鲜天麻及其不同炮制品有效成分含量比较

唐文文 王丹丹 沈易华

(铜仁职业技术学院，贵州 铜仁 554300)

天麻(Gastrodia elata Bl.)，又名赤箭、离母、神草、定风草等，是兰科多年生异养寄生型草本植物，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络的功效[1]，为我国传统名贵大宗中药材。在西南地区的天麻主产区均有鲜食天麻的历史，主要食用方法为做菜、炖肉、煮火锅等。天麻因其营养成分高，具有多种医疗保健功效，将越来越受到关注。天麻也将从炮制品应用模式转化为鲜天麻与炮制品共同应用模式。本研究以天麻多糖、天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛为指标成分，对鲜天麻及不同炮制品天麻进行差异性分析，为鲜天麻及不同炮制品的合理利用提供指导。

1 材料与试剂

1.1 材料

试验用天麻于2020年11月中旬采之于贵州省德江县天麻种植区，经铜仁职业技术学院梁玉勇教授鉴定为兰科植物天麻(Gastrodia elata Bl.)。

1.2 仪器与试剂

Agilent1260高效液相色谱仪(安捷伦有限公司)；UV-1801紫外可见分光光度计(北京瑞丽分析仪器有限公司)；Kromasil-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；天麻素(批号：110807-202010，纯度以95.5%计)购自于中国食品药品检定研究院；对羟基苯甲醇(批号：H21D6Q7813，纯度≥98%)、对羟基苯甲醛(批号：Y02J7C15574，纯度≥99%)均购自上海源叶生物科技有限公司；甲醇、乙腈(色谱纯，美国TEDIA)；葡萄糖对照品(国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法

2.1 样品处理方法

选择大小均一的鲜天麻(100 g～150 g)，鲜天麻及其不同炮制品制备工艺见表1，制备后，抽真空包装，储存于4 ℃冰箱，直至分析。

表1 试验处理设置表

2.2 天麻多糖的含量测定

天麻多糖：采用硫酸-苯酚法，参考杨天友等[2]的方法进行，以葡萄糖质量浓度为横坐标(X)、吸光度值为纵坐标(Y)绘制葡萄糖标准曲线，标准曲线的线性回归方程为 Y=0.0081X-0.0039，R2=0.9994。供试品溶液的制备方法修改如下：分别精密称取各样品，加入样品重100倍体积的95%乙醇浸泡过夜，过滤，等滤渣挥发至无醇味时，加入液料比50：1的纯化水，密塞摇匀，称定重量，超声30 min，称重，用蒸馏水补足减失重量，90 ℃水浴回流提取1.5 h，4000 r·min-1离心10 min，精密吸取上清液5 mL至10 mL于容量瓶，加水定容，摇匀即得。

2.3 酚类成分的含量测定[3-5]

2.3.1 色谱条件 Kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为 0.05%乙酸水(A)-乙腈(B)；梯度洗脱(0 min～25 min，97%～90%A；25 min～35 min，90%～80% A；35 min～46 min，80%～0 A；46 min～50 min，0～97% A)；体积流量1.0 mL·min-1；检测波长 220 nm；柱温 30 ℃；进样量10 μL。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取各对照品适量，加10%甲醇配制成含天麻素4.725 mg·mL-1、对羟基苯甲醇1.994 mg·mL-1、对羟基苯甲醛2.502 mg·mL-1的混合对照品储备溶液。将混合对照品贮备溶液用10%甲醇稀释25倍，得混合对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 FG样品先切块，然后利用匀浆机充分匀浆，使颗粒大小均匀；G1-G5各样品粉碎后过3号筛，置精密称取各样品适量，置于具塞的锥形瓶中，按20：1的液料比加入稀乙醇溶液，摇匀称重，超声处理(200 W，40 kHz)40 min，放冷，再称量质量，用稀乙醇补足重量，滤过，精密量取续滤液10 mL，浓缩至近干无醇味，残渣加 10%甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，用10%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品储备溶液0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL置于25 mL容量瓶中，用10%甲醇溶液稀释至刻度，制成一系列对照品溶液，按2.3.1 项下色谱条件，进样量10 μL，测定各对照品峰面积。以峰面积(Y)对应对照品的浓度(X)进行线性回归，得回归方程，天麻素Y=18107X-32.676 R2=0.9999，线性范围：0.04725 mg·mL-1～0.756 mg·mL-1；对羟基苯甲醇Y=36854X-14.288 R2=0.9998，线性范围：0.01994 mg·mL-1～0.319 mg·mL-1；对羟基苯甲醛Y=49776x + 170.57 R2=0.9997，线性范围：0.02502 mg·mL-1～0.4003 mg·mL-1。

2.3.5 精密度、稳定性和重复性试验 精密吸取上述混合对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样6次，记录峰面积，即得天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛峰面积的RSD均小于2.0%；取G5样品供试品溶液，在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h时，按上述色谱条件进样，按峰面积计算，天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛峰面积的RSD均小于2.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定；取E样品按照供试品溶液的制备方法平行制备6份，按上述色谱条件测定含量，得天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛含量的RSD均小于3.0%。

2.3.6 加样回收率试验 称取已知含量G5样品粉末约1.0 g，共6份，精密称定，分别精密加入天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛对照品适量，按供试品溶液制备方法处理，再按上述色谱条件进样测定，得天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛的回收率在98.6%～102.5%之间，RSD均小于3.0%。

2.3.7 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和不同处理的供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，分别记录天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛的峰面积，按外标法计算供试品中3种物质的含量。HPLC色谱图见图1。

图1 天麻HPLC色谱图：(1)为对照品(2)为样品注：1.天麻素2.对羟基苯甲醇3.对羟基苯甲醛

3 结果与分析

3.1 鲜天麻及其不同炮制品多糖含量比较

天麻多糖是天麻中重要的活性成分之一，具有降压、抗氧化、改善脑血流量、增强免疫、抗氧化等作用。鲜天麻及其不同炮制品多糖含量见图2，由图2可知，采用蒸制后“发汗”加工的天麻炮制品多糖含量最高，为27.67%，显著高于其他样品，应该是由于天麻在“发汗”过程中其复杂苷类成分水解释放出葡萄糖[6]；直接烘干和蒸后烘干多糖含量次之，分别为23.78%和24.59%；水煮后烘干和明矾水浸泡的样品天麻多糖显著低于其他样品，仅为16.98%和18.29%，应该是天麻采用这两种工艺炮制过程中与水接触过多，从而造成了天麻多糖在天麻水煮和明矾水浸泡过程中部分溶解造成其含量降低；鲜天麻的多糖含量为21.33%，应该跟鲜天麻在等待测试过程中在4℃冰箱中保存时间过久有关。

图2 鲜天麻及其不同炮制品多糖含量(x±s，n=6)注：小写字母不同表示差异显著(p<0.05)。

3.2 鲜天麻及其不同炮制品天麻素及其苷元含量对比

《中国药典》[1]把天麻素和对羟基苯甲醇的含量作为判定天麻质量优劣的主要指标，规定天麻中两者的总含量不得少于0.25%。由表2可以看出不同炮制品之间天麻素及其苷元对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛差异显著，天麻素含量最高的为蒸制后“发汗”样品，为8.83 mg·g-1，应该是由于通过“发汗”过程中的一些酶促反应，一部分对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛和巴利森苷类再次转化成了天麻素；直接烘干的天麻素含量显著低于其他样品，仅为0.78 mg·g-1，但其对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛含量显著高于其他样品，其中对羟基苯甲醇高达9.63 mg·g-1，推测由于天麻未经杀青，在低温干燥过程中，酶活性一直较强，天麻体内发生着极活跃的酶解反应，天麻素被酶解成对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛，天麻素和对羟基苯甲醇的含量呈现基本相反的趋势，即天麻素的含量高的话，对羟基苯甲醇含量将减少，反之亦然；由表2可知，鲜天麻的天麻素含量也较低，为1.156 mg·g-1，但其对羟基苯甲醇的含量达5.32 mg·g-1，经蒸制和煮制杀青处理后天麻素含量显著升高，对羟基苯甲醇含量显著降低；另外水煮炮制品和明矾浸泡处理后天麻素的含量也降低，跟天麻素是苷类化合物易溶于水的性质有关。

表2 鲜天麻及其不同炮制品天麻素及其苷元含量(¯x±s，n=6)

4 结论

通过对比鲜天麻及其不同炮制品中多糖、天麻素及其苷元的含量，发现鲜天麻及其不同炮制品主要功效成分含量存在显著差异，其中以采用蒸制后“发汗”再烘干的样品天麻多糖和天麻素含量均为最高，说明“发汗”处理对天麻有效成分具有一定的良性影响，且“发汗”可以增加天麻体内部水分扩散速率，减少内部水分在天麻体中的滞留，加速天麻干燥速率，可根据需要应用于实际生产中。“发汗”过程中的温度、次数、含水量等因素对药材品质是否也有影响，围绕“发汗”过程与天麻品质形成的关键科学问题将在后续试验中进行，鲜天麻中和直接干燥天麻中对羟基苯甲醇含量最高，可根据所需目标成分有选择性的使用，但要注意，鲜天麻因酶活性高，有效成分降解快，采挖后应及时加工炮制。