复合多糖添加剂对土鸡免疫功能的影响

张洁菡，杨凰伶，王泽雨津，谢 琳，吴 凡，彭英云，周建华，许陈东，杨治风，陈义勇

（1.常熟理工学院 生物与食品工程学院，江苏 常熟 215500；2.张家港天源生态养殖有限公司，江苏 张家港 215622；3.张家港市畜牧兽医站，江苏 张家港 215699）

0 引言

近年来，人们越来越关注养鸡业存在的抗生素药物滥用引起的产品安全和质量问题，因此推动安全、高效、无毒、无污染的绿色添加剂在养殖业中的应用，以逐步替代抗生素和化学药物已成为畜牧业的发展趋势[1].

多糖作为生物有机体内的一类生物大分子，具有降血脂、抗病毒、提高免疫力、抗菌等作用.近几年的研究发现，复合多糖如龙须菜多糖、坛紫菜多糖和毛头鬼伞多糖复合后的功能作用优于单一多糖，在抑制HeLa细胞增殖方面具有协同增效作用[2].芦荟多糖、牛膝多糖和黄芪多糖具有提高肉仔鸡免疫功能的作用[3].董雯雯等人[4]研究探讨了北五味子多糖SCP-III对鸡外周血淋巴细胞的影响，发现SCP-III能显著增强细胞因子IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌.刘素贞等人[5]研究发现蝉花多糖具有提高三黄鸡雏鸡免疫力，促进生长，改善肉质的作用.阳刚等人[6]研究发现麦冬多糖可以调节乌骨鸡公雏环磷酰胺导致的免疫抑制转至正常水平.鄯来平等人[7]研究发现酵母多糖可以促进免疫器官发育，增强机体免疫功能和抗病毒能力，有效提高肉仔鸡的生产性能.

目前，关于单一多糖对鸡免疫功能的影响研究较多，但是对复合多糖的研究报道较少.因此本文在土鸡的日粮中使用复方多糖添加剂，探讨复合多糖添加剂对土鸡免疫功能的影响，为其在土鸡安全生产中的应用奠定基础.

1 材料与方法

1.1 试验材料

复合多糖饲料添加剂（本实验室制备，主要包括海藻多糖、杏鲍菇多糖、米糠多糖，其质量比例为1︰2︰1）；免疫球蛋白 IgM、IgG、IgA、检测试剂盒（南京建成科技生物有限公司）；细胞因子 IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）；1日龄土鸡（张家港市天源生态养殖有限公司提供）.

1.2 主要仪器

TG16-WS高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；ReadMax 1900酶标仪（上海闪谱生物科技有限公司）.

1.3 试验方法

1.3.1 试验设计

选取240只健康且体重接近的1日龄土鸡，随机分成4组，每组3个重复，每个重复20只土鸡（公母各半）.对照组（CT）饲喂基础日粮，其他处理组分别在基础日粮中添加0.1%（试验1组，ET1）、0.2%（试验2组，ET2）、0.4%（试验3组，ET3）的复合多糖饲料添加剂颗粒剂.试验分为1～21日龄和22～42日龄两个阶段，试验周期为42 d，基础日粮配制参考NRC（2012）鸡的营养标准和《鸡饲料标准》（NY/T 33—2004）.

1.3.2 饲养管理

采用3层笼养饲养方式，每天定时将复合多糖饲料添加剂加入基础日粮中饲喂2次，期间自然光照、通风，常规消毒，自由采食饮水.保持鸡舍环境卫生，并按正常免疫程序进行免疫接种.第1周饲养环境温度保持在33～34 ℃，以后每周平均降低2 ℃，直至室温降至22 ℃ 左右.给予充足的自然光，并将最终室温维持在22 ℃左右.

1.3.3 免疫功能指标的测定

1.3.3.1 免疫器官指数

在试验21 d（第一阶段）和42 d（第二阶段）时，每组随机抽取5只土鸡，心脏采血后颈部脱臼处死，取胸腺、脾脏和法氏囊，清洗称重，免疫器官指数计算公式为

免疫器官指数（g/kg）= 免疫器官重量（g）/土鸡体重（kg）

1.3.3.2 血清免疫指标

每组分别随机选取2只21日龄和42日龄土鸡，禁食3 h，然后通过翅静脉采血，离心（5 000 r/min，5 min）制备血清，然后严格按检测试剂盒说明书对血清中的IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量进行检测.

1.4 数据分析

每组数据进行3次平行试验取平均值，以“平均值±标准差”表示，利用SPSS20软件处理数据进行方差分析和显著性分析，P<0.05表示存在显著性差异.

2 结果与讨论

2.1 复合多糖添加剂对土鸡免疫器官指数的影响

复合多糖添加剂对土鸡免疫器官指数的影响见表1.从表1可以看出，在试验第一阶段（1～21 d），与CT组相比，ET1、ET2、ET3复合多糖添加剂试验组的胸腺指数、法氏囊指数均有提高，脾脏指数有所降低，但无显著性差异（P>0.05）.在试验第二阶段（22～42 d），与CT组相比，ET1、ET2、ET3 3个复合多糖添加剂试验组的胸腺指数有显著或极显著提高（P<0.05或P<0.01），分别提高了20.7%，30.25%和35.99%；脾脏指数有了明显的提高（P<0.05），分别提高了22.55%，24.51%和28.43%.法氏囊指数与第一阶段相比呈上升趋势，试验ET1组与CT组相比差异不明显（P>0.05），试验ET2组、ET3组比CT组有了明显的提高（P<0.05），分别提高了13.53%和23.77%.与第一阶段相比，第二阶段土鸡免疫器官指数有一定程度上升.免疫抑制导致免疫器官指数降低，免疫增强主要表现为免疫器官指数的增加[8].说明复合多糖添加剂能够通过提高免疫器官质量，提升免疫指数进而增强土鸡的免疫功能.李洪武等人[9]发现在肉仔鸡基础饲粮中加入不同添加量的人参叶多糖，肉仔鸡免疫指数如胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数有不同程度的提高.在日粮中添加香菇多糖，可以显著提高肉仔鸡的免疫器官指数（P<0.05）[10].研究证实淫羊藿多糖对肉鸡的免疫器官指数具有明显的增强作用[11].

表1 复合多糖添加剂对土鸡免疫器官指数的影响

2.2 复合多糖添加剂对土鸡血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影响

复合多糖添加剂对土鸡血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影响见表2.从表2可以看出，在试验第一阶段（1～21 d），与CT组相比，ET1、ET2、ET3复合多糖添加剂试验组IgA含量差异不明显（P>0.05），ET2、ET3复合多糖添加剂试验组IgG、IgM 的含量均明显高于CT组（P<0.05）.在试验第二阶段（22～42 d），与CT组相比，ET1、ET2、ET3复合多糖添加剂试验组IgA、IgG含量差异明显（P<0.05），IgM 含量有一定程度的提高，但是差异不显著（P>0.05）.王莹等人[12]研究发现黄芪多糖饲料添加剂可提高艾拔益加肉鸡（即AA肉鸡）血清IgM、IgG和IgA免疫球蛋白水平.本实验结果表明复合多糖添加剂能够提高土鸡免疫球蛋白含量，进而增强土鸡的免疫功能.

表2 复合多糖添加剂对土鸡血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影响

2.3 复合多糖添加剂对土鸡血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影响

复合多糖添加剂对土鸡血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影响见表3.从表3可以看出，在试验第一阶段（1～21 d），与 CT 组相比，ET1、ET2、ET3复合多糖添加剂试验组的土鸡血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量有了显著性提高（P<0.05）；在试验第二阶段（22～42 d），与CT组相比，ET2、ET3复合多糖添加剂试验组土鸡血清中IL-2含量显著提高（P<0.05），分 别 提 高 了52.22%，64.53%.ET1、ET2、ET3复合多糖添加剂试验组的土鸡血清中IL-12、TNF-α含量显著提高（P<0.05），ET3复合多糖添加剂试验组的土鸡血清中IFN-γ含量显著提高（P<0.05），ET1、ET2复合多糖添加剂试验组的土鸡血清中IFN-γ含量差异不显著（P>0.05）.余强等人[13]发现，黑灵芝多糖能够促进细胞因子 IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-12 的分泌.本研究结果表明，复合多糖添加剂能够促进细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ的分泌，从而提高土鸡的免疫功能.

表3 复合多糖添加剂对土鸡血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影响

3 结论

本文以土鸡为对象，以免疫器官指数和血清免疫指标为指标，探讨了复合多糖添加剂对土鸡免疫功能的影响.结果表明：土鸡基础日粮中加入一定的复合多糖添加剂可有效提高土鸡免疫器官指数，提高土鸡免疫球蛋白含量，促进细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ的分泌从而提高土鸡的免疫功能.综合成本及对土鸡的免疫作用效果来看，日粮中复合多糖添加剂的添加量为0.2%时可以有效提升土鸡的免疫功能.复合多糖添加剂在土鸡养殖领域可以作为一种免疫增强剂，具有广阔的应用前景.