孕晚期B族链球菌定植的危险因素及与不良妊娠结局的关系*

宦 宇,张宇雨,张春利,齐结华,奚 杰,蔡徐山△

上海市嘉定区妇幼保健院：1.检验科；2.产科，上海 201821

B族链球菌(GBS)也被称为无乳链球菌，是寄居于人体生殖道和胃肠道的革兰阳性链球菌。GBS是一种条件致病菌，在健康人群体内定植时不会引起疾病，而孕晚期孕妇体内定植GBS时可致早产、胎膜早破和产褥期感染等不良妊娠结局。GBS主要通过羊水或经产道分娩时传播给胎儿或新生儿，引起新生儿肺炎、胎儿宫内窘迫等[1]。目前，孕妇孕晚期GBS定植情况越来越受重视，2010年美国疾病控制与预防中心发布的《围产期GBS疾病预防指南》中规定孕晚期孕妇应进行GBS检测。在我国，有报道称GBS是引起上海、广东、广西新生儿细菌性脑膜炎的最常见细菌之一[2-3]，中华医学会起草的《孕前和孕期保健指南》自2011年版开始就将GBS纳入筛查项目。与此同时，探讨GBS定植的危险因素也已成为国内研究的热点[4]。本研究通过分析影响孕晚期孕妇GBS定植的相关因素并探讨GBS定植对母婴结局的影响，以期为GBS定植的早期预防及治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年10月至2020年1月到本院就诊的439例孕晚期孕妇为研究对象，年龄17～44岁，孕周34～37周。所纳入孕妇均取阴道及肛周分泌物标本进行了实时荧光定量PCR检测GBS。

1.2仪器与试剂 北京博尔诚科技有限公司生产的GBS核酸检测试剂盒；美国赛默飞世尔公司生产的ABI 7500 实时荧光定量PCR仪。

1.3方法

1.3.1标本采集 取两根无菌拭子，1根在孕妇阴道下1/3处旋转取分泌物；另1根在孕妇肛周旋转取分泌物，两份标本均需带有上皮细胞，于室温保存，2 h内送检。

1.3.2检测方法 DNA提取方法、扩增条件及分析方法严格参照GBS核酸检测试剂盒说明书操作。将分泌物标本溶于生理盐水，取含有分泌物的生理盐水1 mL，以13 000 r/min离心10 min，弃上清液，沉淀加50 μL DNA提取液充分混匀，100 ℃加热10 min，13 000 r/min离心10 min，取上清液5 μL和 PCR反应液35 μL加入反应管中，95 ℃ 15 s，60 ℃ 35 s，45个循环扩增。阳性结果判定标准：Ct值≤38，且曲线呈对数生长状，Ct值为38～45时需复测确认。阴道或肛周分泌物标本任意一种检测出GBS即判断为GBS定植。

1.3.3资料收集 收集孕妇年龄、产次、流产史、试管妊娠情况，与GBS检测同时期的解脲支原体、真菌、滴虫感染情况，以及白带清洁度、唾液酸苷酶检测结果；收集产程中发热、胎儿宫内窘迫、新生儿感染、早产、胎膜早破等妊娠结局资料。

1.4统计学处理 采用SPSS19.0软件进行数据分析。计数资料以例数或率表示，组间比较采用χ2检验；采用多因素 Logistic 回归进行危险因素分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1孕晚期孕妇GBS定植的单因素分析 共检出GBS阳性36例，阴性403例。与GBS阴性孕妇相比，GBS阳性孕妇有流产史人数比例、解脲支原体阳性率、真菌阳性率、唾液酸苷酶阳性率较高，白带清洁度Ⅲ～Ⅳ度所占比例较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 孕晚期孕妇GBS定植的单因素分析结果

2.2孕晚期孕妇GBS定植的多因素Logistic回归分析 将单因素分析中差异有统计学意义的指标纳入多因素Logistic回归分析模型进行分析，结果表明，白带清洁度Ⅲ～Ⅳ度、唾液酸苷酶阳性、解脲支原体阳性、有流产史是影响孕晚期孕妇GBS定植的独立危险因素(P<0.05)。见表 2。

表2 孕晚期孕妇GBS定植的多因素Logistic 回归分析结果

2.3GBS阳性与阴性孕妇不良妊娠结局比较 GBS阳性孕妇产程中发热、胎儿宫内窘迫、新生儿感染的发生率高于GBS阴性孕妇，差异有统计学意义(P<0.05)； GBS阳性与阴性孕妇早产、胎膜早破的发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 GBS阳性与阴性孕妇不良妊娠结局比较[ n(%)]

3 讨 论

GBS是引起围产期母婴感染的重要致病菌。KAREN等[5]的1项Meta分析发现，GBS引起的新生儿相关疾病的发病率存在很大的地区差异，如非洲GBS引起的新生儿相关疾病发病率为12.1%，东南亚为2.0%，出现这样的差异可能与各国家及地区对GBS感染的重视程度不同有关。CARIS等[6]的报道称南非大多数医生(68.0%)和护士(94.3%)无法正确列举出GBS定植的危险因素，大多数医生(80.0%)不知道孕妇感染GBS时推荐的抗菌药物使用时间。在我国，GBS的筛查和防治还处于起步阶段，因此，探讨GBS定植的危险因素，针对这些因素采取有效的预防措施具有重要的临床意义。

多项研究显示，有流产史是GBS定植的高危因素[7-9]，本研究结果与其一致，分析原因如下：有流产史的孕妇生殖道微环境平衡被破坏，对感染的抵抗能力降低，从而增加了GBS定植的风险。PIDWILL等[10]报道白色念珠菌感染是GBS定植的独立危险因素，两种微生物之间有相互协同关系，GBS的Bsp黏附素和白色念珠菌的Als3基因是与该协同作用有关的重要分子决定簇。杨训俊等[11]也报道了真菌阳性和细菌性阴道炎是围产期孕妇GBS定植的独立危险因素。本研究中，通过对两组孕妇阴道分泌物的常规检测结果分析发现，白带清洁度Ⅲ～Ⅳ度、唾液酸苷酶阳性是孕晚期孕妇GBS定植的独立危险因素(P<0.05)，而真菌阳性率虽然在GBS阳性和阴性孕妇间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，但并非GBS定植的独立危险因素(P>0.05)。考虑这可能与孕晚期孕妇体内激素水平和阴道微环境改变相关，这种改变不利于阴道正常菌群生长，而更利于解脲支原体、真菌及其他细菌的生长。

目前认为，孕妇GBS定植是早产、胎膜早破、新生儿感染、胎儿宫内窘迫等不良妊娠结局发生的主要原因。在本研究中，GBS阳性孕妇产程中发热、胎儿宫内窘迫、新生儿感染的发生率高于GBS阴性孕妇(P<0.05)；而早产、胎膜早破的发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，这与冯莹等[12]及颜巍等[13]的研究结果一致。分析其主要原因可能是孕晚期检出GBS定植的孕妇临床给予了抗菌药物治疗，从而有效减少了胎膜早破、早产的发生。

国外关于GBS定植的分子机制研究较多，如SPENCER等[14]发现，成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/成簇规律间隔短回文重复序列关联蛋白(Cas)系统中的Cas9与GBS定植具有潜在的相关性；DENG等[15]报道了GBS染色体中基因的破坏导致GBS在体外对人脑微血管内皮细胞的侵袭性显著加强，促炎细胞因子白细胞介素(IL)-8、CXC趋化因子配体1、IL-6分泌增加，而这些反应可能影响GBS与宿主间的相互作用，从而促进GBS感染的持久性和疾病进程。

综上所述，影响孕晚期孕妇GBS定植的独立危险因素为有流产史、白带清洁度Ⅲ～Ⅳ度、唾液酸苷酶阳性、解脲支原体阳性。临床应加强对孕妇的健康宣教并采取相关措施，从而有效预防孕妇GBS定植，改善母婴结局。