血清Hcy、CysC、RBP及尿足细胞联合检测对2型糖尿病肾病早期诊断的临床价值

徐晏玲，艾禾，漆丹平

1.成都市双流区中医医院内科，四川 成都 610200；2.成都市中西医结合医院科教部，四川 成都 610041；3.成都市双流区中医医院检验科，四川 成都 610200

糖尿病是临床常见疾病，肾损伤是糖尿病患者最重要的合并症，也是导致患者进展为终末期肾脏病的主要因素之一[1-2]。研究表明，糖尿病患者一旦进展至终末期肾脏病，会由于机体代谢紊乱，在治疗上比其他肾脏疾病的治疗更加困难，因此2型糖尿病肾病患者早期确诊治疗对提高患者生存率，延缓疾病进展有着重要意义[3]。目前有研究发现，糖尿病肾病患者疾病的发生与进展与氧化应激、炎症反应等存在一定联系，而血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys C)、视黄醇结合蛋白(RBP)与机体氧化应激及炎症反应有关，并且尿足细胞是肾小球滤过屏障的主要组成细胞，因此对Hcy、Cys C、RBP以及尿足细胞的检测有助于判断患者病情进展情况，具有重要临床诊断价值。本文旨在进一步探讨Hcy、Cys C、RBP及尿足细胞联合检测对2型糖尿病肾病早期诊断的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择成都市双流区中医医院2019年1月至2020年8月间收治的2型糖尿病肾病早期患者58例作为A组，同时选取我院收治的58例单纯糖尿病患者作为B组，糖尿病患者均符合1999年WHO指定的2型糖尿病相关诊断标准，排除合并急慢性肾炎、尿路感染、原发性高血压等疾病者。选取同时期在医院体检的健康者58例作为C组。A组中男性31例，女性27例；年龄36～78岁，平均(58.3±9.5)岁；病程3～13年，平均(7.2±1.9)年。B组中男性35例，女性23例；年龄36～79岁，平均(58.5±9.2)岁；病程3～12年，平均(7.4±1.8)年。C组中男性33例，女性25例；年龄36～78岁，平均(58.9±9.4)岁。三组受检者的性别、年龄比较和A组和B组患者的病程比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有受检均知情并签署知情同意书。

1.2 观察指标与检测方法

1.2.1 血清Hcy、CysC水平 清晨采集所有受检者空腹静脉血5 mL，置于肝素锂抗凝管中，常温下采用离心机以3 000 r/min的速度离心分离10 min，取上层清液置于-70℃冰箱内保存，待测。采用酶联免疫吸附法检测患者血清Hcy、CysC水平，检测仪器为贝克曼AU5800全自动生化分析仪，Hcy检测试剂盒购自北京九强公司，CysC试剂盒购自上海蓝怡公司，所有操作均按说明书进行。

1.2.2 尿RBP、尿足细胞 取患者以及健康体检者新鲜晨尿两份，离心分离5 min，弃上层清液，沉渣采用PBS清洗3次，加入1 mL PBS重悬，然后加入PE标记鼠抗人足盂蛋白单克隆荧光抗体50μL，于4℃环境下孵育45 min，采用离心机离心分离5 min，分离完成后采用PBS清洗3次，沉渣中加入2 mL PBS重悬后转移至BD绝对计数管，置于振荡器上充分混匀后采用美国BD公司生产BD FACS Calibur流式细胞仪进行检测。绝对细胞数=(荧光标记细胞计数×已知荧光小球总数×稀释背书)/(荧光小球计数×样本总体积)。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较应用q检验，计数资料比较采用χ2检验，使用受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic，ROC)分析各指标诊断价值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受检者的各项指标比较 A组患者的血清Hcy、CysC、RBP和尿足细胞水平明显高于B组及C组，而B组患者的上述各项指标又明显高于C组，差异均有统计学意义(P<0.0.5)，见表1。

表1 三组受检者的各项指标比较(±s)

表1 三组受检者的各项指标比较(±s)

注：与A组比较，a P<0.05；与B组比较，b P<0.05。

尿足细胞(个/μL)2.8±0.8 2.3±0.6a 0.7±0.1b 207.31<0.01组别A组B组C组F值P值例数58 58 58 Hcy(μmol/L)21.2±3.5 19.7±2.8a 7.7±1.9b 401.96<0.01 CysC(mg/L)1.8±0.3 1.5±0.2a 0.7±0.1b 401.86<0.01 RBP(mg/L)3.1±0.7 2.6±0.5a 0.8±0.1b 339.49<0.01

2.2 各项指标对2型糖尿病肾病的早期诊断价值 将A组和B组进行研究，以肾小球滤过率<90 mL/min作为2型糖尿病肾病诊断切点，ROC分析显示血清Hcy、CysC、RBP以及尿足细胞诊断最佳切点分别为20.81μmol/L、1.75 mg/L、2.91 mg/L以及2.73个/μL，各项指标检测敏感性血清CysC>RBP>尿足细胞>Hcy，并且四者联合检测可显著提高诊断敏感性，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2和图1。

表2 各项指标对2型糖尿病肾病早期诊断价值(%)

图1 各项指标诊断2型糖尿病肾病的ROC曲线

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病中最严重的慢性并发症，近年来呈逐年增长趋势[4-5]。糖尿病肾病可分为早期糖尿病肾病、临床期糖尿病肾病和晚期糖尿病肾病。部分早期糖尿病肾病患者经治疗后可恢复正常，近一半的患者在治疗后病情不会进展，会停留在微量蛋白尿阶段[6-7]。因此，早期诊断糖尿病肾病并采取积极治疗，是提高生存质量，改善预后的重要手段。

Hcy是人体内含硫氨基酸的重要中间代谢产物之一，可损伤患者的血管内皮细胞，促进血管内皮细胞及平滑肌细胞增生，影响到患者肾小球基底膜功能。相关研究表明，早期2型糖尿病肾病患者由于糖脂代谢异常，Hcy生成过多，自由基生成而出现氧化应激损伤。肾功能受损后，肾脏清除Hcy的能力也会下降，Hcy甲基化能力降低以及含硫氨基酸的代谢均为患者体内Hcy水平升高的原因[8-10]。本研究显示，2型糖尿病肾病患者血清Hcy水平均明显高于单纯糖尿病患者及正常人群。

CysC是有核细胞产生的一种低分子量蛋白，正常情况下会在经肾小球过滤后会被肾小管上皮细胞吸收。CysC对肾小球以及肾小管损伤的评估有重要诊断意义。2型糖尿病肾病患者在正常蛋白尿阶段，CysC水平即升高，标志患者出现肾损伤[11-13]。RBP作为一种低分子量蛋白质，正常情况下将视黄醇从肝脏运转到上皮细胞，随着人尿液排出的量极少，当患者肝脏出现损伤后，游离的RBP不会被肾小球滤过被近曲小管吸收分解，而是随尿液排出。足细胞作为肾小球滤过屏障的重要组成部分，在对大分子的滤过的过程中发挥着重要作用，当2型糖尿病早期患者出现微量白蛋白尿阶段时，足细胞脱落功能受损，密度降低，因此在尿液中可检测到大量蛋白质[14-15]。

上述各项指标能够从不同角度体现糖尿病肾病患者的病情程度，多指标联合检测能够显著提高糖尿病肾病的诊断准确率，联合检测对患者病情确诊有着重要意义，可作为糖尿病患者预防以及动态监测的可靠指标。本研究显示，血清Hcy检测的阳性率为60.3%，CysC为79.3%，RBP为87.5%，尿足细胞为74.1%，四者联合检测的阳性率为94.8%，四者联合检测阳性率高于单一指标检测。这是由于患者尿微量白蛋白的排除量以及血清胱抑素C、尿视黄醇结合蛋白水平均随着患者糖尿病肾病的进展呈现出明显增加的趋势。而尿液中足细胞水平的升高提示患者肾小球发生病变，当患者为微量白蛋白尿时，肾脏足细胞的密度明显降低，一旦进展为大量蛋白尿时，肾脏足细胞密度降低更为明显，因此尿足细胞的数量测定对2型糖尿病患者早期肾病的预测具有重要的临床意义[16-18]。

综上所述，2型糖尿病患者在出现肾损伤时，血清Hcy、CysC、RBP及尿足细胞水平明显升高，因此四者联合检测对患者早期诊断有着重要意义。