水产品中孔雀石绿的常规检测方法

倪 佳

（哈尔滨市农产品质量安全检验检测中心，黑龙江 哈尔滨 150000）

引言

我国有着非常丰富的水产资源，在世界上属于水产养殖大国。水产品作为我国城乡居民摄入动物蛋白的主要来源之一，在居民的生产生活中占据着极其重要的地位。随着我国科学技术的进步，经济的快速发展，人民生活水平不断提高，对水产品的需求量也不断增长。在养殖过程中，为降低生产成本，使用含有激素或者发生霉变的饲料，滥用抗生素、激素等渔用药物防治水产动物疾病，导致水产品药物残留超标，严重危害人类健康。加强水产品中的渔药检测就显得尤为重要，本文阐述及归纳了水产品中孔雀石绿检测的常用方法，为水产品药物残留检测提供重要依据，对保障人类食品安全具有一定的意义。

1.孔雀石绿的常规检测方法

1.1 前处理方法

1.1.1 液液萃取

液液萃取也称溶剂萃取或抽提，是指利用在溶液系统中两种或多种物质组分溶解度或分配系数不同的原理，使溶质物质从其中一种溶剂中转移到另一溶剂中提取方法。通过静置过程，将出现分层现象的两种互不相容的物质进行分离的操作，叫做分液。提取孔雀石绿的过程中常用的萃取溶液是二氯甲烷和无水乙醇。它的优点是可以在常温条件下进行，操作较为方便，不需要特殊的实验装置和操作技术；缺点是有机溶剂的消耗量较大，挥发性较强的溶剂应尽量在通风橱内操作并做好个人防护工作。

1.1.2 固相萃取

固相萃取是于20世纪80年代发展起来的一种样品前处理技术，通常与液相色谱技术相结合，主要用于样品前处理的分离、提纯和浓缩过程。它的原理是通过固相萃取小柱中的固体吸附剂吸附液体中的目标化合物，将样品的基质与干扰物有效的分离，再用洗脱液进行洗脱或者通过加热过程使目标化合物解吸附，最后经过氮吹或者旋蒸，达到浓缩与富集目标化合物的目的。固相萃取的优点是操作简单，分离时间短，试剂消耗量少，可有效提高被测样品的回收率，对于痕量分析物有较为出色的检测能力；缺点是成本较高，属于一次性使用的实验耗材，同时需要专业人员进行方法开发。

1.1.3 分散固相萃取净化技术

分散固相萃取净化技术也称为QuEChERS技术，是2003年由美国农业部Anastassiades等人开发，提出之后又经过多次验证和方法改进正式确立。QuEChERS是由几个英文单词首字母缩写而成，即Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged和Safe，代表快速，简单，廉价，高效，耐受和安全的含义。它的原理与固相萃取相似，通过吸附剂填料吸附样品基质中的杂质，达到提纯净化的目的。QuEChERS主要是针对水果蔬菜中的农药残留检测而建立，但由于其操作简便、快捷的特点，近年来也逐渐应用于兽药残留检测领域。

1.2 分析检测技术

1.2.1 气相色谱法

气相色谱法是指用气体作为流动相的一种色谱分析方法。在实际工作中，只要是气化不分解并且高温条件下稳定的的物质，基本上都可以用气相色谱法进行检测。对于一些难以气化或者加热条件下不稳定的物质，可以通过化学衍生的方法，利用气相色谱法进行检测。气相色谱法的优点是分离速度快，灵敏度高，应用范围较广，可以分析沸点相近或高沸点的物质和固体样品。缺点是在进行定性分析时，需要用已知物与检测物的色谱峰进行对比，或者要与质谱进行联用，才能获得较为准确的结果；定量分析时，需要用标准品已知物对检测样品的数据进行校正。

气相色谱仪的检测器种类繁多，目前常用的有：电子捕获检测器（ECD）、火焰光度检测器（FPD）、热导检测器（TCD）、氢火焰离子化检测器（FID）、氮磷检测器（NPD）等。气相色谱法的主要应用是检测农药残留中的有机氯和有机磷类农药，食品添加剂、生物毒素和生物碱类的药品等。

1.2.2 气相色谱-质谱联用法

气相色谱-质谱联用法是通过特殊“接口”将气相色谱仪与质谱联接起来，既可以利用气相色谱仪中毛细管的高分离能力，分离出样品中的各个组分，又利用质谱仪准确鉴定出化合物的结构，对各组分同时进行定性与定量分析。其具有独立、稳定、高效的离子源（EI）系统，使检测工作更加准确高效的同时，实现了更好的重现性。目前，气质联用技术主要应用在有机磷、有机氯和氨基甲酸酯类的农药残留检测，也逐步用于部分兽药残留的检测分析，例如动物源性食品中磺胺类药物，水产品中的氯霉素和孔雀石绿的检测等。

1.2.3 高效液相色谱法

高效液相色谱法是指利用高压输液系统，以液体作为流动相的一种色谱分析技术。流动相可以是组分单一的溶剂或者是具有不同比例的混合溶液、缓冲液等。为了提高检测物质的分离效果，可以通过调节流动相的pH值或溶液组成配比来实现。高效液相色谱非常适合分离分析不易挥发和对加热条件敏感的物质，以及离子型化合物和生物大分子。常用的检测器有紫外吸收检测器（UV），荧光检测器（FD），示差折光检测器，光电二极管阵列检测器（PDA）等。

1.2.4 高效液相色谱-质谱联用法

高效液相色谱-质谱联用法适合高沸点及热不稳定性物质的分析，具有高灵敏度和高选择性的优点，检测限也进一步提高。在一定程度上，可以弥补气相色谱-质谱联用的不足。目前是分离、鉴定和检测多组分化合物的理想方法。现在液质广泛应用于兽药残留检测领域中，例如磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和孔雀石绿。

2.研究目的与意义

孔雀石绿作为一种三苯甲烷类化合物，在许多研究中表明，三苯甲烷容易引起生命体器官组织脂质过氧化，易使器官内的氧压发生变化，加速细胞的死亡，从而引发肿瘤。可致肝癌、甲状腺癌，在动物试验中发现，其对妊娠中的兔子有致畸作用，对动物肝、肾、心、脾、肺等器官组织引起中毒反应。同时，在针对孔雀石绿和隐色孔雀石绿的致基因突变的试验中，结果均为阳性。目前，已有报道称从生病的鲑鱼中分离出了能耐受孔雀石绿的菌株。耐药性的产生导致生产过程中孔雀石绿的用药量逐渐增大，人类通过日常生活中食用水产品这一渠道，很容易获得具有抗药性的细菌，使得人类致病菌抗药性的能力增强，从而对人类的身体健康造成严重威胁。所以，对孔雀石绿的检测研究刻不容缓，目前也已有较为成熟的标准方法，如何在现有的检测方法基础上，优化改良更加高效可靠的检测方法至关重要，也是未来渔药兽药残留检测技术发展的重要方向。