透明质酸分析检测

1962年 含量估算

一种改良的糖醛酸咔唑反应

TBITTER.H.M.MUIR

摘要：糖醛酸与咔唑的反应是估算色谱馏分中糖醛酸的最令人满意的方法，但需要2小时才能完全显色，而且对于某些化合物，颜色会被部分盐抑制。颜色不稳定，对过热或水稀释较为敏感，试剂或样品中的杂质会对其产生干扰。

与Aminoff、Morgan和Watkins测定己糖胺的发现一致，Gregory确定硼酸根离子类似地增加了糖醛酸咔唑反应的显色率，而在5-甲基间苯二酚-硫酸反应中，它产生了一种立即出现的颜色。

本发明在浓硫酸中使用硼酸盐进行改性既快速又定量，并具有以下优点：（a）灵敏度进一步增加，超过Gregory记录的灵敏度（b）立即出现颜色，（c）显著增加颜色的稳定性，（d）更好的重现性，以及（e）减少氯化物和氧化剂的干扰。其中一些结果的初步报告已经给出。

结论：描述了在硼酸盐存在下对糖醛酸的Dische咔唑反应的改进。该方法的优点是：

（1）灵敏度提高了大约两倍。OD是浓度在4到40 pg/ml之间的线性函数。

（2）最大颜色立即显现。

（3）颜色稳定至少16小时。

（4）有更高的重现性和减少氯离子和氧化剂的干扰。

现已发现通过比较氯化物对两种程序中颜色产量的影响，可以区分肝素、肝素衍生物和其他结缔组织多糖苷酸。

文献来源：T.BITTER，H.M.MUIR.A Modified Uranic Acid Carbazole Reaction[J].ANALYTICAL BIOCHEMISTRY，1962，4：330-334.

2011年 相对分子质量测试

透明质酸的黏度及相对分子质量

Shimada E，Matsumura G

摘要：用沉降平衡法确定低相对分子质量（Mr=1×104～7.2×104）及高相对分子质量（Mr=3.1×105～1.5×106）透明质酸（HA）的特性黏度（[η]）和Mr。两种HA，其[η]对Mr的双对数图显示出不同的线性。低Mr的HA，[η]=3.0×10-6×Mr 1.20，对高Mr的HA来说，[η]=5.7×10-4×Mr 0.76。两线交叉点的HA Mr大约为1.5×105。Mr小于2.1×104的HA，其流变性（比浓黏度）与浓度无关;而大于5.7×104的HA，其流变性（比浓黏度）随浓度的增大而增加。

结论：由方程计算得到的[η]值与绘图法得到的[η]值比较，偏差最多±4%，这表明该方程可用于图形法的核对以及通过单一浓度的黏度数据来计算[η]值。然而，对于U-Ⅲ和U-Ⅳ洗脱片段来说，[η]值仍需使用绘图法来确定。

log[η]对logMr作图，S型及U型HA在Mr1.5×105处相交，此结果与Cleland的数据一致。他们解释为短链HA的非高斯行为。这也可以说明，k值较低时，k值的变化反映了聚合物链的构象变化。Cleland提出，不同糖胺聚糖在Mr较低时，都具有类似的流体力学特性。事实上，本次研究中，得到的低分子HA的特性黏度方程[η]=3.0×10-6×Mr1.20（Mr=1×104～7.2×104）与Wadteson研究硫酸软骨素时得到的方程[η]=5.0×10-6×Mr1.4（Mr=2.4×103～3.6×104）吻合。

如果k與聚合物的形态以及聚合物链的柔性有关，那么本研究中得到的黏度数据表明，当HA的Mr在2×104～6×104，HA链的柔性急剧增加，当Mr达到105～2×105时，HA链的柔性最大，呈高斯卷曲的构象。

明确黏度方程中的常数k、k”的含义，对阐明糖胺聚糖的构象与Mr之间的关系有重要意义。

文献来源：Shimada E，Matsumura G.透明质酸的黏度及相对分子质量[J].食品与药品，2011（07）：301-303