鸭呼肠孤病毒继发感染鸭疫里默氏杆菌治疗体会

刘洁，张中波，林正美，张东渺，任年旭，马元元，姜媛，杜永振，汪建华，李玉峰

（1.山东和康源生物育种股份有限公司，山东济南 250101；2.山东省农业科学院家禽研究所，山东济南 250100）

1 前言

鸭疫里默氏杆菌 （Riemerella anatipestifer，RA）感染是家鸭、鹅、火鸡及其他家禽和野禽的一种传染性疾病。 1～8 周雏鸭高度易感，5 周以下雏鸭一般在出现临床症状后1～2 天死亡，本病潜伏期一般为2～5 天。 雏鸭经皮下、静脉内或眶下窦途径人工感染最早可在感染后24 小时出现临床症状和死亡。 该病呈急性或慢性败血症形式，其特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎[1]。 该病流行范围广，感染率和死亡率高，是目前危害全世界养鸭业的一种主要疾病[2]。 鸭呼肠孤病毒会引起病毒型关节炎/腱鞘炎、矮小综合征、呼吸道病、肠道病、免疫抑制性疾病和吸收不良综合征[1]。 在我国，以脚软、排白色稀粪和耐过鸭生长发育明显迟缓为多见[2]。 文献报道称呼肠孤病毒可与其他传染性病原体相互作用， 使呼肠孤病毒感染的疾病和严重程度有所不同[3-5]。

2 诊断检测

2.1 病料的来源

病鸭为山东省泰安市某养殖场育成期种鸭。

2.2 剖检病变

剖解症状主要为包心包肝（图1A），脾脏呈肿大、出血（图1B），纹理深脾（图1C），剖解腿部关节有干酪样物（图1D）。

图1 病鸭解剖病变

2.3 实验室检测

2.3.1 细菌分离

鸭疫分离， 无菌采取病鸭脑部组织划线分离到5%血清营养琼脂培养基上，放置于37℃厌氧培养箱培养24～36 小时。 在5%血清营养培养基平板上生长出均匀一直的菌落，表面光滑，呈水滴状，稍隆起，圆形，边缘整齐，倾斜45°，对光可见淡蓝色荧光（图2A）。

2.3.2 细菌菌株鉴定

取单个菌落涂片、革兰氏染色、镜检，结果表明，获得的微生物为革兰氏阴性、不运动的小杆菌，单个或成双排列，初次分离有时会看到丝状排列，细菌变化较大，长1～5 微米，宽0.2～0.4微米（图2B）。

将传代纯化的菌株用无菌的PBS 吹落，吹落的菌落呈乳白色，分别吸取25 微升菌液与阳性血清混合，相对应的血清型会在玻璃片上出现颗粒状凝集（图2C）。

图2 细菌菌株鉴定

2.3.3 细菌药物敏感试验

根据抑菌圈的大小判定 分离细菌对药物的敏感程度：阿莫西林、多西环素、 氟苯尼考、环丙沙星、大观霉素、氨苄西林均为高敏；新霉素、庆大霉素中敏；林可霉素、多黏菌素B 耐药。

2.3.4 病毒的分离与鉴定

检测采用反转录多聚酶链反应技术 （RTPCR），采集感染鸭的肝脏、脾脏、肠道、肺、胰腺组织剪碎放入灭菌的研磨器中，取上清液备用，感染鸭泄殖腔拭子置于含灭菌PBS 离心管中，制成悬液震荡， 取上清液备用。 利用组织/病毒RNA 提取诺唯赞试剂盒提取病毒RNA，利用山东农业大学设计的引物：sn-j-DREO-1/2 进行PCR 扩增。 结果显示，被检3 个样品中，有1 只为鸭呼肠孤病毒阳性，结果见图3。

图3 病鸭PCR 检测结果

3 结论与分析

通过对病死鸭细菌分离及病毒检测的实验室诊断，革兰氏染色、镜检为革兰氏阴性短杆菌，证实该鸭群感染鸭疫034 型， 肛拭子PCR 检测阳性证实感染鸭呼肠孤病毒，但此次发病鸭发病周期较短，根据发病原因调查，场区前期发生过7 型、6 型两种血清型鸭疫混感，场区可能还仍存在病原， 育成批次与产蛋批次栋舍相邻距离较近，且发病栋与大周龄栋舍共用一个化粪池，造成污染，增加交叉感染的几率。 场区生物安全未严格执行， 有文献报道感染呼肠孤病毒后会引起免疫抑制，导致机体免疫应答变差，细菌混合感染率增， 病情加重， 所以感染鸭呼肠孤的同时，鸭群抵抗力也下降，易感染浆膜炎[6]。

4 讨论

养殖场对于患鸭浆膜炎的鸭群可皮下注射林可霉素或大观霉素，可以有效降低死亡率，同时使用抗生素氟苯尼考+强力霉素拌料，降低死淘率，提升鸭群抵抗力。 其他未发病鸭群可使用抗生素进行预防。

免疫接种鸭疫里默氏灭活苗或弱毒苗对同一种血清型强度感染有很好的保护作用， 但不同血清型之间交叉保护作用较低， 或者无交叉保护，因此，需要根据流行的血清型选择合适的疫苗[2]。

灭活铝胶苗、 油乳剂灭活苗及弱毒活疫苗免疫对鸭群具有较好的保护效果， 有报道预防呼肠孤的发生需在雏鸭7 日龄内进行免疫，免疫持续期达30 天以上，可有效地控制本病的发生[2]。

鸭传染性浆膜炎与鸭呼肠孤病毒的发生与饲养场生物安全、饲养管理密切相关，做好鸭群的饲养和管理是预防鸭疫的重要原因。 鸭呼肠孤也具有极强的水平传播能力，且可垂直传播，场区可用火碱、石灰铺洒场区道路，空气喷雾消毒，对于粪便、污水清理要及时，尽量避免交叉感染、水平传播。