一例多病毒混合感染引起犊牛腹泻的诊疗

张玲会，杨斌

（1.行唐县动物卫生监督所玉亭分所，河北 石家庄 050600；2.行唐县动物卫生监督所余底分所，河北 石家庄 051600）

腹泻是犊牛最常出现的消化道疾病症状，若初生犊牛发生腹泻不能尽早做出诊断并进行治疗，经常导致大批死亡。 近几年来，随着河北省奶牛养殖业规模扩大， 犊牛腹泻发病率也呈逐年上升趋势，严重阻滞犊牛早期的生长发育，死亡率可高达90%， 严重影响牛群的扩增及奶牛养殖业的良性发展。 引起犊牛腹泻的因素错综复杂，其中传染性病毒引起的腹泻最为严重，且多呈混合性感染。 最常见的病原：牛病毒性腹泻病毒 （Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)、牛轮状病毒（Bovine rotavirus，BRV）、 牛冠状病毒（Bovine coronavirus，BCV）。 由于三种病原引起的犊牛传染性腹泻在河北省地区不断暴发，而且犊牛腹泻的临床症状和病理变化有很多相似之处。 腹泻犊牛大量体液丧失，导致犊牛脱水、酸中毒，甚至引起死亡。 根据该患病犊牛临床症状和实验室诊断确定病原， 为该场犊牛腹泻的治疗和防控提供了可靠的理论依据。

1 发病情况

驻场兽医提供腹泻犊牛的基本情况：10 日龄犊牛出现食欲减退，精神沉郁，消瘦，腹泻次数增多，排黄棕色水样粪便，气味恶臭且便中带血，混有气泡，脱水严重。 采集患病犊牛的血液、新鲜腹泻粪便，进行实验室检测。

2 临床诊断

采集样品时进行问诊：犊牛发病日龄、粪便形态、有无集中发病、是否注射疫苗、饲养管理、环境因素等。 结合临床症状，进行初步诊断。 血常规检查见表1，多项指标出现异常，需要结合实验室诊断进一步确诊。

表1 全血常规检查结果

3 实验室诊断

根据GenBank 中公布参考株序列， 分别设计了3 对特异性引物扩增BVDV E2 基因、BRV VP6 基因、BCV N 基因。 引物由北京生工生物工程有限公司合成，引物序列，如表2 所示。

表2 PCR 引物序列

按照病毒基因组RNA 提取试剂盒说明书提取病毒核酸， 将提取的核酸产物通过反转录试剂盒进行反转录， 获得cDNA，-20℃保存备用。

分别以BVDV、BRV、BCV 基因组cDNA 为模板，用相应引物进行PCR 扩增。 多重PCR 的最佳反应总体系为25 微升：2×EsTaqMasterMix 10 微升， 3 种病毒cDNA 各1.0 微升，3 对上下游引物各1.0 微升，ddH2O 6.0 微升。 反应程序为：94℃5 分钟；94℃30 秒；55℃30 秒；72℃30 秒；72℃7 分 钟终延伸； 共35 个循环。由图可知，扩增出的目的片段大小分别为 295 bp、146 bp、125 bp， 与预期结果一致。

图 多重PCR 检测结果

4 治疗

目前对于犊牛病毒性腹泻无特效的治疗方法。 结合诊断结果， 可采用消化道收敛药、 止血药等静脉输入电解质溶液，以消炎止泻止血， 防止继发感染。 加强患病犊牛护理， 增强其抵抗力， 促使患病牛尽早康复。

5 小结与分析

犊牛腹泻在河北省部分地区非常普遍， 给奶牛业的发展带来极大影响。 由于BVDV、BRV、BCV 混合感染后出现相似的临床症状，病因复杂，对其进行诊断较困难。因此，根据其病原学特征、临床症状、病理变化，只能做出初步诊断，如进一步确诊还需要通过实验室检测。 PCR 技术普遍应用于临床，可在短时间内对感染的病原进行检测、确诊。 这项技术为犊牛腹泻早期诊断、 预防治疗提供了简单快捷的方法。 根据临床症状观察和实验室诊断相结合对该病例进行诊断。 据畜主描述及对该场了解， 排除了环境和饲养的非感染性因素， 临床检查和实验室检测结果确认该腹泻犊牛致病病原是由多种病毒混合感染引起。由于引起犊牛腹泻的多因素性质，使得养牛业在群体管理、饲养和营养、生物药物方面取得了很大进展。犊牛腹泻的预防和控制还应充分考虑疾病复杂性， 如环境因素、传染性病原体，混合病因、饲养管理等。减少腹泻发生主要采用防治结合的原则，血清制品或疫苗是防制犊牛发生腹泻的主要措施；治疗犊牛腹泻应采取标本兼治，不仅对因与对症双管齐下，还要改善犊牛饲养环境、加强管理。

减少犊牛腹泻主要防控措施：

一是坚持自繁自养，严格控制引进外来品种，做好奶牛产犊前后的管理和护理工作，通过有计划繁育，初产母牛优先产仔，以减少对病原体的接触， 避免接触较易受病原体影响的新生犊牛。

二是通过缩短产犊季节，调整配种方案，减少病原体污染环境， 新生犊牛做好冬季防寒保暖措施，及早哺喂初乳。

三是保持清洁区域 （或无致病性区域），根据动物的产犊日期将动物分组， 上一个产犊后的产犊区域应彻底消毒，保持清洁。 新生犊牛应单圈饲养和管理，避免相互之间舐癖，以减少传染性疾病的传播。