α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα与艾滋病病毒感染患者预后的相关性分析

刘 凌，徐红帅，赵俊玲

艾滋病，亦称“获得性免疫缺陷综合征”，是一种由于机体感染人类免疫缺陷病毒(immunodeficiency virus,HIV)所引起的全身性疾病[1]。艾滋病病毒能够导致人体不同程度的免疫功能缺陷，未经过治疗的患者在疾病的晚期极易发生各种并发症和恶性肿瘤，最终导致死亡[2]。艾滋病是一种危害性极大的传染病，男性和女性均可发病。其传染源较为特殊，感染HIV的人都是该病的传染源，其中包括了HIV感染者和艾滋病患者。HIV病毒主要存在于传染源的血液、精液、阴道分泌物、羊水等体液中，传染的途径为性接触、经血液以及血制品、母婴传播[3-4]。其发病的病因只有一种，为HIV侵袭机体之后造成感染，HIV侵犯人体的免疫系统，最终导致人体细胞的功能缺陷，然后引起各种机会性感染和肿瘤的发生[5]。该文研究了艾滋病病毒感染患者α1-抗胰蛋白酶、重组人趋化因子(recombinant human chemokines,CXCL12)、白细胞介素-15受体阿尔法(interleukin-15 receptor alpha,IL-15Rα)表达，旨在探究三者与艾滋病病毒感染患者预后的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2019年1月—2020年1月与锦州传染病医院病理学检测确诊为艾滋病病毒感染患者154例，为艾滋病组，男性89例，女性65例，年龄26～58(42.20±9.44)岁。另随机选取于该院进行体检的健康志愿者154例作为对照组，男性有78例，女性76例，年龄21～55(38.00±13.6)岁。按照疾病的分期将患者分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，各期男/女分别为16/10、8/6、29/22、28/16。所有患者一般资料对比无统计学意义，具有可比性。纳入标准：所有患者均符合中华医学会中对艾滋病病毒感染患者的诊断标准[6]。排除标准：① 妊娠期间患者；② 合并心、肝、肾等器官功能不全者；③ 依从性差者。所有患者及家属签署知情通知书。

1.2 研究方法

1.2.1患者疾病分期 根据病理学和临床症状检测将患者分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期[7]，Ⅰ期亦可称之为急性感染期；Ⅱ期可称之为潜伏期，该病期发生时一般不会发生任何的临床症状，潜伏期一般是指从感染HIV开始到出现艾滋病临床症状的这一段时间；Ⅲ期可称之为艾滋病前期；Ⅳ期为典型的艾滋病期。

1.2.2取材 抽取所有患者空腹肘静脉血5 ml，进行离心处理，分离血清后放置-4 ℃环境下保存待用。

1.2.3CD3、CD4水平检测 使用间接法检测CD3、CD4水平：将待测空腹静脉血5 ml/例传代到5孔板中，放在温度37 ℃、5% CO2、饱和湿度环境下培养1、2、3 d，然后再加入浓度为0.25%的胰蛋白酶进行消化，然后用离心机2 000 r/min的转速离心5 min收取细胞，收取细胞后使用PBS缓冲液洗涤3 min，再重复洗涤2次，洗涤完成后将以2 000 r/min的转速离心机分离后收集细胞后加入1 ml 碘化丙啶(propidium iodide,PI)染液，注意避光的常温下放置1 h后，然后再用特异荧光标记，在鞘液包裹下流动，期间会发射出光子，流式细胞仪进行检测计数管内T细胞亚群CD3、CD4水平。

1.2.4α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表达检测 首先使用PBS缓冲液对标本进行冲洗，随后裂解30 min，裂解后测定其蛋白浓度。取得20 μg/孔蛋白质进行电泳，电泳的同时加入蛋白缓冲液，10 min后把电转膜放置到浓度为10%的牛奶中进行浸泡，常温环境下封闭2 h。封闭后结合一抗孵育1 d，第二天取出后使用TBST液进行冲洗，随后结合二抗。1 h后进行清洗、显色，对α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表达进行检测。

1.2.5IL-15Rα表达检测 使用PC-PCR检测IL-15Rα表达：提取细胞总RNA，检测RNA纯度、含量，逆转录处理后获得cDNA，使用Primer5.0软件设计引物，采用2-ΔΔCt方法计算，内参U6。设置反转录反应条件：25 ℃、10 min,40 ℃、60 min,85 ℃、5 min；设置扩增条件:94 ℃、20 s,72 ℃、30 s,60 ℃、30 s,35个循环，采用2-ΔΔCt方法计算出需要检测的miR-21表达量。

2 结果

2.1 艾滋病患者和健康志愿者T淋巴细胞亚群水平检测与对照组相比，艾滋病组患者CD4、CD8水平异常下降，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 对照组与艾滋病组CD4、CD8水平比较

2.2 艾滋病患者和健康志愿者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达对比与对照组相比，艾滋病组患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达均有所上升(P<0.05)。见表2。

表2 对照组与艾滋病组α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达对比

2.3 艾滋病病毒感染患者不同疾病分期中α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达对比与Ⅰ期患者相比，Ⅱ期患者体内α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达升高(P<0.05)；与Ⅱ期患者相比，Ⅲ期患者体内α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达升高(P<0.05)；与Ⅲ期患者相比，Ⅳ期患者体内α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达升高(P<0.05)。见表3、图1。

表3 不同艾滋病期α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达对比

图1 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表达Western blot图A:Ⅰ期患者；B：Ⅱ期患者；C：Ⅲ期患者；D：Ⅳ期患者；与Ⅰ期患者比较：*P<0.05；与Ⅱ期患者比较：#P<0.05；与Ⅲ期患者比较：&P<0.05

2.4 艾滋病预后Logistic回归分析对艾滋病患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达进行Logistic回归分析，见表4。

表4 艾滋病预后Logistic回归分析

2.5 艾滋病预后α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达相关性图α1-抗胰蛋白酶、IL-15Rα表达之间呈正相关(r=0.508，P=0.001)；α1-抗胰蛋白酶、CXCL12之间呈正相关(r=0.331，P=0.001)；CXCL12、IL-15Rα表达之间呈正相关(r=0.371，P=0.001)。见图2。

图2 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达相关性图

3 讨论

艾滋病是一种由HIV感染所引起的慢性致死性传染病[7]。是一种危害性极大的传染病，HIV是一种能够能够攻击人体免疫系统的病毒，HIV病毒主要以人体免疫系统中重要的CD4+T淋巴细胞作为主要目标进行攻击，大量地破坏该细胞，导致人体的免疫功能丧失，最终引起人体感染各种疾病，严重威胁患者的生命安全[8]。艾滋病病毒感染易发生于青壮年，即性生活较为活跃的年龄段。目前艾滋病在中国已经列入乙类法定传染病，并且被列为国境卫生监测传染病之一[9]。

CD4细胞时人体免疫细胞中的一种重要的免疫细胞，其主要是由Th细胞表达，是Th细胞TCR识别的抗原的抗体。大量临床研究表明，CD4是HIV主要受体，有着“通风报信”的作用，对CD4细胞进行检测，能够对艾滋病的诊断、治疗效果的判定和对患者的免疫功能的判定有着重要的意义，其原因是CD4细胞是艾滋病病毒的第一攻击对象[10-11]。CD8细胞有着杀伤被感染细胞和癌细胞的作用，当艾滋病病毒进入到人体后，会感染体内的CD4细胞，当CD4细胞被感染后便失去可“通风报信”的作用，而CD8细胞便无法杀伤被感染细胞和癌细胞，最终导致机会性感染和癌症[12]。赵 鹏 等[13]研究提示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平下降，说明CD4、CD8与艾滋病有着密切的关联。该研究结果显示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平有所下降，与上述一致，说明CD4、CD8水平与艾滋病有着密切的关联，对其进行检测，能够较为准确的评判艾滋病病毒感染的发生发展和预后，且具有一定的相关性。

α1-抗胰蛋白酶是一种单链糖蛋白，α1-抗胰蛋白酶联合原发性甲胎蛋白能够提高对癌症的检出率，且与胰岛素存在着竞争关系。CXCL12作为趋化因子CXC家族中的一员，由骨髓细胞分泌生成而来，并且这种分泌可持续不断，是一种持续表达的趋化因子。CXCL12与艾滋病有着密切的关联，对其进行检测，能够对艾滋病病毒感染过程和发展进行较为准确的评价。黄富强[14]的研究结果显示，艾滋病病毒感染患者体内CXCL12表达升高，说明CXCL12表达与艾滋病患者有着密切的关联。IL-15Rα制造的蛋白质与肌肉收缩密切相关，且还与艾滋病有着密切的关联，任园园 等[15]的研究表明，IL-15Rα在艾滋病病毒感染患者体中存在，且呈高表达，说明IL-15Rα与艾滋病病毒感染有着密切的关联。该研究中对α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα检测显示，艾滋病病毒感染患者体内α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα均呈现高表达，说明α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达与艾滋病病毒感染有着密切的关联，且对α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达与艾滋病病毒感染进行Logistic回归分析提示，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达与艾滋病病毒感染的预后有着一定的相关性，呈正相关存在。

综上所述，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表达与艾滋病病毒感染患者有着密切的关联，对其进行检测能够较为准确的对艾滋病病毒感染的发生发展进行评价，且α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα与艾滋病病毒感染患者预后有着相关性。虽然上述结果显示α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα与艾滋病病毒感染的发生发展以及预后密切相关，但本文研究中选取病例较少，存在着一定的局限性，所以研究结果仍需大样本、多中心的试验来证实。