不同产地生姜皮中4种主要成分比较与分析

张腾腾， 孙俊杰， 吴从飞， 梅 玲， 赵鹏友，桂倩倩， 张小倩， 胡云飞，2

（1.亳州学院中药学院，安徽亳州236800；2.天津中医药大学中药制药工程学院，天津300193）

生姜皮，别称姜皮、生姜衣，为姜科植物姜Zingiber officinale Rose.的根茎外皮[1].生姜在我国南部、中部各省区广为栽培.10月份左右采挖生姜的根茎，清洗掉泥土，采用竹刀轻轻刮取外层的栓皮，干燥后即得[1].生姜皮性味凉辛，可用于水肿、呕吐、白发的治疗[2].生姜皮中化学成分丰富，文献报道其含有挥发油[3]、姜辣素类[4]及糖类[5]等多种成分.现代临床研究表明，姜酚类成分具有抗肿瘤、保护胃黏液膜等生物活性[6].

生姜皮作为生姜生产的“副产物”研究报道较少，含量测定方面的研究更是鲜见.为了探究不同产地生姜皮的品质差异，为生姜皮的品质鉴定、质量评估以及有效成分的开发利用等提供研究基础，本实验利用HPLC同时测定生姜皮中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚4个主要组分的含量，并对其指纹图谱相似性进行匹配.

1 仪器与材料

1.1 仪器

SHIMADZU品牌HPLC（PDA检测器，LC-16），Waters XBridge C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；XS-105型分析天平（梅特勒），KQ-100DB型超声仪（昆山市超声仪器有限公司），HH-6型六孔恒温水浴锅（金坛区西城新瑞仪器厂）

1.2 材料

6-姜烯酚（批号：AF20050113；纯度：98%）、6-姜酚（批号：AF20110206；纯度：98%）、8-姜酚（批号：AF 20070715；纯度：98%）、10-姜酚（批号：AF20070716；纯度：98%），均采购自成都埃法生物科技有限公司；水为实验室自制超纯水；HPLC级甲醇（国药试剂）.样品由周建理教授（安徽中医药大学）鉴定，确定为生姜皮，样品信息见表1.

表1 10批生姜皮样品信息

2 方法

2.1 供试品溶液的制备

生姜皮挑选杂质后打粉，过二号筛，取干燥粉末约0.5 g，精密称定，置于磨口100 ml锥形瓶中，精密加入75%甲醇（溶剂）30 ml，称重，加热回流45 min，保持微沸，放冷至室温，再次称重，用溶剂补至初始重量.用0.45 μm的有机系滤头过滤至进样瓶中，即可.

2.2 对照品溶液的制备

由于对照品为液体状态且易挥发，故用甲醇全部转移，制备成对照品储备液，浓度各为0.392mg·mL-1.

2.3 色谱条件

色谱柱：Waters XBridge C18（5 μm，4.6 mm×250mm）；流动相：甲醇-水，洗脱程序见表2；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm；柱温：40℃；供试品、对照品溶液的进样量分别是20 μL、10 μL.色谱图如图1.

表2 梯度洗脱程序

图1 高效液相色谱图

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系

分别精密吸取6-姜酚对照品储备液0.51 ml、1.79 ml、3.06 ml、4.34 ml、5.61 ml、6.89 ml转移至10 ml容量瓶中，用甲醇定容，得到一系列浓度不同的6-姜酚对照品溶液，另外三种对照品标曲配制方式与之类似.6-姜烯酚标曲配制：精密移取6-姜烯酚对照品储备液0.334 ml、0.668 ml、1.002 ml、1.336 ml、1.670 ml、2.004 ml，其他操作同6-姜酚；8-姜酚标曲配制：精密吸取8-姜酚对照品储备液0.143 ml、0.285 ml、0.592 ml、0.898 ml、1.205 ml、1.512 ml，其余同6-姜酚标曲操作；10-姜酚标曲配制：精密移取10-姜酚对照品储备液0.178 ml、0.429 ml、0.679 ml、0.929 ml、1.180 ml、1.430 ml置于5 ml容量瓶中，其他操作同6-姜酚标曲配制流程.按照文中所述色谱条件进样，线性回归分析结果见表3.

表3 4个成分线性关系

2.4.2 精密度试验

分别移取一定体积四种对照品储备液，制备成混合对照品溶液.按本文所述色谱条件进样，重复进样6次，计算得6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、10-姜酚四种成分峰面积的RSD依次为0.35%、0.94%、2.04%、2.00%，结果表明仪器精密度较好.

2.4.3 稳定性试验

取生姜皮样品溶液（S6），按本文所述色谱条件进样，于0，4，8，12，18，24 h进样，计算得6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、10-姜酚峰面积的RSD依次为0.55%，1.58%，2.30%，1.98%，表明生姜皮供试品溶液在考察时间内较为稳定.

2.4.4 重复性试验

取同一批样品（S9）干燥粉末6份，按本文所述供试品制备方法及色谱条件进样，计算得生姜皮中4种待测成分6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、10-姜酚的含量均值（n=6）的RSD依次为0.63%，1.42%，1.85%，1.17%，结果表明生姜皮样品重复性较好.

2.4.5 回收率试验

分别精密移取四种对照品溶液6-姜酚3 ml、8-姜酚0.5 ml、10-姜酚1.5 ml、6-姜烯酚1 ml加入至S1中（平行制备6份），按本文所述供试品制备方法及色谱条件进样，经计算得6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚加样回收率分别为96.62%、95.98%、91.80%、102.27%，RSD为2.30%、1.47%、2.12%、1.15%（n=6）.

2.5 样品含量测定

取不同产地生姜皮样品，按本文所述供试品制备方法（每个样品平行处理3份）及色谱条件进样，所测4种组分的含量平均值计算结果见表4，平行样之间含量误差均小于2.0%.

表4 10批生姜皮样品中4个化合物含量测定结果

2.6 不同产地生姜皮中4种成分指纹图谱的建立

使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）软件建立指纹图谱（图2）并计算相似度（表5），由生成峰进行实验数据分析，并验证实验的准确性.

图2 不同产地生姜皮指纹图谱

表5 不同产地生姜皮指纹图谱相似度

3 讨论

3.1 色谱条件的建立

针对生姜皮样品提取考察了如下因素：提取方式、提取溶剂、提取时间、溶剂体积.通过比较得出：采用30 ml 75%甲醇加热回流45 min，提取效果好；色谱条件综合考察了柱温、流速、流动相比例等，结果显示在40℃、1.0 ml·min-1、梯度洗脱（甲醇-水）等条件下，相邻色谱峰分离度较好、峰形较对称.

3.2 结果分析

生姜皮样品中4种成分含量测定结果如表4，色谱结果如图1所示.通过对比10批样品中4种成分含量信息，可知：6-姜辣素含量最高是云南产S10批0.979%，含量最低的是广西产S1批0.240%，最高含量约是最低的4倍；四种成分总含量规律与之类似.总体来看，广西和山东产生姜皮中6-姜辣素含量及四种成分总含量较低，云南及四川产6-姜辣素含量及总含量均较高，这表明生姜皮的次生代谢产物受产地的气候条件、土壤营养、地理位置等环境因素的影响.云南、四川地区所产生姜皮临床应用价值高.

不同产地生姜皮4种成分的指纹图谱匹配建立及相似度匹配：以四川地区为参照，利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版），参数设置多点校正、mark峰匹配（如图2所示），通过软件计算相似度（如表5所示），结果各产地生姜皮4种成分指纹图谱相似度高于0.96，说明不同产地间生姜皮化学组分类似.

本研究在同一色谱条件下完成了5个产地生姜皮中4种成分的含量测定及指纹图谱的建立.生姜皮指纹图谱与含量测定通过定性与定量结合，实现整体评价与局部分析更加科学、合理地评价生姜皮质量.通过生姜皮的研究，对比生姜前期相关研究报道，为进一步阐明生姜是否去皮提供依据.

2020 年版《中国药典》[7]未对生姜皮检查项作出明确规定，仅在“生姜”项下记载“取净生姜，削取外皮”.目前仅有少量学者[8]对生姜皮质量标准进行了研究.本实验建立的方法精密度较好，灵敏度高，为后续生姜皮质量标准的制定奠定基础.