HPLC法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量

邹传宗 吴秋钰

摘要 [目的]比较不同产地黄芪中黄芪甲苷含量的大小。[方法]采用高效液相-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定黄芪中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相为乙腈-水（40∶60）;流速为1.0 mL/min;柱温为30 ℃;进样量为5 μL。ELSD检测器漂移管温度为100 ℃;载气压力为200 kPa。[结果]不同产地黄芪中黄芪甲苷含量分别为甘南0.147%、陇西0.117%、岷县0.205%、山西0.182%、张掖0.067%、武威0.045%、庆阳0.097%、渭源0.114%、内蒙古0.087%、新疆0.046%。[结论]不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量差异较大，4个黄芪主产省（自治区）中甘肃产的黄芪中黄芪甲苷含量最高，山西、陕西产的黄芪中黄芪甲苷含量相对较高，新疆产的黄芪中黄芪甲苷含量较低。同一省份中陇西、甘南、岷县、庆阳、渭源县产黄芪中黄芪甲苷的含量较高，而武威和张掖产黄芪中黄芪甲苷的含量偏低。

关键词 黄芪;黄芪甲苷;HPLC;含量测定

中图分类号 R 284  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2022）01-0208-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.01.056

Determination of Astragaloside in Astragalus membranaceus from Different Habitats by HPLC

ZOU Chuan-zong， WU Qiu-yu

（Department of Pharmacy， Gansu Medical College， Pingliang， Gansu 744000）

Abstract [Objective]To determine the content of astragaloside in Astragalus membranaceus from different habitats. [Method]HPLC-ELSD was used to determine the content of astragaloside. The analysis was performed on Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5 μm） column with the mixture of acetonitrile-water（40∶60）as mobile phase， and the flow rate was 1.0 mL/min;the column  temperature was 30 ℃; the temperature of drift tube in ELSD was 100 ℃ and the gas pressure was 200 kPa.[Result] The astragaloside contents in Astragalus membranaceus from Gannan， Longxi， Minxian， Shanxi，Zhangye， Wuwei， Qingyang， Weiyuan， Inner Mongolia and Xinjiang were 0.114%， 0.117%， 0.205%， 0.182%，0.067%， 0.045%， 0.097%， 0.114%， 0.087% and 0.046%. [Conclusion]The content of astragaloside in Astragalus membranaceus from different production areas is quite different. Among them， the content of astragaloside in Gansu is the highest， the content of astragaloside in Astragalus membranaceus produced in Shanxi and Shaanxi is relatively higher， and the content of astragaloside in Astragalus membranaceus produced in Xinjiang is lower.In the same province， the content of astragaloside in Astragalus membranaceus in Longxi， Gannan， Minxian， Qingyang and Weiyuan counties was higher， while the content of astragaloside in Wuwei and Zhangye was low.

Key words Astragalus membranaceus;Astragaloside;HPLC;Content determination

基金項目  甘肃省教育厅项目（2019B-199）。

作者简介 邹传宗（1975—），男，湖北罗田人，副教授，硕士，从事天然药物活性成分研究。

收稿日期 2021-05-17

黄芪为常用中药材，是豆科植物蒙古黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge var.mongholicus（Bunge）Hsiao]或膜荚黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge]的干燥根，具有补气固表、利水消肿、托毒排脓、敛疮生肌等功效[1]。黄芪中的主要化学成分有黄芪多糖、皂苷类、黄酮类和氨基酸等[2]。黄芪甲苷与血浆蛋白结合率高，在肝肺中分布较高，在脑中含量较低，并且具有正性肌力、舒张血管、保护血管内皮细胞、抗炎和抗病毒等作用[3]。众多的研究表明黄芪甲苷是黄芪的主要活性物质[4]，通常将其作为黄芪中药材及其制剂质量控制的主要指标。目前市场上销售的黄芪中药材多为人工栽培品，野生黄芪药材较少，不同来源的黄芪之间黄芪甲苷的含量差异较为显著，从而影响黄芪药材的质量。目前，对黄芪中黄芪甲苷的含量进行定量测定的方法有薄层扫描法（TLCS法）、高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD法）、高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV法）[5]、高效液相色谱-示差折光检测法（HPLC-RI法）、高效液相色谱-质谱检测法（HPLC-MS法）、比色法、荧光法、超高效液相色谱（UPLC法）[6]、薄层色谱-分光光度法、紫外分光光度法[7]等。由于HPLC-ELSD法具有步骤简单、重现性好、灵敏度高、适用性广、干扰因素少等特点，同时也满足了黄芪甲苷的紫外末端吸收没有特征吸收波长的要求[6，8]，因此《中国药典》从2005年开始均采用该法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。该试验采用HPLC-ELSD法来测定不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷的含量，为规范黄芪中药材市场提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器。高效液相色谱仪（Waters e2695型，美国Waters公司）;蒸发光散射检测器（ELSD6000型，埃文森科技有限公司）;微型植物试样粉碎机（FZ102型，天津泰斯特仪器有限公司）;万分之一电子天平（BSA224S型，赛多利斯科学仪器有限公司）;超纯水机（UPL-1-20T型，成都超纯科技有限公司）;电热恒温水浴锅（DK-98-ⅡA型，天津市泰斯特仪器有限公司）;冷却液循环水机（AS600型，北京华澳维科技有限公司）;无油真空泵（HPD-25型，天津市恒奥科技发展有限公司）。

1.1.2

试剂。乙腈（默克股份两合公司，色谱纯）;甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯）;正丁醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯）;氨水（天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯）;95%乙醇（天津市大茂化学试剂厂，分析纯）;超纯水（自制）;D101大孔吸附树脂（东鸿化工有限公司）。黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110781-201717）。

1.1.3 药材。供试验用的10批黄芪饮片分别购于甘肃、内蒙古、山西、新疆等地，均为蒙古黄芪，药材名称及编号分别为甘肃甘南黄芪（001）、甘肃岷县黄芪（002）、内蒙古黄芪（003）、山西黄芪（004）、甘肃陇西县黄芪（005）、甘肃武威黄芪（006）、新疆黄芪（007）、甘肃渭源黄芪（008）、甘肃张掖黄芪（009）、甘肃庆阳黄芪（010）。

1.2 试验方法

1.2.1

色谱条件。色谱柱为Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相为乙腈-水（40∶60）;流速1.0 mL/min;检测器为ELSD6000;漂移管温度100 ℃;载气压力200 kPa。

1.2.2 对照品溶液的制备。精密称取16.23 mg的黄芪甲苷标准品，置于50 mL容量瓶中，加甲醇适量溶解后，稀释定容至刻度，摇匀，即得0.314 5 mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液。

1.2.3

供试品溶液的制备。取黄芪药材粉末约4 g，精密称定，用滤纸包裹置索氏提取器中，加甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，80 ℃水浴加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，加水10 mL微热使溶解，转移入分液漏斗中。分别用40 mL水饱和的正丁醇振摇萃取4次，合并正丁醇液，分别用40 mL氨试液充分洗涤2次，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12.0 cm），以水50 mL洗脱（先加5 mL水，静置15 min，再加45 mL水进行洗脱），弃去水液，再用新配40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用新配70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得[1]。

1.2.4

样品含量测定。取10批黄芪中药材，按照“1.2.3”方法制备供试品溶液。分别精密吸取经0.45 μm微孔滤膜滤过的供试品溶液5 μL，按照“1.2.1”色谱条件进行黄芪甲苷含量的测定，每批样品进样3份取平均峰面积。

2 结果与分析

2.1 精密度试验

取“1.2.2”制备的0.314 5 mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液，分别以5 μL（图1a）和10 μL（图1b）重复进样5次，测得各次峰面积，计算RSD值，进样5 μL时，峰面积的RSD为2.0%，进样10 μL时，峰面积的RSD为1.3%。

2.2 样品含量测定

依照2015年版《中国药典》，用外标两点法对数方程计算黄芪中黄芪甲苷的含量，结果见表1。2015年版《中国药典》规定黄芪中黄芪甲苷的含量不得少于0.040%[1]。由表1可知，此次试验用到的10批黄芪中黄芪甲苷的含量均符合要求。甘肃岷县所产的黄芪中黄芪甲苷的含量最高，为0.205%;甘肃武威所产的黄芪中黄芪甲苷的含量最低，为0.045%。

3 结论

黄芪甲苷被《中国药典》作为衡量黄芪质量优劣的一个标志性成分。目前，市场上的黄芪中药材产地较为混杂，主要来源地有甘肃、内蒙古、新疆和山西等[9]。该试验对10个不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量进行了研究，结果表明，不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量差异较明显，4个黄芪主产省（自治区）中甘肃产的黄芪中黄芪甲苷含量最高，山西、陕西产的黄芪中黄芪甲苷含量较高，新疆产的黄芪中黄芪甲苷含量较低。这一研究结果与孙娟娟等[10-11]对不同产地黄芪中黄芪甲苷含量的结果一致。就甘肃省同一省份而言，陇西县、甘南、岷县、庆阳、渭源县产的黄芪中黄芪甲苷含量较高，武威和张掖产的黄芪中黄芪甲苷含量偏低。这说明即使是同一省份，黄芪中黄芪甲苷的含量也会有较大差异。该研究可为规范中药黄芪中药材市场提供依据。

参考文献

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[6] 张玲，焦博萍，李扉屏.黄芪甲苷含量测定方法研究进展[J].大陆桥视野，2017（6）：89.

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[9] 杨薇，孙志蓉，岳楚红，等.黄芪产地及品种变迁的研究[C]//第三届中国中药商品学术大会暨首届中药葛根国际产业发展研讨会论文集.长沙：中国商品学会，2012.

[10] 孙娟娟.10种中药材道地产地的本草文献研究[D].北京：中国中医科学院，2010：36.

[11] 裴彩云，王宗权，贾继明，等.HPLC-ELSD内标法测定8个产地黄芪药材、饮片中黄芪甲苷的含量[J].中国中药杂志，2011，36（14）：1982-1984.