灵芝孢子油掺伪其他常见食用油的快速检测方法研究

李常康 朱忠敏 吴长辉 李 晔 陈若芸* 康 洁*

（1. 晶型药物研究北京市重点实验室，中国医学科学院 北京协和医学院药物研究所，北京 100050；2. 福建仙芝楼生物科技有限公司，福建 福州 350002）

灵芝孢子油为灵芝科真菌赤芝（Ganoderma lucidum）的孢子粉经破壁后以CO2超临界萃取所得的油，其中主要含不饱和脂肪酸类、甾醇类化学成分[1,2]，具有抗肿瘤，提高免疫功能，保肝、护肝，抗氧化，抗衰老及治疗神经疾病等作用[3,4]。由于灵芝孢子油价格昂贵，且产品缺乏统一的质量标准[5]，一些不法商家利用当前的检测技术尚不易检出的漏洞，在灵芝孢子油中掺入低价的食用油脂类物质，欺骗消费者。此种行为不仅损害消费者的利益，而且干扰灵芝孢子油的开发应用[4,6]及其产业的发展。

本文收集灵芝孢子油及市场上常见的玉米油、大豆油、菜籽油等8种食用油，采用4种不同的方法鉴别灵芝孢子油中是否掺入食用油，取得成功。

1 材料与方法

1.1 材料

灵芝孢子油由福建仙芝楼生物科技有限公司提供；芝麻油、花生油、玉米油、橄榄油、菜籽油、大豆油、棉籽油、菜籽油购于北京市场；花生酸对照品、棉酚对照品、芝麻酚对照品购于上海源叶生物科技有限公司。

1.2 仪器设备与试剂

仪器采用超高效液相色谱仪Waters ACQUITY H-Class。试剂（分析纯）糠醛、氢氧化钾、乙醇、浓盐酸，为北京通广精细化工公司生产。

1.3 芝麻油的检测方法

取不同比例、混合均匀的油样和浓盐酸各5 mL于比色管中，摇匀后加2%的糠醛-乙醇溶液0.1 mL，剧烈摇动30 s，静置10 min，溶液分层后观察其颜色，如溶液无色，则表示无芝麻油的存在[7]。

1.4 花生油的检测方法

用移液枪吸取1 mL混入不同比例花生油的灵芝孢子油于锥形瓶中，加5 mL的KOH-EtOH溶液（8.0 g KOH溶于8.4 mL蒸馏水中，再加90%的乙醇稀释至100 mL），接上回流冷凝管，在95 ℃水浴中皂化8 min。取下锥形瓶，待皂液冷却至20 ℃，用移液枪加盐酸0.8 mL和70%乙醇溶液50 mL，振荡，加热使其澄清为止。将锥形瓶置于冷水中冷却，同时插入温度计，轻轻摇晃，当溶液出现浑浊时，读取此时的温度[7]。

1.5 芝麻酚和棉酚的检测方法

芝麻酚和棉酚采用超高效液相色谱法（UPLC），用供试品与标准品对比保留时间的方法进行测定。

UPLC色谱条件。色谱柱：C18柱，2.7 mm ×100 mm，3.0μm；流动相：乙腈-水梯度洗脱，0～10 min（20%乙腈-水），11～15 min（50%乙腈-水），16～30 min（80%乙腈-水），35～40 min（20%乙腈-水）；进样量：5μL。芝麻酚标准品的UPLC保留时间为6.7 min，棉酚标准品的UPLC保留时间为18.9 min。

溶液的制备。称取各种油的样品100 mg，加入5 mL乙腈，剧烈振摇10 min后在2 000 r/min下离心20 min。取上清液0.5 mL，加入1%磷酸溶液0.5 mL，混匀后进样分析。

1.6 花生酸和芥酸的检测方法

花生酸和芥酸采用气相色谱法（GC），用供试品与标准品对比保留时间的方法进行测定。

（1）GC色谱条件。色谱柱：HP-5MS（30 m×0.25 mm × 0.25μm）；进样口温度：250 ℃；FID检测器温度：330 ℃；流速：4 mL/min；分流比：10∶1；升温程序：180 ℃保持2 min，以10 ℃/min升温至300 ℃，保持5 min；进样量：1μL。芥酸标准品GC的保留时间为7.8 min，花生酸标准品GC的保留时间为6.4 min。

（2）溶液的制备。称取各种油的样品100 mg，加入正己烷（3 mL），1%硫酸-甲醇溶液（2 mL），剧烈振摇10 min后，于40 ℃加热10 min，取出后在4 000 r/min下离心10 min，取上清液进样分析。

2 结果与分析

2.1 芝麻油的区分

采用浓盐酸、糠醛-乙醇显色反应检测法，纯芝麻油显色最深，为血红色，纯灵芝孢子油则不显色，为白色。灵芝孢子油中芝麻油含量在0.25%以上时，用此方法会显现淡红色，随着芝麻油的比例增加，显色愈加明显（图1）。

图1 灵芝孢子油添加不同比例芝麻油的糠醛显色实验结果

2.2 花生油的区分

由于花生油中含有花生酸，在较高温度下会产生浑浊现象，39.3 ℃下可见明显浑浊；而灵芝孢子油产生浑浊的温度较低，在20.6 ℃下才可见轻微浑浊。灵芝孢子油中混入少量的花生油，会提高产生浑浊的温度。如产生浑浊的温度高于23 ℃，可推测灵芝孢子油中掺有花生油（表1）。

表1 灵芝孢子油混入不同比例花生油的浑浊温度

2.3 芝麻酚和棉酚及花生酸和芥酸的区分

芝麻酚和棉酚用UPLC测定结果（表2）：除芝麻油含有0.058%芝麻酚外，其他8种油品均不含芝麻酚；除花生油、灵芝孢子油、棉籽油含有小于定量限的棉酚外，其他5种油品均不含棉酚。

花生酸和芥酸用GC测定结果（表2）：除玉米油、葵花籽油、灵芝孢子油、棉籽油外，其他5种油品均含有花生酸；除菜籽油外，其他8种油品均不含芥酸。

表2 各供试油中芝麻酚、棉酚、花生酸、芥酸的UPLC和GC检测结果

3 讨 论

从以上检测结果看，灵芝孢子油与玉米油、葵花籽油、棉籽油这3种常见食用油不太容易区分，从文献[8，9]可知，灵芝孢子油在成分上与食用植物油不仅所含成分的种类有差别，而且相同成分在含量上也有很大差异。通过测定脂肪酸甘油酯可以区分。玉米油、葵花籽油、棉籽油的脂肪酸甘油酯主要由三亚油酸甘油酯（LLL）、二亚油酸油酸甘油酯（LLO）和二亚油酸棕榈酸油酸甘油酯（PLL）组成，三者分别占总脂肪酸甘油酯的78%～89%，而灵芝孢子油这三种脂肪酸甘油酯只占12%。灵芝孢子油主要由亚油酸二油酸甘油酯（LOO）、三油酸甘油酯（OOO）和二油酸棕榈酸甘油酯（OOP）组成，三者占总脂肪酸甘油酯的74.3%，而玉米油、葵花籽油、棉籽油的这3种脂肪酸甘油酯只占总脂肪酸甘油酯的2%～10%。

通过本试验，我们建立了灵芝孢子油与其他8种食用油的4种鉴别方法，找到了区分纯灵芝孢子油与其他8种食用油的特征，通过检测可快速准确地辨识灵芝孢子油的纯度，方法简单、可靠，为灵芝孢子油快速鉴别提供依据，也可为其他食用油的快速鉴别研究提供参考。