybenzoic acid (7)、phallac acid A (8)、1，2，4-benzenetriol (9)，均为首次从该种真菌中发现。采用二倍稀释法对这些单体化合物的抗临床耐药细菌和植物病源真菌活性进行测试，结果显示9个单体化合物均无显著活性。通过文献调研，发现化合物1和2对幽门螺杆菌具有显著的抗菌活性，最小抑菌浓度16μg/mL[25]，化合物6和7是可用作的防腐剂[26]，在后续的研究中，可以选择其他病原菌对这些化合物的抗菌活性进行挖掘。本研究为首次关于旋丝毛壳属C.bostrychodes真菌次生代谢产物及生物活性的研究，丰富了该种真菌的化学成分，为进一步挖掘旋丝毛壳真菌的活性代谢产物奠定了基础。