血清甘胆酸及可溶性生长刺激表达基因2蛋白水平与慢性乙型肝炎患者病毒载量的相关性

李 健, 李连文, 王丽华, 况 宇

(重庆市江津区中心医院 检验科, 重庆, 402260)

目前，中国慢性乙型肝炎(CHB)的发病率较高，据统计数据[1]显示, 2016年中国有2 000万名CHB患者以及1亿名乙型肝炎病毒(HBV)携带者。积极采用抗病毒治疗以控制病情是目前CHB患者主要的治疗方式[2]。CHB患者病情进展与HBV持续感染密不可分，相关研究[3]证实, HBV病毒载量与CHB患者肝纤维化、炎症活动度有关。CHB患者病情的发展伴随肝功能的损害，肝功能指标则能反映肝功能的状态，其中血清甘胆酸(CG)预测肝脏损伤的灵敏度较高。研究[4]证实，血清CG水平可作为判断肝细胞损害及严重程度的重要指标。可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)是白细胞介素(IL)-33的受体，已被研究[5]证实在CHB患者中过表达，与CHB患者的肝纤维化进展及病情严重程度密切相关。上述研究均指出CG、sST2与CHB患者病情有关，但均未证实其与病毒载量的关系。本研究比较不同病毒载量患者的血清CG、sST2水平，分析血清CG、sST2水平与CHB患者病毒载量的关系，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

前瞻性纳入2019年3月—2020年3月本院83例确诊CHB患者作为研究对象，患者及家属均对本研究知情，自愿参与研究，签署研究知情同意书。83例CHB患者中，男46例，女37例; 年龄30～57岁，平均(40.45±3.48)岁; 体质量指数为18.16～25.45 kg/m2, 平均(21.97±0.49) kg/m2; 病程1～12年，平均(5.05±0.70)年。本研究获得本院伦理委员会审核批准。

纳入标准: ① 符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[6]中CHB诊断标准者; ② 除肝脏外的重要脏器功能正常者; ③ 均参照指南接受抗病毒治疗者。排除标准: ① 合并其他病毒性肝炎者; ② 合并血吸虫性肝硬化或酒精性肝炎等其他肝脏疾病者; ③ 合并药物性肝损伤者; ④ 并发全身感染性病变者; ⑤ 研究前1个月内使用免疫制剂者。

1.2 方法

1.2.1 基线资料: 包括性别、年龄、体质量指数、病程。

1.2.2 血清学相关指标: 采集患者就诊当日5 mL空腹静脉血, 3 000 转/min离心10 min, -20 ℃保存待测，采用德国罗氏COBAS8000全自动生化分析仪以及重氮法检测总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL), 采用比色法检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT), 采用乳胶增强免疫比浊法检测CG, 采用sST2试剂盒(美国Bio Rad公司，生产批号20190122)以及酶联免疫吸附法测定血清sST2水平。

1.2.3 分组方法: 就诊当天，测定患者HBV-DNA病毒载量以评估病情严重程度，并据此将患者分为高病毒载量组(HBV DNA载量≥106copies/mL)、低病毒载量组(HBV DNA载量103～<106copies/mL)以及阴性组(HBV DNA载量<103copies/mL)。HBV-DNA载量采用EDTA抗凝血法检测，仪器为实时荧光定量基因扩增仪(罗氏LightCycler480)。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 病毒载量情况及基线资料

经检测，本研究纳入的83例CHB患者中, 32例属于高病毒载量(38.55%), 21例属于低病毒载量(25.30%), 30例HBV DNA检测结果呈阴性(36.14%)。3组患者性别、年龄、体质量指数、病程比较，差异无统计学意义(P>0.05); 高病毒载量组TBIL、DBIL、AST、ALT、CG、sST2表达水平高于低病毒载量组、阴性组，差异有统计学意义(P<0.05), 低病毒载量组与阴性组TBIL、DBIL、AST、ALT、CG、sST2表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组患者基线资料比较

2.2 血清指标与CHB患者病毒载量的关系

Kendall′s tau-b相关评价结果显示, TBIL、DBIL、AST、ALT、CG、sST2表达与CHB患者病毒载量呈显著正相关(Kendall′s tau-b=0.485、0.476、0.523、0.624、0.665、0.598,P均<0.001)。

2.3 CHB患者血清CG、sST2水平的相关性

一般线性双变量Pearson直线相关性分析显示, CHB患者血清CG、sST2表达呈显著正相关(r=0.818,P<0.001)。见图1。

3 讨 论

HBV病毒载量反映HBV在CHB患者体内的复制情况，与病情恶化速度相关，但HBV基因检测无法体现CHB病情程度的影响因素[7]。CG分泌、合成于肝细胞，并由肝细胞重新摄取和贮存。一般情况下血液内CG含量较低，当肝细胞受损时, CG无法被有效摄取，造成血清CG含量升高[8]。sST2联合IL-33能通过介导细胞内信号传导而激活炎性反应，相关研究[9]表明sST2在不同病情HBV感染患者中的表达不同，可能与HBV感染后病情的进展有关。

本研究结果显示, TBIL、DBIL、AST、ALT、CG、sST2表达与CHB患者病毒载量呈显著正相关，其中TBIL、DBIL、AST、ALT为常见的肝功能指标，而肝功能损伤与病毒载量的相关性已有较多研究证实，本研究重点分析CG、sST2与CHB患者病毒载量相关的可能机制。CG由胆酸与甘氨酸结合，合成于肝细胞，肠肝循环是正常的CG代谢路径[10]。通常情况下, CG以蛋白结合的形式存在于人体血清中，血清CG含量较低，当肝脏细胞受损时，对CG摄取能力下降, CG可释放入血[11]。HBV病毒载量较高的CHB患者, HBV侵袭力较强，病情发展快，肝脏受损程度更严重，更大程度上造成肝细胞摄取CG的能力降低，从而增加血清CG含量[12-13]。CG过度表达会引起胆汁酸代谢紊乱，对肝细胞产生刺激，诱导内结缔组织增生，造成肝纤维化或加重肝纤维化，导致CHB病情恶化[14]。当CHB患者肝脏组织持续受到HBV侵犯后，可造成肝内炎症，导致组织坏死，刺激IL-33分泌[15]。IL-33可通过诱导T淋巴细胞与自然杀伤细胞加速肝纤维化进程，从而加重CHB患者病情[16]。sST2作为IL-33受体，与IL-33结合后可启动细胞内信号转导，使炎性反应系统被激活，释放IL-4、IL-13等炎性因子，进一步导致CHB病情加重[17]。

研究[18]发现, IL-33结合sST2还可启动一系列炎症反应。炎症反应的加重对CHB病情影响较大，炎症可以引起或加重Th1/Th2失衡，加重CHB。若监测CHB患者CG、sST2指标升高，可能提示病情加重，应该强化抗病毒治疗并结合其他对改善CG、sST2水平有意义的方法。本研究证实CHB患者血清CG、sST2表达呈正相关，原因可能是sST2与IL-33水平升高并结合后，将促进炎症反应进一步进展，导致肝脏损伤程度加重，造成肝细胞摄取CG能力降低而增高血清CG水平。

综上所述, CHB患者血清CG、sST2水平与病毒载量相关，可能是促进患者病情进一步进展的重要原因。