血清IgE 在犬过敏性胃肠炎诊断中的应用

俞向前，程曼玲，文德亮，徐伟峰，郭志波，徐 蕾，孙福华，朱建国，叶承荣

（1.上海市浦东新区动物疫病预防控制中心，上海 201299；2.上海交通大学农业与生物学院，上海 200240；3.上海市浦东新区合庆镇集体资产管理，上海 201201；4.上海市浦东新区川沙新镇集体资产管理事务中心，上海 201202）

动物过敏性胃肠炎是过敏性(变态反应性)胃肠炎，即变应原与免疫球蛋白E(IgE)在胃肠道发生反应，患病动物可出现一系列胃肠道反应，如腹泻、呕吐、甚至便血等。过敏性胃肠炎发生原因很复杂，随着生活方式改变、生态环境及社会的变化，包括人类在内的动物过敏性胃肠炎发生呈上升趋势，日益引起医学界的关注。但与人的过敏性胃肠炎相比，犬过敏性胃肠炎远没有引起足够重视。笔者经过多年对浦东地区宠物诊所临床病例回顾性调查，并结合文献检索分析发现，临床上犬的胃肠炎很多，但诊断为过敏性的胃肠炎很少，很多临床胃肠炎都没有取得良好的治疗效果。社会的发展，特别是城市化进程加快，人类与宠物的生活环境甚至饮食结构都出现了趋同化，使得人们有理由相信，与人类一样，犬过敏性胃肠炎也应该是危害严重的疾病。过敏性胃肠炎缺乏症状特异性，在临床上尚未明确地提出诊断标准，目前主要根据患者胃肠道症状，同时结合食物过敏病史及症状，食物回避和激发试验来诊断。因此，对犬过敏性胃肠炎进行系统研究，调查分析其发病原因，检测发病犬血清IgE，对过敏性胃肠炎的明确诊断和治疗具有重要意义。

1 材料

1.1 样品来源

样品为2019~2020年度于上海浦东多家宠物诊所采集的有胃肠炎症状的犬的血清样品40份，于-20℃保存。

1.2 实验材料

犬（Canine）免疫球蛋白E（IgE）检测ELISA检测试剂盒（购自上海少辛生物有限公司）、酶标仪（Thermo Scientific）、离心机（Thermo Scientific）

2 实验方法

按照试剂盒说明书进行操作，检测样品中IgE含量。操作步骤如下：

2.1 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条。

2.2 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

2.3 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

2.4 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

2.5 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

2.6 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

2.7 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

3 结果

40例疑似过敏性胃肠炎犬的临床表现主要为腹泻、呕吐、便血、局部皮肤疹块等，根据初步临床诊断判断的诱因及针对性初步采取处理措施后，大多数的症状都有改善和缓解，因此诊断为过敏性胃肠炎。血清IgE浓度检测结果分显示，40例疑似过敏胃肠炎样品中，IgE浓度显著增加2例，升高33例,IgE过敏原检测分级评估（表1），具体的结果分析（表2），IgE分布情况显示（图1），出现过敏性胃肠炎的犬只，82.5%（33/40）的IgE检测值评估为高。

图1 IgE检测值分布图

表1 IgE过敏原检测分级评估

表2 疑似犬过敏性胃肠炎临床样品检测结果

4 讨论

食物过敏是过敏性胃肠炎的首要原因，已成为一个日益严重的问题。因对某些食物存在高敏状态，包括人在内的动物易出现过敏性胃肠病，幼龄动物最常见，全球估计有6%～8%的幼龄动物受到食物过敏的影响。常见的食物变态反应原除了乳蛋白外，还有小麦、鸡蛋、黄豆和花生，随着年龄的增长，对有些食物的过敏可逐渐消失。药物过敏也是一个常见因素。据文献报道，一内酰胺类抗生素(青霉素、头孢菌素)、氨基糖甙类、磺胺、解热止痛(水杨酸类)药均可导致人的急性过敏性胃肠炎。

过敏性疾病可以同时发生在不同的部位，虽然有着不同的临床表现，但它们同根共源，都是因为变态反应引起。过敏原是过敏性疾病的诱发因素.因此，详细询问宠物近期摄入的食（药）物，且改变食（药）物后症状是否缓解非常重要。虽然遗传因素是过敏性疾病发生的内在因素，但环境因素可能直接触发疾病的发生，所以远离过敏原和环境因素同样至关重要。

现代医学认为，过敏主要是由免疫机制介导的某种食物或药物等引起肠道内或全身的变态反应，大多是由免疫球蛋E（IgE）介导的免疫反应。人类婴幼儿过敏性胃肠炎患儿均有不同程度的高蛋白食物接触史，根据临床表现的不同，目前尚无特异性诊断方法，所以容易导致病情迁延，出现误诊或漏诊，影响婴幼儿的生长发育和健康。

目前，过敏性胃肠炎的的诊断主要依靠：（1）首先是疑似临床症状和病史。过敏性疾病患者均为特应性体质，遗传因素是过敏性疾病的内在因素。因此，详细询问个人和父母的过敏史均很重要。本文40例疑似过敏性胃肠炎犬的临床表现主要为腹泻（34例）、便血（14例）、呕吐（18例）、局部皮肤疹块（4例）、尿血（1例）这都符合过敏性疾病的临床症状指标。（2）血清IgE抗体，血清特异性IgE抗体测定，目前国内人医应用最广泛的检测方法，当IgE>0.35 U／mL时，可认为结果阳性，此法可检测数百种食物过敏原，有较高的敏感性和特异性。本研究对采自浦东新区部分宠物诊所的临床疑似样品进行检测，血清IgE浓度检测结果分析显示，40例疑似过敏胃肠炎样品中，IgE浓度升高且达到3级以上的为34例,占85%；（3）食物回避试验，首先告知病人记录基本症状和食谱2周，如果饮食回避2周后症状改善，这是诊断食物过敏的金标准。从本文表1中所列可以看出，根据症状怀疑诱因（摄入食物和药物）后，终止这些诱因后，过敏症状都得到不同程度的缓解；（4）病理组织学诊断：查外周酸性粒细胞。外周血、肠粘膜活检以及腹水等作为样品。人类过敏性胃肠炎的的组织学诊断已经很完善，无疑也是宠物诊断过敏性胃肠炎的一个发展趋势，这有待于今后进行进一步的数据积累，形成标准。

本文主要从症状观察、过敏原追踪及回避以及血清IgE检测三个方面对采自浦东新区几个宠物诊所的临床疑似样品进行了检测，通过确定临床症状、过敏原及免疫学检测指标，综合进行分析，明确了IgE检测在犬过敏性胃肠炎诊断中具有重要价值，为建立准确可靠的犬、猫过敏性胃肠炎诊断技术积累数据，进一步通过构建完整系统的疾病流行病学资料，为宠物诊所制定过敏性胃肠炎诊断、防治规程及推广应用，研制科学有效的防治技术提供理论依据。