人类白细胞抗原-G、可溶性血管内皮生长因子受体-1、抗心磷脂抗体与复发性流产临床特征相关性分析

王蕴颖， 杨 英， 赵 静， 何亚绒， 张 平， 陈宥艺， 刘 莹， 张怡冰

1.西安市第四医院 生殖医学中心，陕西 西安 714000；2.空军军医大学西京医院 妇产科生殖中心,陕西 西安 710032；3.西安交通大学附属第一医院 生殖医学中心，陕西 西安 710061；4.北部战区总医院 卫勤部，辽宁 沈阳 110016

复发性流产是连续出现3次或者3次以上自然性流产[1]。抗心磷脂抗体(anticardiolinpin antibody，ACA)是一种自身免疫性抗体，与复发性流产的发病存在密切关系[2-3]。人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)是一种组织相容性复合体，可参与到调控移植排斥反应以及逃避免疫应答中，在复发性流产中具有重要意义[4]。可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1，sFlt-1)是一种由胎盘滋养细胞分泌的因子，具有促进血管生成的效果，但目前在复发性流产中运用仍较少[5]。本研究旨在探讨HLA-G、sFlt-1、ACA与复发性流产临床特征的相关性。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取西安市第四医院自2017年1月至2020年1月收治的78例复发性流产患者为B组。纳入标准：符合《中华妇产科学》[6]中复发性流产诊断标准；伴侣双方染色体正常；年龄>18岁；神经意志正常，可配合治疗。排除标准：合并严重肝肾功能异常；合并遗传性易栓症；存在解剖学畸形因素、宫内感染因素；资料不完整。另选取同期于我院体检的78例健康人群为A组。本研究经医院伦理委员会批准。所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法 抽取两组空腹静脉血2.5 ml，高速离心分层，分离血清。HLA-G选取美国TSZ Biosciences公司的HLA-G检测试剂盒，采用双抗原夹心法进行检测。sFlt-1选取江莱生物技术有限公司的sFlt-1检测试剂盒进行检测。ACA采用固相夹心法酶联免疫吸附实验进行检测，根据待测样品数量加入标准品的数量决定所需要的板条数。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加1次，每孔加入底物A、B各50 μl，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min，避免光照，取出酶标板，迅速加入50 μl终止液，加入终止液后应立即测定结果，在450 nm波长处测定各孔的光密度(optical density，OD)值。

1.3 观察指标 记录并比较两组血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平与临床病理特征。

2 结果

2.1 两组血清HLA-G、sFlt-1与ACA水平比较 B组血清HLA-G、sFlt-1与ACA水平均显著高于A组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组血清HLA-G、sFlt-1与ACA水平比较

2.2 两组临床病理特征比较 A组合并生殖系统感染的比例高于B组，获得性子宫异常的比例低于B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组临床病理特征比较/例(百分率/%)

2.3 血清HLA-G、sFlt-1和ACA水平与患者临床病理特征相关性分析 血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平均与患者获得性子宫异常存在明显正相关性(r= 0.395、0.488、0.368，P<0.05)。血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平均与患者合并生殖系统疾病存在明显正相关性(r=0.405、0.373、0.354，P<0.05)。

2.4 血清HLA-G、sFlt-1、ACA对于复发性流产的预测价值分析 血清HLA-G、sFlt-1、ACA对于复发性流产的灵敏度与特异度均较高。见表3。血清HLA-G、sFlt-1、ACA预测复发性流产的ROC曲线见图1。

表3 血清HLA-G、sFlt-1、ACA对于复发性流产的预测价值分析

图1 血清HLA-G、sFlt-1、ACA预测复发性流产的ROC曲线

3 讨论

复发性流产为临床上较常见的妊娠性合并症之一，在我国的发病率高达3%[7-8]。复发性流产的发病机制较为复杂，主要可能与免疫因素有关，而免疫因素主要包含自身免疫因素以及同种免疫因素[9-10]。有研究发现，自身免疫异常与流产紧密相连，这可能因为患者机体存在一些危险因子，使机体的免疫功能异常[11-12]。HLA-G为人类白细胞抗原-G亚型，最开始在做器官移植的患者中检测到，与患者免疫耐受以及肿瘤的逃逸有关[13]。HLA-G能够激活绒毛着床以及血管的生长，在母体妊娠早期具有一定表达，能够稳定母胎免疫耐受。HLA-G有严格的组织特异性，在母胎界面绒毛滋养层细胞、女性生殖道以及卵泡液中均有一定的表达，为参与到胚胎着床的免疫耐受原因之一[14]。sFlt-1是一种内源性可溶因子，血管内皮生长因子具有较强的亲和力，与其结合后，能够抑制血管内皮生长因子的含量，而血管内皮生长因子是胎儿生长过程中重要的因子，其水平的缺失会引起流产[15-16]。

本研究结果表示，B组血清HLA-G、sFlt-1与ACA水平均显著高于A组，差异均有统计学意义(P<0.05)。过高的HLA-G水平会抑制T细胞以及NK细胞，对胎儿免受母体免疫系统起到过度作用；异常的血管内皮生长因子会对胚胎血管生成造成严重影响，并引发流产。本研究结果显示，A组合并生殖系统感染的比例高于B组，获得性子宫异常的比例低于B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。这表明，女性在怀孕以前需要排查生殖道和内分泌系统的异常，尽量降低风险。有研究发现，绒毛外滋养层HLA-G表达异常或者在与HLA-C发生接触时出现分泌因子障碍，会导致滋养层受到免疫攻击进而引发流产。本研究表示，血清HLA-G对于患者发生复发性流产特异性和灵敏度均较高。这可能因为HLA-G水平下降会引起NK细胞与T淋巴细胞的结合，会引发抑制性信号转入障碍，进而使出现母体发起免疫攻击，引发流产。本研究结果显示，血清sFlt-1对于患者发生复发性流产特异性与灵敏度均较高。ACA作为一种自身免疫性抗体作用在滋养层表面的磷脂依赖抗原，对于其粘附和融合造成一定影响，使合体滋养层细胞的生成受到抑制，会引起子宫对于胚胎的接纳性下降，同时ACA作用在胎盘血管内皮细胞膜的磷脂上，会造成胎盘血栓生成，同时收缩血管，引发胎儿缺氧死亡。

综上所述，HLA-G、sFlt-1、ACA均与复发性流产紧密相关，且与患者发生生殖系统感染以及获得性子宫异常具有相关性，对于患者发生复发性流产具有较高的预测价值。