复方丹参注射液对子痫前期大鼠凝血功能和肾功能的影响研究*

彭琼琳，黄 敏

(鄂钢医院妇产科，湖北 鄂州 436000)

子痫前期(PE)是指孕前血压正常，但孕周20周后开始出现以尿蛋白和血压升高并伴发凝血功能障碍的一种妇产科常见疾病，如治疗不及时，则最终发展为重度PE或子痫[1]。PE与孕妇多胎、既往病史或年龄等高危因素或免疫因素有关，造成孕产妇和围产儿死亡，仅次于产后出血和羊水栓塞风险[2]。中西医结合治疗可改善PE患者血压状况、提高自然分娩率和总有效率并降低剖宫产率、产钳助产率，在新生儿合并症及妊娠结局等方面均优于单纯西医治疗[3]。复方丹参注射液可显著降低PE发病率，促进胎儿的预后并减少不良妊娠结局[4]。本研究在建立SD大鼠PE模型的基础上，通过经尾静脉注射给药的方法观察复方丹参注射液对PE大鼠凝血功能和肾功能的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 SPF级SD大鼠60只(雌鼠40只，雄鼠20只)，10～11周龄，体重(262.50±10.99)g，由武汉金塘鑫养殖科技有限公司提供，许可证：[SCXK(鄂) 2018-0015]。每晚18:30按雌雄2∶1比例合笼，过夜后于清晨 8：00取雌鼠，以显微镜下观察阴道分泌物涂片见到精子者为受孕大鼠，记受孕 0 d。将受孕的40只雌鼠随机均分为对照组(A组)、模型组(B组)、低分子肝素钠(C组)和复方丹参注射液组(D组)并分组饲养。实验大鼠自由饮水、喂养普通饲料。动物房温度24～25 ℃，相对湿度50%～75%，勤换垫料，保证大鼠福利。

1.1.2试剂与仪器 复方丹参注射液(广东新峰药业股份有限公司，批号：Z44021269)，低分子肝素钠(吉林华康药业股份有限公司，批号：0190210)，亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME，上海士锋生物科技有限公司，批号：A0015)，戊巴比妥钠(上海第一化工厂，批号：0891124)，大鼠纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒(上海泽叶生物科技有限公司，批号：ZY-FG-R198a)，大鼠D-二聚体(D-D)检测试剂盒(基蛋生物科技股份有限公司，批号：Q0912)，多功能酶标仪(美国Biotek公司)，MedLab-MS60X型大鼠无创血压测试系统(南京美易科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1合体滋养细胞微绒毛(STBM)培育 先配制100 mL含1%青-链霉素的NaCl溶液，取提前交配成功的妊娠孕鼠5只(第18天)，用3%戊巴比妥钠麻醉后固定、剖宫并迅速摘取孕鼠胎盘。使用PBS冲洗干净后剪成约1 mm×1 mm×1 mm，然后将组织块放入上述溶液中 4 ℃振荡过夜收集 STBM富集，再用PBS缓冲液将STBM稀释成0.14 mg/mL的溶液。

1.2.2PE模型建立及治疗 待大鼠妊娠第5天时，除A组外，其他组均经尾静脉注射2 mL稀释后的STBM(每天1次，连续注射10 d)；再于第13天按125 mg/kg剂量从皮下注射L-NAME，每天1次，连续注射7 d[5]。本实验采用MedLab-MS60X型大鼠无创血压测试系统测量血压并以孕鼠血压大于或等于18 kPa和尿蛋白定量(UP)≥4.0 mg为成模标志[6]。治疗均按每天1次、经尾静脉注射给药，四组治疗7 d。其中A、B组注射生理盐水(1 mL/d)对照；C组注射低分子肝素钠，剂量为10 mg/(kg·d)；D组按10 mg/(kg·d)注射复方丹参注射液。

1.2.3观察指标

1.2.3.1肾功能 将孤养大鼠置于标准代谢笼内中，收集24 h 尿量(UV)，采用乳胶增强免疫比浊法测定UP，全自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)和血肌酐 (SCr)。

1.2.3.2凝血功能 (1)采用断尾法判定出血时间(BT)，玻片法判定凝血时间(CT)。(2)内/外源性凝血因子 Xa和活化部分凝血活酶时间(APTT)采用凝血因子生成实验。检测时断尾取全血1 mL，再准确提取全血中105个细胞，分别加入含130 nmol/L因子X、l nmol/L因子IXa、5 nmol/L因子Ⅷ、 0.2 nmol/L凝血酶(Ⅱ a)和5 mmol/L CaCl2缓冲液，孵育10 min后用7 mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)终止；加1 mmoL显色底物，用酶标仪在405 nm波长处内/外源性凝血因子 Xa和APTT[7]。(3)干式免疫荧光法检测D-D和FIB，检测时按试剂说明进行。

1.2.3.3仔鼠发育情况 治疗7 d后，用3%戊巴比妥钠麻醉后固定、剖宫并迅速摘取孕鼠胎盘。清点死胎数和存活仔鼠数量并计算死胎率[死胎率=死胎数/(存活仔鼠数量+死胎数)]，测量仔鼠身长、体重并称胎盘湿重。

2 结 果

2.1各组大鼠肾功能变化比较 与A组比较，B、C组24 h UV降低，UP、BUN和SCr水平均明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；C组上述指标与B组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。与B、C组比较，D组24 h UV明显升高，UP、BUN和SCr则均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组大鼠肾功能变化比较

2.2各组大鼠凝血功能变化比较 与A组比较，B组APTT、BT和CT均缩短，内/外源性凝血因子Xa、D-D、FIB水平均升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与B组比较，C组凝血指标中APTT、BT和CT均延长，内/外源性凝血因子Xa、D-D、FIB水平均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。D组与C组相似，但D组凝血指标中的APTT、BT、CT、内/外源性凝血因子Xa的作用没有C组强，差异均有统计学意义(P<0.05)；C、D组D-D、FIB水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 各组大鼠凝血功能变化比较

2.3各组大鼠仔鼠发育情况比较 B组存活仔鼠数量低于A组，死胎率较A组高，仔鼠身长、体重和胎盘湿低于A组，差异均有统计学意义(P<0.05)。C、D组存活仔鼠均较B组增多，死胎率均较B组降低，仔鼠身长、体重和胎盘湿重均较B组高，差异均有统计学意义(P<0.05)；C、D组上述仔鼠情况比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 各组大鼠仔鼠发育情况比较

3 讨 论

PE患者除妊娠合并高血压、水肿外，还表现为肾功能损伤和凝血功能障碍，表现为UP、BUN和SCr升高，24 h UV减少，肾损伤逐步加重[8]。其中凝血功能紊乱患者若不及时控制，可能导致死胎或流产等不良妊娠结局，严重者还会引起弥散性血管内凝血(DIC)并最终造成多器官功能衰竭[9]。由此可见，促凝血-抗凝因子失衡是导致PE病理进展的重要环节，在治疗中纠正血液高凝状态对PE及针对其并发症的预防和治疗尤其重要[10]。

本研究发现，复方丹参注射液组(D组)的肾功能改善明显，D组UP、BUN和SCr均较模型组(B组)明显降低，24 h UV明显较B组增多，提示复方丹参注射液可改善PE模型大鼠肾功能。另外，D组促凝血-抗凝因子失衡现象也基本得以纠正，D组大鼠APTT、BT、CT均较B组延长，内/外源性凝血因子Xa、D-D和FIB均较B组降低，提示复方丹参注射液可纠正PE模型大鼠促凝血-抗凝因子失衡现象，即纠正凝血功能紊乱现象。复方丹参注射液主要成分为丹参素和原儿茶醛[11]。丹参素具有扩张血管并改善循环，从而增加肾血液流量，达到利尿和肾功能恢复的功效[12]。其活血化瘀功效可产生抗血小板凝集作用，通过改善血液流变学特性而影响凝血机制[13]。还可控制血压、改善肾功能、纠正凝血功能紊乱[14]。使用复方丹参注射液在辅助治疗PE时可延长孕周，促进新生儿发育，有利于良好的妊娠结局[15]。在本研究中，D组存活仔鼠数量较B组增多，死胎率降低，仔鼠身长、体重和胎盘湿重均高于B组，佐证了复方丹参注射液有利于良好的妊娠结局。

临床上如何有效逆转孕妇高凝状态及预防并发症方面，主要应用药物进行抗凝、降压来改善组织灌注，从而在微观层面抑制PE疾病进展以达到治疗的目的[16]。低分子肝素钠具有抗Xa活性，通过促进抗凝血酶Ⅲ结合凝血酶抑制凝血酶和多种凝血因子活动，降低体内、体外血栓和动静脉血栓的形成而发挥较强的抗凝作用[17]。本研究观察到低分子肝素钠(C组)对肾功能几乎无作用，但复方丹参注射液对却能明显改善肾功能，这也提示后者在改善肾功能方面优于前者。另外，低分子肝素钠对凝血-纤溶系统影响较复方丹参注射液更明显，如对内/外源性凝血因子Xa的抑制作用强烈。低分子肝素钠虽不影响血小板聚集和FIB与血小板的结合，但妊娠初3个月妇女或产后妇女使用本品可能增加出血的危险，故须慎用。复方丹参注射液作用较低分子肝素钠弱，但不影响其对PE凝血-纤溶系统的影响，也可达到纠正凝血功能紊乱的作用。本研究中，复方丹参注射液对D-D和FIB的作用尤为明显，作用与低分子肝素钠持平。

综上所述，复方丹参注射液具有改善PE模型大鼠凝血功能和肾功能作用。其通过解除全身血管痉挛、增加组织器官、特别血流量，恢复肾小球基底膜通透性，从而增加24 h UV、降低UP，增强肾脏清除BUN和SCr的能力，在纠正PE模型大鼠促凝血-抗凝因子失衡和肾功能损伤方面起到重要作用。