痰GeneXpert MTB/RIF在涂阴活动性肺结核诊断中的价值分析

2021-11-28吴文恩

大医生 2021年15期

谢丹，李强，吴文恩

（中山市第二人民医院呼吸感染科，广东中山 528447）

结核病为国际关注的重点公共卫生问题，而我国为结核病高发区，防治形势严峻。目前临床治疗结核病主要依赖痰涂片抗酸染色结核临床放射影像学、痰结核分枝杆菌（MTB）培养等传统实验室检验方法，但以上方法均存在不同的缺陷，如痰涂片抗酸染色，虽然成本低、耗时短，但检测敏感度差，难以通过影像学表现出结核患者的特异性，且需耗费长时间展开耐药检测，易错过最佳诊治时机；而MTB培养中的高污染问题难以得到解决[1-2]。因而，亟需一种高效、准确的肺结核诊断与检测MTB耐药性的实验方法。痰GeneXpert MTB/RIF具有操作方便、简单、灵敏度高的优势，早在2010年便被世界卫生组织（WTO）推荐为检测结核病和耐利福平结核病的方法，但在引入国内后，相关报道较少，对于其在国内的适用性仍缺少系统评价[3]。为此，本研究展开对于痰GeneXpert MTB/RIF在涂阴活动性肺结核诊断中的临床价值的讨论，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2020年5月至2021年4月间中山市第二人民医院接收的47例涂阴活动性肺结核患者作为本次研究对象，采用前瞻性研究，其中男性患者26例，女性患者21例；男性患者年龄21～72岁，平均（39.46±7.85）岁；女性患者年龄19～76岁，平均（41.83±6.77）岁。纳入标准：3次痰涂片均为阴性者；经胸部影像学检查显示为活动性肺结核且存在可疑症状（咳嗽、咳痰、咯血）者；结核菌素实验为强阳性、或抗结核抗体检查为阳性、或肺外组织病理检查证实为结核病变者、或疑似肺结核病例者等。排除标准：存在精神疾病者；合并心肝肾功能不全者；合并恶性肿瘤疾病者；合并其他重大感染、传染类疾病者等。本研究已经院内医学伦理委员会审核批准，且患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法痰标本的采集：即时痰为患者就诊时留取的痰液，清晨痰为清晨起床后，在清水漱口后留取的痰液，夜间痰为留取清晨痰前1 d傍晚至睡前咳出的痰液；痰量以3～5 mL为宜。并对痰标本进行痰常规检查，若痰液不合格者，则重新采集送检。

1.2.1 痰MTB培养检测采用萋 - 尼氏染色镜检抗酸杆菌，并进行金标准痰液分离培养，按《中国结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[4]中的要求进行；取1 mL痰液进行分枝杆菌分离培养，具体方式按照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》[5]要求进行。酸性罗氏培养基斜面有MTB菌落生长则为阳性，未见MTB菌落生长则为阴性。

1.2.2 比例法药敏实验检测将培养阳性MTB菌株采用微孔板比例法，严格按照《结核分枝杆菌药物敏感性实验标准化操作程序及质量保证手册》[6]要求进行药物敏感性实验。

1.2.3 痰GeneXpert MTB/RlF检测在痰液标本中以1∶2的比例加入处理液，后将其放置于涡旋振荡器中，旋涡式震荡15～30 s后放置15 min。在反应盒中加入2 mL处理后的样本，同时放入检测模块，2 h后进行检测。MTB数量以MTB DNA拷贝的高低分为高、中、低、极低和未检出5个量级。利福平检测结果为敏感或耐药。

1.3 观察指标 ①比较不同检测方法对结核分枝杆菌与利福平耐药性的阳性检出率，并分别以MTB培养与比例法药物敏感性实验为金标准。②分析不同性别患者痰GeneXpert MTB/RIF检测MTB的诊断效能（敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值）。敏感度=真阳性例数/（真阳性＋假阴性）例数×100%；特异度=真阴性例数/（真阴性＋假阳性）例数×100%；阳性预测值=真阳性例数/（真阳性＋假阳性）例数×100%；阴性预测值=真阴性例数/（真阴性+假阴性）例数×100%。③分析不同性别患者痰GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药的诊断效能（敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值）。

1.4 统计学分析应用SPSS 23.0统计软件进行数据分析，计数资料以[ 例(%)]表示，采用χ2检验，多组间计数资料比较，采用χ2趋势检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方法对MTB检出率与利福平耐药性检出率痰GeneXpert MTB/RIF检测MTB与利福平耐药性检出率和金标准（MTB培养检验、比例法药物敏感性实验）检出率比较，差异均无统计学意义（χ2= 0.172、0.044，均P＞0.05），见表1。

表1 不同检测方法对MTB与利福平耐药性阳性检出率比较[ 例(%)]

2.2 不同性别下痰GeneXpert MTB/RlF检测MTB的诊断效能男性患者痰GeneXpert MTB/RIF检测MTB阳性15例、阴性11例。女性患者痰GeneXpert MTB/RIF检测MTB阳性12例、阴性9例。不同性别患者采用痰GeneXpert MTB/RIF检测MTB的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2、3。

表2 不同性别涂阴肺结核患者痰GeneXpert MTB/RlF检测MTB结果（例）

2.3 不同性别下痰GeneXpert MTB/RlF检测利福平耐药的诊断效能男性患者痰GeneXpert MTB/RIF利福平耐药检测阳性17例、阴性9例。女性患者痰GeneXpert MTB/RIF利福平耐药检测阳性11例、阴性10例。不同性别患者采用痰GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表4、5。

表4 不同性别涂阴肺结核患者痰GeneXpert MTB/RlF检测利福平耐药结果（例）

3 讨论

目前，临床将耐药与诊断困难作为肺结核疾病发病率不断升高的两项重要原因，及早发现肺结核、准确诊断、科学给药是控制疾病发展的关键，但临床上常采用的涂片抗酸染色法、MTB培养等方法均存在或多或少的缺陷，如耗时长、数据采集难等，不能达到理想诊断效果[7]。

本次研究在探究痰GeneXpert MTB/RIF检测效果中发现，与金标准MTB检出率对比，痰GeneXpert MTB/RIF检测检出率较高且在不同性别患者中均实现较高的敏感度、特异度，在利福平耐药检测上检出率同样较高，且也在不同性别患者中实现了较高的敏感度与特异度。分析原因可知，GeneXpert系统为一种全自动一体化半巢式实时荧光定量PCR检测系统，具备MTB培养与比例法药物敏感性实验的优势，在基于样品准备、DNA扩增及检测3个步骤实现对样品的全自动检测，检测过程中对光学高度敏感，可快速获得检测DNA序列结果，在临床实践中，90%以上的检测结果均可当天获取；同时，与传统MTB检测方法相比，痰GeneXpert MTB/RIF检测法可有效规避杂菌的污染，提高检测结果的精准性，因此，在缩短检测时间的同时可提高检测敏感度、准确性[8]。采用GeneXpert MTB/RIF检测过程中，可自动对应低、中、高3个量级对不同样本量进行分析，配合预处理实现菌量均匀分布，从而确保实际菌量与假阴性、阳性检出结果相符合，便于临床治疗中清晰观察疗效。此外，有研究指出，在检验过程中GeneXpert系统将发现利福平耐药菌的效率提高了3倍，痰GeneXpert MTB/RIF检测法的技术性质决定了其能够根据利福平耐药核心区的rpoB基因81 bp进行引物与探针设计，检测是否发生突变现象，获得关于耐药情况的准确检测，也正是对这项结果的检验使涂阴活动性肺结核患者化疗治疗平均时间降低14倍，有效增强治疗效果[9]。陈洁等[10]研究中比较了涂片抗酸染色、罗氏培养检测及痰GeneXpert MTB/RIF检测3种方法在肺结核诊断中的应用效果，结果显示，痰GeneXpert MTB/RIF检测将传统检测方法的优势集于一体，操作更加简单、快速，应用于肺结核早期诊断中优越性更加明显。