大兴安岭不同野生植物叶片水提物抗氧化活性研究

李静，李正华，王艳敏，李海霞

(黑龙江省林业科学研究所，哈尔滨 150081)

自由基为生物体中生化反应的中间代谢物，具有较强的化学活性，是生物机体防护系统的一部分。当生物有机体产生的自由基超出防护系统所具有的清除能力时，会直接或间接攻击体内的生命大分子物质、细胞、组织及其器官，对其造成一定损伤，诱发一系列疾病，活性氧自由基及其诱发的氧化反应是导致机体衰老和某些病变的重要因素[1-4]。

植物体内含有抗氧化成分，如维生素E、维生素C、酚类化合物、胡萝卜素、磷脂、萜烯等，这些物质可以清除自由基，从而保护生物机体[5-7]。大兴安岭植物种类众多，本试验研究了15种大兴安岭常见野生植物叶片水提物的体外抗氧化活性，比较这些野生植物叶片抗氧化活性大小，为开发功能饮品或抗氧化剂等提供初步的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

6月份采集15种大兴安岭野生植物叶片进行抗氧化活性测定，分别为黄芪(RadixAstragali)、兴安杜鹃(RhodoendrondauricumL.)、蒲公英(Taraxacummongolicum)、四叶沙参(Adenophoratetraphylla)、蓝莓(《VacciniumuliginosumLinn)、金莲(TrolliuschinensisBunge)、蓝靛果忍冬LoniceracoeruleaL.)、山葡萄(Vitisamurensis)、红花鹿蹄草(Pyrolaincarnata)、落叶松(LarixL.)、刺玫(RosadavuricaPall.)、云杉(Piceaasperata)、树莓(Rubusoccidentalis)、车前(Plantagoasiatica)、红豆越桔(Vacciniumvitis-idaeaL.)。

1.2 试验方法

1.2.1 样品制备方法

取新鲜材料用液氮研磨后，精确称取5 g样品加入100 mL去离子水，80 ℃水浴回流提取1 h，抽滤，定容于50 mL棕色容量瓶，待测。

1.2.2 体外抗氧化能力测定

1.2.2.1 抑制羟自由基测定：参考南京建成试剂盒说明书测定。配制应用液，再按表 1 加入各试剂，充分混匀，37 ℃恒温水浴 1 min后，加显色剂2 mL，混匀，静置20 min，测 OD550。

表1 羟自由基试剂配制表 mL

1.2.2.2 抗超氧阴离子自由基测定：参考南京建成试剂盒说明书测定。配制应用液，再按表 2 加入各试剂，充分混匀，37 ℃恒温水浴 40 min后，加显色剂2 mL，混匀，静置10 min，测 OD550。

表2 抗超氧阴离子自由基试剂配制表 mL

1.2.2.3 总抗氧化能力测定:参考南京建成试剂盒说明书测定。配制应用液，再按表3加入各试剂，充分混匀，37 ℃恒温水浴 30 min后，加显色剂2 mL，混匀，静置10 min，测 OD520。

表3 总抗氧化能力测定试剂配制表 mL

1.3 数据处理

采用统计分析软件 SPSS 22.0 和 Excel 2010进行数据统计和单因素方差分析。

2 结果与分析

2.1 羟自由基抑制能力

15种植物叶片水提物抑制羟自由基活力结果见图1所示，范围在5.19～22.07 U/mg，且不同植物叶片水体物抑制羟自由基活力存在显著性差异(Sig.<0.05)，方差分析结果见表4。

表4 15种植物叶片水提物抑制羟自由基活力方差分析

图1 15种野生植物叶片水提物抑制羟自由基活力

由图1可知，树莓叶片水提物清除羟自由基能力最强，达22.07 U/mg，云杉嫩叶清除能力最弱，为5.19 U/mg。经多重比较发现(表5)，树莓叶片清除能力与其他植物差异均显著，而蒲公英、蓝靛果忍冬、四叶沙参、车前之间无显著差异；兴安杜鹃、红豆越桔、落叶松针之间无显著差异；黄芪和金莲叶之间无显著差异。在生物机体内，羟自由基极不稳定，它产生会夺取DNA、蛋白质和脂质的电子，破坏生物体细胞结构，损害机体[8]。从测定结果可以看出，15种野生植物叶片水提物对羟自由基有较好的清除能力。

表5 15种野生植物叶片水提物抑制羟自由基活力多重比较

2.2 超氧阴离子抑制能力

15种植物叶片水提物抑制超氧阴离子能力见图2，范围在0.81～2.89 U/mg(图2)，且不同植物叶片水提物抑制超氧阴离子能力存在显著性差异(Sig.<0.05)，方差分析结果见表6。

图2 15种野生植物叶片水提物抑制超氧阴离子活力

平方和df均方FSig.组间17.007141.21575.8610.000组内0.480300.016总计17.48844

由图2可知，红豆越桔叶片水提物抑制超氧阴离子能力最强，达2.89 U/mg，与其他植物抑制超氧阴离子能力差异显著；四叶沙参叶片清除能力最弱，为0.81 U/mg。经多重比较发现(表7)，四叶沙参和 落叶松针之间差异不显著；树莓、山葡萄、兴安杜鹃、红花鹿蹄草之间差异不显著；刺玫叶和云杉嫩叶之间差异不显著；金莲叶与蓝靛果忍冬之间差异不显著。

表7 15种野生植物叶片水提物抗超氧阴离子活力多重比较

2.3 总抗氧化能力

15种植物水提物的总抗氧化能力见图3。针对聚类分析得出的四类植物总抗氧化能力进行方差分析与多重比较(表8、表9)，结果显示，四类植物的抗氧化能力差异显著(Sig.<0.05)，第一类(黄酮含量高)与第二类(总糖与Mn含量高)的抗氧化活性显著高于第三类和第四类，且第一类与第二类差异不显著(Sig.>0.05)。第一类植物黄酮含量较高，有研究报道黄酮类物质具有很强的抗氧化作用，这与本研究结果一致。据述小英[9]研究枸杞中多糖含量与抗氧化能力呈现显著的正相关关系，在本研究中第二类植物的可溶性总糖含量与Mn含量较高，其抗氧化能力也较第三类和第四类要强。

图3 四类植物抗氧化能力测定

平方和df均方FSig.组间1.08430.3615.7050.012组内0.760120.063总计1.84415

表9 四类植物抗氧化能力多重比较

3 结论与讨论

本试验以大兴安岭15种野生植物为材料，对其抗氧化活性进行了研究。主要结果如下：

15种野生植物叶片水提物均具有一定的体外抗氧化能力，但不同类植物间总抗氧化能力差异显著，第一类(黄酮含量高)与第二类(总糖与Mn含量高)的抗氧化活性显著高于第三类和第四类。抑制羟自由基能力范围在5.19～22.07 U/mg，清除能力最强的树莓叶也属于第一类植物。超氧阴离子抑制能力范围在0.81～2.89 U/mg，清除能力较强的红豆越桔叶、蓝靛果忍冬叶、金莲叶与蓝莓叶分别属于第一与第二类植物，而第一类植物黄酮含量较高，第二类植物可溶性总糖含量较高，说明黄酮与可溶性总糖在抗氧化能力中起主要作用。

植物抗氧化活性大小可能是多种活性物质共同协作的结果，而不同活性物质极性不同，因此还需要探讨这些植物叶片内活性物质的种类，提供与之相适合的提取溶液，进一步研究和开发它们的价值。