四子种王胶囊治疗弱畸形精子症对精子DNA碎片指数的影响※

王旭初 郑加涛 马建新 苏冬冬 杜海胜 郭锐利 潘 蕊

(河北省沧州中西医结合医院生殖科，河北 沧州 061001)

近年来，受环境、饮食、肥胖、社会压力等因素的影响，男性生育力明显下降[1]。男性不育问题在全世界范围内越来越受到关注。过去几十年，评估男性生育能力主要依据精液的各项参数，但却无法准确评估精子的受精能力和妊娠结局[2]。随着医学对男性不育认识的逐渐深入，精子DNA损伤的检测指标精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index，DFI)成为国内外医学界研究的热点。中医药治疗男性不育有一定的优势和潜力，通过准确辨证治疗，在改善睾丸生精能力、提高精子活动力、降低精子DFI等方面有较好作用[3]。本研究采用四子种王胶囊治疗弱畸形精子症48例，并与维生素E软胶囊治疗48例对照，观察临床疗效及对精子DFI的影响，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年6月—2020年6月河北省沧州中西医结合医院生殖科门诊弱畸形精子症患者96例，按照随机数字表法分为2组。治疗组48例，年龄20～48岁，平均(30.15±5.22)岁；不育年限1～11年，平均(3.53±2.15)年。对照组48例，年龄21～48岁，平均(29.64±6.05)岁；不育年限1～12年，平均(3.28±1.98)年。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例选择

1.2.1 诊断标准 根据世界卫生组织《人类精液检查及处理实验室手册》[4]：育龄夫妇夫同居1年以上，性生活正常，未避孕未孕，女方检查无异常；2次精液分析显示前向运动精子百分率<32%，正常形态精子率<4%，精子DFI>25%。参照《实用中西医结合不孕不育诊疗学》[5],辨证为肾阳虚证。主症：不育，性欲低下，腰膝痠软，连续2次精液分析提示为弱畸形精子症。次症：怕冷，四肢凉，身体困倦，易疲劳，舌体淡，苔白，脉沉细弱。“不育”为必要条件，兼有至少1项其他主症或至少2项次症。

1.2.2 纳入标准 符合上述诊断标准及辨证；年龄22～45岁；患者配偶所有生殖功能检测均为正常；患者均签署知情同意书。本研究通过医院医学伦理委员会审批。

1.2.3 排除标准 隐匿性无精子症和无精子症者；伴有影响精子质量的泌尿系统疾病者；遗传及内分泌疾病者；睾丸发育不良者；性功能障碍不能性交及不能射精者；有严重肝肾功能异常者；6个月内使用糖皮质激素、免疫抑制剂等药物者。

1.2.4 剔除和脱落标准 未按规定治疗和用药者；病例记录不全无法判断疗效者；因各种因素而中途退出者。

1.3 治疗方法

1.3.1 治疗组 予四子种王胶囊(药物组成：菟丝子、熟地黄、枸杞子、鹿角胶、覆盆子、当归、桑寄生、肉苁蓉、怀牛膝、淫羊藿、韭菜子、石斛、甘草。制备工艺：鹿角胶、肉苁蓉、怀牛膝三药粉碎成细粉，过60目筛混匀，余药6倍量水浸泡，煎煮提取3次，滤过加入上述细粉，干燥，粉碎，过60目筛混匀，装入胶囊，即得。河北省沧州中西医结合医院制剂室制备，冀药制字Z20070043)，每日3次口服。

1.3.2 对照组 予维生素E软胶囊(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，国药准字H33020187)100 mg，每日1次口服。

1.3.3 疗程 2组均以3个月为1个治疗周期，治疗1个周期后评价疗效。

1.4 观察指标 ①比较2组治疗前后精子密度、前向运动精子百分率、正常形态精子率及精子DFI。精子密度、前向运动精子百分率检测采用清华同方精液分析系统(型号MX8.5，北京华方神火科技有限公司)；正常形态精子率采用精子形态学快速染色法(Diff-Quik法)；精子DFI检测采用精子染色质扩散法(SCD)法。②治疗结束后随访6个月，统计比较2组患者配偶妊娠(以B超检测到胎心搏动为准)率。

1.5 疗效标准 治愈：治疗后DFI≤25%，且配偶妊娠；显效：治疗后DFI≤25%，但配偶未妊娠；有效：治疗后DFI>25%，但较治疗前下降≥15%；无效：治疗后DFI>25%，但较前下降<15%[5]。

2 结果

2.1 2组临床疗效比较 见表1。

表1 2组临床疗效比较 例(%)

由表1可见，2组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组临床疗效优于对照组。

2.2 2组治疗前后精液检测指标比较 见表2。

表2 2组治疗前后精液检测指标比较

由表2可见，治疗后，2组精子密度、前向运动精子百分率、正常形态精子率均较本组治疗前提高，且治疗组高于对照组，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后，2组精子DFI均较本组治疗前降低，且治疗组低于对照组，比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 2组随访6个月配偶妊娠率比较 见表3。

表3 2组随访6个月配偶妊娠率比较 例

由表3可见，2组6个月配偶妊娠率比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组高于对照组。

3 讨论

目前，弱畸形精子症的发病机制尚未完全明确，主要认为与基因突变、过氧化损伤和微量元素异常等有关。在治疗上，国内外尚无特效的药物和方法，主要是抗氧化剂及补充能量制剂，最常用的药物是维生素E和左卡尼汀。维生素E在体内可以通过抗氧化作用保护精子的结构和功能[6]，是改善精子质量的常用药。所以，本研究以维生素E作为对照组用药。

关于弱畸形精子症，古代中医典籍并没有论述，现代中医将其归属于男性不育、精少、虚损等范畴。中医学对男性不育症的诊治积累了丰富的临床经验。中医多以“肾”论治，肾阳亏虚是本病发生的主要病机[7]。肾为先天之本，主水、纳气、藏精。肾中精气为阳，精液为阴，精液为精气所化，正如《素问·阴阳应象大论》载“阴阳者，天地之道也……阴静阳躁，阳生阴长……阳化气，阴成形”。肾阳不足，推动无力，则精子活力减弱；阳损及阴，肾阴亏虚，则生殖之精匮乏或发育障碍。四子种王胶囊方中菟丝子、熟地黄补肾健脾，养血生精，切中病机要点，共为君药；枸杞子、鹿角胶、覆盆子、当归加强君药滋阴补肾之功，调和阴阳，助精生生不息，共为臣药；桑寄生、肉苁蓉、怀牛膝、淫羊藿、韭菜子可补肾壮阳，助君臣之药发挥助阳益精之功；石斛为反佐药，以制其他众多温补药物之峻烈，使其阴阳相补而相得益彰；甘草调和诸药，为使药[8]。诸药合用，共奏补肾壮阳、益精填髓之功。

精子DNA是受精的必要条件，其完整性对正常受精至关重要。精子DNA损伤可使精子运动能力下降，活力降低，影响精子与卵子结合。DNA损伤程度与自然受孕率呈负相关，当精子DNA损伤率> 30%时，自然生育的可能性几乎为零，精子DNA损伤及精子活力下降是导致男性生殖能力降低的病理基础[9]。因此，精子DFI是近年来国内外生殖医学领域研究的热点，成为预测和评估生育能力的新指标[10-11]。并且随着辅助生殖技术的研究，发现精子DFI与生殖技术及流产率也密切相关。乔坤等[12]研究发现，当精子DFI≥30%后，会显著降低体外受精-胚胎移植胚胎着床率。Funaro M G等[13]发现，早期胚胎流产率升高的原因之一是精子DNA损伤，并破坏精子膜渗透压。精子成熟过程中细胞凋亡、氧化应激等与也精子DFI升高有关[14]。亦有研究发现[15]，鱼精蛋白表达异常也是引起精子DNA损伤的重要因素。另外，年龄也是造成精子DNA损伤的一个重要原因，Das M等[16]发现年龄超过40岁的男子精子DFI明显升高而易导致不育。乔坤等[12]研究发现，精子DFI随着年龄的增加而明显升高。

传统的精液常规检测仅限于精子密度、精子活力和精子形态学检测，不包括精子DNA的评估。周雪等[17]研究显示，精子DFI与年龄及精子密度、精子活力和正常形态精子率密切相关，精子DFI与精液常规参数的综合分析可从数量和质量上更加全面地评估精子质量。弱畸形精子症患者由于脂质过氧化反应及其代谢产物本身的细胞毒性，多伴有精子DNA损伤，DFI升高，精子活力和畸形率与DFI呈负相关，而精子DNA损伤又导致更多的弱畸形精子，形成恶性循环[18-19]。本研究结果显示，治疗后治疗组精子密度、前向运动精子百分率、正常形态精子率及精子DFI、临床总有效率及6个月配偶妊娠率高于对照组(P<0.05)。提示四子种王胶囊治疗弱畸形精子症疗效确切，能提高精子活力及精液质量，改善精子DNA损伤，提高配偶妊娠率。但本研究治疗只有1个疗程，有些指标虽有改善，但尚未达到正常值，通过延长治疗时间各项指标能否继续改善有待进一步深入研究。