葛根中葛根素含量的测定*

王丽婷，郭双华，邹慧岩，宋祎诺，谢承佳

(扬州工业职业技术学院,江苏 扬州 225127)

葛根素又称葛根黄素，8-β-D葡萄吡喃糖-4’7-二羟基异黄酮，是从豆科植物葛的块根中提取的异黄酮类化合物。葛根素能够扩张血管、扩张冠状动脉,增加冠脉血流量,改善缺铁区的血流,降低心肌耗氧量,增加氧供应，被广泛用于冠心病、心绞痛等；葛根素还可以调节血液粘度、降低血压, 防治高血压头晕，用于治疗高血压[1]。研究表明，葛根素可以提高骨量和骨密度,改善骨生物力学性能和骨形态学结构,对骨骼有良好的保护作用及治疗骨质疏松的作用[2]。葛根素还能够抑制人体对酒精的吸收，具有解酒护肝作用[3]。现在市面上有葛根素注射液、葛根素胶囊、葛根素片剂等剂型的药物已应用于临床医学。随着生活质量的提高，人们越来重视在日常生活中通过药食同源的食物改善身体的质量、防未病、治已病。葛根因性味平和是药食同源植物，既有药用价值，又可作为日常保健食品服用。为了满足人们食用需求，葛根已经实现人工种植，由于天然葛根含水量高，易发霉，当地人采用最传统的方法制备干燥的葛根粉来延长葛根的贮存期，本文对不同产地的柴葛、粉葛和采用的传统方法制备的葛根粉，利用超声波辅助乙醇提取葛根素，采用紫外分光度计测葛根素的含量，测定的数据结果可以供人们食用葛根、葛根产品开发、食用方式提供参考。

1 实 验

1.1 实验仪器

普析通用-T6紫外分光光度计,上海光盘仪器有限公司；PX523ZH精密天平，奥豪斯仪器(上海)有限公司；超声波清洗仪器CE-6200A，洁康智能科技有限公司；Mixplus漩涡混合器,合肥艾本森科学仪器有限公司。

1.2 药 品

葛根素(纯度≥98%)，上海源叶生物科技有限公司；乙醇(分析纯)，国药集团化学试剂有限公司；水为自制高纯水；待测葛根从江西吉安、镇江茅山、安徽宣城、云南临沧购买，其中柴葛为野生，粉葛为种植葛根，都为生长两年采收。

1.3 试剂的配置

称取1.0000 mg的葛根素标准样品于100 mL容量瓶中，用70%的乙醇溶液稀释至刻度线，定容。配制成0.01 mg/mL的葛根素标准储备液。

1.4 葛根素的提取

1.4.1 新鲜葛根中葛根素的提取

新鲜野葛根用高纯水洗净,晾干，削皮，切片、用植物粉碎机打成浆，浆液颗粒均匀，颗粒大小达到40～80目。准确称取新鲜葛根浆液1.0000于10 mL刻度试管中，加入10 mL乙醇溶液，在漩涡混合器上混匀2 min,然后在超声频率为42000 Hz、功率为70 W的超声波清洗仪器进行超声提取葛根素，离心分离，收集取上层清液，残渣再重复上次的超声提纯两次，合并三次上层清液，上层清液用0.40 μm的滤膜，然后用紫外分光光度计普析通用-T6测吸光度，计算葛根素的含量，每个样品测试五个平行样。

1.4.2 葛根粉中葛根素的提取

采用传统的制备葛根粉的方法，挑选新鲜葛根、去离子水清洗，然后去皮、切片、粉碎、过滤将浆渣分开、用去离子水多次淘洗葛根渣，合并滤液、沉淀，干燥，即得葛根粉。准确称取干燥葛根粉1.0000 g于10 mL刻度试管中，之后操作同新鲜葛根中葛根素的提取及测试操作。

1.5 测 试

分别准确吸取0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL的葛根素储备液至25.00 mL的容量瓶中，用95%的乙醇溶液稀释至刻度。配制成0.0000 mg/L、00002 mg/L、0.0004 mg/L、0.0006 mg/L、0.0008 mg/L、0.0010 mg/L的葛根素溶液，用紫外分光光度计普析通用-T6在200～300 nm范围内扫描，在 252 nm 处有最大吸收峰，在最佳条件下测葛根素标准序列液，绘制葛根素的标准曲线如图1所示。

图1 紫外可见分光光度计法测葛根素的标准曲线Fig.1 Standard curve for determination of puerarin by ultraviolet visible spectrophotometer

为了验证测定方法的准确度，进行加标回收实验，取等体积的样品溶液和标准溶液的混合溶液三份进行测定，求出平均值，结果见表1，由加标回收实验，可以看出此种方法准确。

表1 加标回收实验结果 Table1 Results of recovery test

2 超声波辅助提取葛根素的条件优化

新鲜葛根大约含85%左右的水分、3%的淀粉，而葛根粉则含水分很少，但淀粉含量高于90%，葛根和葛根粉中的淀粉，在温度较高的情况下易成糊状，给葛根素提取的后续操作带来很多麻烦，所以本研究将新鲜葛根粉研磨成40～80目之间的浆液、葛根粉研磨成100目的颗粒，常温25 ℃下，在频率为42000 Hz、功率为70 W的超声波清洗仪器进行超声提取葛根素，然后测试其含量。选用江西吉安的柴葛，进行超声波辅助乙醇提取葛根素的提取条件优化实验，实验结果如下：

2.1 乙醇含量对葛根素提取的影响

在超声波助时间为25 min、料液比为1:45、超声功率为 70 W、超声温度为25 ℃，乙醇的含量分别为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的条件下测定葛根素的含量，结果见图2，由图2看出随着乙醇的含量的增加，提取的葛根素含量会逐渐增加，当乙醇浓度为70%时含量最高，当乙醇的浓度大于70%时，葛根素的提取量略有降低，所以选择乙醇浓度为70%。

图2 乙醇对葛根素提取的影响Fig.2 Effect of ethanol on Puerarin extraction

2.2 料液比对葛根素提取的影响

在超声波助时间为25 min、超声功率为70 W、超声温度为25 ℃、乙醇的含量为70%，改变料液比为1:15、1:30、1:45、1:60、1:75，进行超声提取葛根素，由图3知随着料液比的提高，葛根中的淀粉充分溶解到溶剂中，并在超声的作用下将葛根总黄酮从其中释放出来，所以葛根素的含量逐渐提高，在料液比为1:45时提取的量最高，料液比再增大时，则葛根中非黄酮物质被提取[4-5]，导致黄酮量减少从而会导致葛根素减少。

图3 固液比对葛根素提取的影响Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on Puerarin extraction

2.3 超声时间对葛根素提取的影响

在超声功率为70 W、超声温度为25 ℃、乙醇的含量为70%，料液比为1:45，改变超声时间，进行超声提取葛根素，由图4知随着超声时间的增加，葛根素在提取液中的含量逐渐增加，随着超声时间的延长，则葛根素提取量逐渐降低，因此最佳超声时间为25 min。

图4 超声时间对葛根素提取的影响Fig.4 Effect of ultrasonic time on Puerarin extraction

3 不同产地的葛根中葛根素的含量

取不同产地的葛根及葛根粉在超声功率为70 W、频率为42000 Hz、超声温度为25 ℃、乙醇的含量分别为70%、料液比为1:45，超声时间为25 min下提取葛根素，重复测葛根素含量含量5次，测定结果见表2。

表2 葛根中葛根素含量Table 2 Puerarin content in root of kudzu vine

从表2的测试结果可以看出，实验结果显示，不同产地葛根的葛根素含量不同，所取产地的柴葛中葛根含量普遍高于人工培植粉葛葛根素含量，无论是将柴葛还是粉葛制成葛粉，葛根素相对于新鲜的葛根含量高。

4 结 论

本文采收不同产地的柴葛和粉葛，并将葛根用民间传统的方法制取葛根粉，将葛根和葛根粉在超声功率为70 W、频率为42000 Hz、超声温度为25 ℃、乙醇的含量分别为70%、料液比为1:45，超声时间为25 min下进行超声提取葛根素，然后用紫外分光光度计测葛根素的含量。实验结果显示，不同产地葛根的葛根素含量不同，所取产地的柴葛中葛根素含量略高于人工培植粉葛葛根素含量，无论是将柴葛还是粉葛制成葛粉，葛根素相对于新鲜的葛根含量高。