篮状菌属蓝状菌组的两个中国新记录种

王 龙金世宇

(1.中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室,北京 100101;2.北京市京西林场,北京 102300)

0 引言

篮状菌属(TalaromycesC.R.Benj.)于1955年建立[1],是发菌科(Trichocomaceae)的一个物种较多的属。篮状菌的产分生孢子结构一般为对称双轮帚状枝(symmetrical biverticillate penicillus),有些种会产生裸囊壳型子囊果的有性繁殖结构。

基于β-微管蛋白基因(β-tubulin gene,Ben A)、钙调蛋白基因(calmodulin gene,Ca M)、RNA 多聚酶Ⅱ第二大亚基基因(DNA-dependent RNA polymerase II second largest subunit gene,Rpb2)和r DNA ITS1-5.8S-ITS2(ITS)的分子系统发育学(molecular phylogenetics)研究显示篮状菌属目前可分8个组(section)约175种[2-5]。篮状菌组(sect.Talaromyces)是篮状菌属已发现物种最多的组,在本论文完成时世界范围内该组共发现76种,中国已发现42种[3-17]。本文报道从我国贵州麻江县、山东青岛沿海滩涂土壤样品中分离得到的两个新记录种,即安妮索菲篮状菌(T.annesophieaeHoubraken)和土壤篮状菌(T.soliJurjevi &S.W.Peterson)。

1 材料与方法

1.1 样品采集和分离

土壤样品采自我国贵州省黔东南苗族侗族自治州麻江县杏山镇、山东青岛沿海滩涂和湖北随州大洪山。样品分离采用改进的倍比稀释涂布平皿法[18-20],菌株保在我国权威菌种保藏机构CGMCC(AS1-1 ＝AS3.16070,QD4-1 ＝AS3.16071,SZ1-1 ＝AS3.16072)。

1.2 传统分类学研究

菌株培养性状的观测采用查氏酵母精琼脂(Czapek yeast autolysate agar,CYA)分别在25、37、5 ℃和麦芽精琼脂(5% malt extract agar,MEA)在25 ℃培养1周后观测,分生孢子和菌丝及渗出液和可溶性色素颜色的名称采用Ridgway的名称[21-23]。显微性状的描述选取MEA 25 ℃培养1周的产孢结构做普通光学显微镜载片观测[2]。

1.3 PCR扩增和测序

基因组DNA 的提取方法及PCR 扩增条件和参数参考Wang and Zhuang[24],Ben A的扩增引物为bt 2a和bt 2b[25],Rpb2引物为T1和E2[13],ITS引物为ITS5和ITS4[26]。PCR 扩增产物经纯化后由诺赛生物技术有限公司进行正向和反向测序。

1.4 分子系统发育学分析

测序得到序列使用Bioedit 7.0.9[27]校对,然后后提交到GenBank(AS1-1＝AS3.16070:Ben A＝MW988086,Rpb2＝MW988088,ITS＝MW965793;QD4-1＝AS3.16071:Ben A＝OK104790,Rpb2＝OK104793,ITS＝OK087306,SZ1-1＝AS3.16072:Ben A＝ MW988087,Rpb2＝ MW988089,ITS＝MW965794)。选择篮状菌组49个物种的模式菌株和本研究的三个菌株进行分子系统发育学分析,以糙刺孢篮状菌组(Sect.Trachyspermi)的艾斯尤特蓝状菌T.assiutensisSamson&Abdel-Fattah作为外群。这些菌株的Ben A-Rpb2-ITS组合序列用MEGA 6[28]进行最大似然法(Maximum Likelihood,ML)做系统树,同时进行自展法(bootstrap)1000次重复评估各分支的可靠性(图1),序列矩阵的“gaps”处理为“partial deletion”[29]。

2 结果

Ben A-Rpb2-ITS组合序列矩阵共1948个位点(site),ML分析的最适替代模型为K2 ＋GI。根据该序列矩阵的分子系统学研究显示菌株AS3.16070与安妮索菲篮状菌的模式菌株CBS 142939聚在一起,bootstrap支持率为100%;菌株AS3.16071和与土壤篮状菌的模式菌株NRRL 62165同在一个分支,bootstrap支持率为99%,菌株AS3.16072 和与T.veerkampii的模式菌株CBS 500.78 聚在一起,bootstrap 值为98%。依据多相分类学分析支持这些菌株的鉴定,经过查询中国已发表的篮状菌物种,确定安妮索菲篮状菌和土壤篮状菌为我国新记录种(图1～图3)。

图1 根据Ben A-Rpb 2-ITS的ML系统发育树

图3 土壤篮状菌AS3.16071的形态特征。

安妮索菲篮状菌(图2)

图2 安妮索菲篮状菌AS3.16070的形态特征

Talaromyces annesophieaeHoubraken,Persoonia 39:461,2017[30]。

在CYA 上25℃培养7 d,形成直径25～26 mm 的菌落,较厚,表面具少量辐射状皱纹;边缘于培养基表面,整齐;菌落绒状;大量产孢,呈水芹绿色Cress Green to Dark Cress Green(R.Pl.XXXI);菌丝硫黄色Sulphur Yellow(R.Pl.V);渗出液稀少,呈无色微滴状;可溶性色素无;背面呈天皇棕色Mikado Brown(R.Pl.XXIX)。

长期以来，我国的传统金融业无法满足居民的投资需求。股票市场波动较大风险高，银行存款收益率低，收益率和风险无法同时满足投资者的需求。个人理财产品的出现很好的解决了这一矛盾，虽然存在一定风险，但是相比于股市，个人理财产品的风险要小很多，与此同时个人理财产品的收益有远远高于银行的固定存款。因此在很大程度上满足了市场上大部分风险厌恶型的投资者。

在MEA 上25 ℃培养7 d,形成直径33～35 mm 的菌落,较薄,表面平坦,边缘完整;菌落绒状;大量产孢,呈豆绿色至艾蒿绿色(Pea Green to Artemisia Green,R.Pl.XXXII);菌丝淡绿黄色Light Viridine Green(R.Pl.VI);渗出液无;可溶性色素无;背面呈摩洛哥红色Morocco Red(R.Pl.VI)。

在查氏酵母精琼脂(CYA)上37 ℃培养7 d,不萌发。

在查氏酵母精琼脂(CYA)上5 ℃培养7 d,不萌发。

产孢结构发生于表面菌丝,孢梗茎(80～)100～250×2～3μm,壁光滑;帚状枝双轮生兼不规则生;梗基每轮4～6个,10～12×2～3μm;瓶梗披针形,4～6个/轮,10～12×2～3μm;孢子近球形至椭球形,2.5～3μm,有时较大可达4μm,壁粗糙。

主要特征:生长适度,形成绒状菌落,在CYA 上分生孢子呈水芹绿色,很像构巢曲霉(Aspergillus nidulans(Eidam)G.Winter)的孢子颜色;帚状枝双轮生兼不规则生,菌丝硫黄色,分生孢子椭球形至近球形,壁粗糙。

分布和基物:贵州省黔东南苗族侗族自治州麻江县杏山镇土壤(AS1-1＝AS3.16070)。

土壤篮状菌(图3)

Talaromyces soli Jurjevic&S.W.Peterson,Fung.Biol.123(10):757,2019[31]。

在MEA 上25 ℃培养7 d,形成直径35～38 mm 的菌落,较厚,平坦,边缘整齐;菌落絮状兼绳状;适度产孢,呈豆绿色Pea Green(R.Pl.XLVII);菌丝淡绿黄色Pale Greenish Yellow(R.Pl.XV);渗出液少量,呈浅褐色;无可溶性色素;背面呈奶油色Cream Color(R.Pl.XVI)。

在CYA 上37 ℃培养7 d,菌落直径25-28 mm,类似于CYA 上25 ℃、7 d。

在CYA 上5 ℃培养7 d,不萌发。

由气生菌丝和绳状菌丝产生产孢结构,孢梗茎(10～)100～200×2.5～3.5μm,壁光滑;帚状枝双轮生,偶见单轮生;梗基每轮4～10个,8～13×2.5～3.5μm;瓶梗披针形,每轮4～10个,9～12×2.5～3.5μm,分生孢子椭球形,3.5～4.5×3～3.5μm,壁光滑。

主要特征:生长适中,形成菌丝绳,菌丝体呈绿黄色,分生孢子呈榆叶绿色;帚状枝双轮生,偶见单轮生;分生孢子椭球形,壁光滑。

分布和基物:山东青岛滩涂土壤(QD4-1＝AS3.16071)。

3 讨论

安妮索菲篮状菌此前只在荷兰发现,GenBank目前只有其模式菌株CBS 142939的序列[30]。我国的菌株AS3.16070在菌落形态上与模式菌株几乎完全相同,其帚状枝及各个部分的形态和维度与模式菌株也非常接近,但我国菌株的分生孢子壁粗糙,而模式菌株的孢子壁光滑,另外我国菌株还产生一些较大的分生孢子,模式菌株则否。该菌株与模式菌株的Ben A序列无差别(MW988086 vs.MF590098),Rpb2序列只差1个碱基(MW988088 vs.MN969199),ITS 序列有2 个碱基的差异(MW965793 vs.MF574592)。Ben ARpb2-ITS组合序列的分子系统发育学分析显示我国菌株与模式菌株同在一个分支且支持率显著(图1)。

土壤蓝状菌此前只发现于美国和尼加拉瓜[31]。我国菌株AS3.16071与模式菌株在CYA 菌落形态上无大差别,例如它们均形成絮状和绳状脏粉色及绿黄色菌丝体,但其分生孢子颜色略有差异,我国菌株的分生孢子呈榆叶绿色而模式菌株的分生孢子呈灰绿色。它们的显微结构几乎无差别,比如他们均由绳状菌丝和气生菌丝产生产孢结构,帚状枝双轮生,偶见单轮生,孢子椭球形,但我国菌株的孢子壁光滑而模式菌株孢子壁稍粗糙。我国菌株与模式菌株的Ben A序列无差异(OK104790 vs.MH792947),Rpb2有2个碱基的差异(OK104793 vs.MH793138),ITS序列完全相同(OK087306 vs.MH793074)。组合序列的分子系统发育学分析显示该菌株与模式菌株同在一个分支且具有显著的支持率(图1)。