6种中草药抗菌作用实验研究

阿依德古力•哈德依汗 叶尔那尔•塔那布汗

中药为中国传统中医特有药物，具有无残留、无污染等特点。几千年以来，清热解毒类中药在治疗感染性疾病中发挥着重要的作用。据报道，中药主要是通过干扰细菌的细胞壁合成、损伤细胞胞浆膜等来达到抑菌效果[62]。因而中药的开发研究是解决抑菌药物发展的主要方向，也是对新型抗菌药的研究及机理研究的热点。本文以纸片法与试管法实验研究金银花、白头翁汤、黄连解毒汤等中草药的抗菌作用，并比较两种方法下的抑菌效果。

1.1 材料与方法

3.1.1 菌株来源

1、E. Coli O157：H7 標准菌株 菌号：CICC 21530中国工业微生物菌株保藏中心提供

2、金黄色葡萄球菌标准菌株 菌号：CICC 23656中国工业微生物菌株保藏中心提供

3、马链球菌Ⅰ（620，来源于马腺疫驹的脓汁，新源县）新疆农业大学动物医学学院中兽医实验室

4、马链球菌Ⅱ（N15，来源于马腺疫驹的脓汁，新源县）新疆农业大学动物医学学院中兽医实验室

3.1.2主要仪器

试管;培养皿;接种环;酒精灯;打孔器;测量尺;德国Hettich高速离心机;Eppendorf移液枪;Motic显微镜;上海梅特勒-托利多PL 303电子天平;北京光明XMTD-4000电热恒温水浴箱;北京广营GD 65-1型干烤箱;北京桑翌ST-T-160 AC空气浴震荡培养箱等。空气浴振荡培养箱（型号MODEL：ST-F160AC）;SW-CJ-2F双人双面垂直洁净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。

3.1.3 实验药物

金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、紫背天葵、黄连、黄柏、黄芩、栀子、连翘、秦皮、白头翁均购自新疆乌鲁木齐东方康泰药房。

3.1.4 药物制备

称取药材饮片黄连90g，加10倍水于煎药锅内浸泡30min，用武火煮沸后文火煎煮30min，趁热用纱布过滤，药渣再加8倍水重复煎煮1次，合并2次滤液，布氏漏斗抽滤，浓缩滤液至0.25g/mL。其他药物及方剂煎制方法相同，浓缩滤液至0.25g/mL，4℃保存备用。

3.1.5 菌液制备

挑取4 ℃ 斜面保存的E. coli O157：H7 标准菌株、黄色葡萄球菌标准菌株、马链球菌Ⅰ、马链球菌Ⅱ分别在SMAC培养基、LB培养基、5%绵羊血THB培养基上划线培养12小时后，再挑取单个菌落于LB液体培养基中37 ℃、180 r/min震荡过夜培养。待细菌OD600 nm值达到0.6时，37 ℃存放备用。

3.1.6试验方法

3.1.6.1 纸片法

（l）将滤纸用打孔机打成直径6mm的圆纸片，每100片放入一小瓶中，置于电热恒温干燥箱内160℃干热灭菌1-2小时。

（2）中药的浓度：金银花、连翘、黄连、黄连解毒汤、白头翁汤、五味消毒饮等浓度均为0.25g/mL

（3）在无菌条件下，将50片药物纸片放入要检测的0.5mL抗菌药物溶液里，置于4-8℃冰箱内浸泡1-2小时。将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，置于37℃恒温培养箱内2-3小时干燥，或放在无菌室内过夜干燥。

（4）用接种环取已制备好的菌液，均匀涂抹于培养基琼脂平板上，等稍干燥后，用镊子夹取各类中药纸片，将其平均分布于培养基琼脂表面，各纸片中心相距24mm，纸片距平皿边缘约15mm，盖好平皿，放在37℃恒温培养箱内培养18小时后观察结果。

3.1.6.2试管法

（1）取无菌试管10支，排列于试管架上，各管中均加入营养肉汤1mL。

（2）吸取配制好的抗菌药物原液2.5mL加入第一管中，充分摇匀混合后吸出2.5mL移入第二管中，充分混合后，再由第二管移出2.5mL移入第三管中，充分混合，依次类推，一直移到第九管，从第九管吸出2.5mL弃去。第十管不加抗菌液作为空白对照。

（3）然后向各管中加入制备好的菌液0.05mL，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时后观察结果。观察不同含量的药物对细菌的抑制能力，以判定细菌对药物的敏感度。

3.2结果

3.2.1 药物纸片法结果判定

根据抗菌药物纸片周围无菌区（抑菌区）的大小，测定其抗药程度。因此，必须测量抑菌圈的直径（包括纸片），按其大小，报告该株对某种药物是否敏感：黄连，黄连解毒汤，五味消毒饮中药用纸片法的马链球菌抑菌圈的直径都是18mm以上，对马链球菌具有强抑制作用。金银花，连翘中药用纸片法的金黄色葡萄球抑菌圈的直径都是18mm以上，对金黄色葡萄球有强的抑制作用白头翁汤用纸片法的大肠杆菌抑菌圈的直径都是18mm以上，对大肠杆菌有强的抑制作用。

3.2.2 试管法的结果判定

培养18小时后，凡无细菌生长的药物最高稀释管中的稀释度即为该菌对药物的敏感度（表3，4，5）。若由于加入药物（如中草药）而使培养基变混浊，肉眼观察不易判断时，可进行接种培养或涂片染色镜检判定结查。

3.3 讨论

选取黄连解毒汤，五味消毒饮，黄连，金银花，连翘，白头翁等6种有显著抑菌作用的中草药及方剂对大肠杆菌，马链球菌等4种临床常见的致病菌进行体外抑菌实验。实验采用的纸片法和试管法，经临床实践证明其常规应用简便，具有良好的方法学特性。实验结果显示黄连解毒汤，五味消毒饮，黄连等中药对马链球菌的抑菌效果为高敏，白头翁汤对大肠杆菌的抑菌效果为高敏，金银花和连翘对金黄色葡萄球菌的抑菌效果为高敏，本文以药物抗菌实验试管法和试纸法研究其抑菌作并测得其最小抑菌浓度（MIC），为药物在临床上的应用提供了科学依据。

姓名：阿依德古力·哈德依汗（1986-06），女，哈萨克族，新疆，兽医师，硕士，研究方向：中兽医、预防兽医、临床兽医。